RAGE PRES

courbée. Quelques gouttes suffisent. On laisse pendant deux heures le sérum se séparer du caillot, et on sectionne le tube au couteau à verre au moment de l'usage. Chez les animaux de laboratoire (lapins, cobayes), c’est par piqûre de l'oreille que l’on prélève le sang. Il est nécessaire parfois de piquer au niveau d’une des veinules que l’on voit par transparence.

Il faut que le sérum soit clair, exempt de globules. À. Fleming a montré en effet par des expériences très précises que le pouvoir opsonique est diminué dans une forte proportion quand le sérum contient des globules rouges. Pour ne citer qu'un exemple emprunté à A. Fleming, le pouvoir opsonique d’un sérum que l’on additionne par moitié de globules rouges tombe de 4,31 à 3,44.

Le sérum peut être conservé pendant une semaine à la glacière et même à la température du laboratoire sans que son pouvoir opsonique diminue sensiblement. Ce fait, établi par A. Fleming, permet d'utiliser dans une seule séance les sérums recueillis pendant plusieurs

jours ».

4° Mise en contact des leucocytes, des bacilles et du sérum. — « Possédant les trois éléments nécessaires, leucocytes, bacilles, sérum, on les met en présence d’après la technique suivante : |

On prépare un certain nombre de pipettes capillaires. Il est commode et économique d'employer pour cela des segments de tube de verre de 10 à 12 centimètres de long, c’est-à-dire la moitié de la longueur des seg-

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ments de tube qui servent à fabriquer les pipettes Pasteur ordinaires. On fait avec chaque segment deux. petites pipettes. On sectionne le bout du tube capillaire au couteau à verre, pour que l'extrémité en soit bien régulière, et, à deux centimètres de cette extrémité, on marque un petit index au crayon bleu. On adapte à la pipette une tétine spéciale en caoutchouc qui sert à l'aspiration. On aspire, jusqu'à ce qu’elle affleure l’index, une petite colonne de l’émulsion bactérienne. On laisse pénétrer une bulle d’air. On aspire une égale quantité d’émulsion globulaire. On laisse passer une nouvelle bulle d'air. On aspire enfin une égale quantité de sérum. On mélange le tout sur une lame de verre par des mouvements successifs de refoulement sur la lame et d'aspiration dans le tube capillaire, la pipette étant tenue verticalement pour éviter l’interposition de bulles d’air dans la colonne du liquide. On scelle à la petite flamme du bec Bunsen l'extrémité du tube contenant le mélange ».. |

Pour ne pas risquer d’altérer les bacilles et les leucocytes, il est indispensable d'exécuter le prélèvement des trois éléments, en pipette capillaire, dans l’ordre suivant : émulsion bacillaire, leucocytes, puis sérum.

Le tube qui contient le mélange est mis pendant 20 minutes à l'étuve à 37° (1). Puis, après un nouveau mélange sur la lame de verre par aspiration et refoule-

ment, on fait des étalements.

(1) Une petite étuve spécialement construite à cet effet facilite beaucoup l'opération de chauffage (Biological incubator, chez Hearson, Londres).

5° Étalements sur lames et coloration. — « Les étalements demandent un soin particulier. On emploiera, suivant le conseil de Wright, des lames à surface dépolie, soit par ébullition prolongée dans la potasse, soit par frottement au papier émeri. On pratique l’étalement avec l'extrémité d’une lame dont les angles ont'été abrasés au couteau à verre, et dont la tranche rodée au papier émeri est légèrement concave. La lame sur laquelle on veut faire l’étalement étant placée sur la table (et non tenue en main), on dépose au voisinage d’une de ses extrémités une goutte dont la grosseur est calculée de manière que l’étalement n’atteigne pas l'extrémité opposée de la lame. C’est, en effet, à l'extrémité de l’étalement que se trouvera le plus grand nombre des leucocytes.Cette partie de la technique exige un certain doigté que l’on ne tardera pas à acquérir par l'exercice. »

Les préparations sont fixées par l'alcool absolu, ou l'acide osmique. Le bacille tuberculeux sera coloré à froid pendant vingt minutes en mettant la préparation dans la solution de fuchsine phéniquée de Ziehl qui contiendra seulement 3 pour 100 d'acide phénique. On décolore ensuite par l'alcool acétique jusqu'à ce que la préparation n'ait plus qu’une teinte rose pâle. Après lavage à l’eau, on colore le noyau des leucocytes à l’hématoxyline de Boehmer ou au bleu Borrel.

6° Numération. — On passe en revue 100 leucocytes polynucléaires. On note le nombre de bacilles contenus dans chaque leucocyte, et l’on inscrit o pour chaque

leucocyte qui n’a rien phagocyté.

Si l'émulsion bacillaire n’a pas été faite à une dilution convenable, la phagocytose est trop abondante ou ne l’est pas assez, ce qui devient très souvent une cause d'erreur dans la numération. Il faudra donc recommencer l'expérience en cherchant à obtenir une émulsion qui donne une moyenne de 2 à 4 bacilles phagocytés par leucocyte sous l'influence d’un sérum normal.

Dans la numération, ilne faudra pas tenir compte des amas de leucocytes. On ne devra noter que les globules blancs distincts et bien colorés.

Certains polynucléaires contiennent une grande quantité de bacilles qu'il est impossible de compter. Dans ce cas, Wright et ses élèves ont adopté le chiffre 9; le nombre de bacilles peut être supérieur à 9, il est tout de même noté 9.

7° Pouvoir opsonique et indice opsonique. — On établit le pouvoir opsonique ou quotiènt phagocytaire de chaque sérum, en divisant par 100 le nombre de microbes comptés dans 100 polynucléaires. On établit l'indice opsonique des différents sérums étudiés en divisant leur pouvoir opsonique par celui d'un sérum témoin qu’on utilise dans toute la série des expériences.

Soit le sérum témoin N dont le pouvoir opsonique égale par exemple :

200 bacilles 100 polynucléaires

et les sérums à étudier À et B. Nous avons, par exem-

ple:

= 4x Er hoo bacilles 100 polynucléaires

Pouvoir opsonique de À —

100 bacilles 100 polynucléaires

Pouvoir opsonique de B —

emma .

Les indices opsoniques seront :

Pouvoir opsonique de À __ 4

Pour le sérum À — : s == Pouvoiropsonique deN 2

Pouvoir opsonique de B 1 Pouvoir opsoniquedeN 2

Pour le sérum B —

L'indice opsonique en clinique.

La valeur de la méthode de Wright repose sur lhypothèse de la spécifité des opsonines d’un sérum. D’après d’assez nombreux auteurs, cette hypothèse est exacte en ce qui concerne la tuberculose, qu'il s'agisse de faits cliniques ou expérimentaux.

La recherche de l'indice opsonique a été pratiquée au cours de la tuberculose surtout pour contrôler l'effet de la tuberculinothérapie telle que l’a conçue Wright.

Ce n’est que secondairement que la méthode opsonique a été utilisée dans un but diagnostique et surtout pronostique. |

L'indice opsonique des sérums normaux oscille pour le bacille de Koch entre 0,80 et 1,20 (Wright); il serait de 0,96 d’après Bulloch.

Dans les tuberculoses latentes et dans les formes locales, osseuses, articulaires, ganglionnaires, l'indice

serait toujours au-dessous de la normale, sans toute-

Sub

fois être très bas : 0,4 à 0,8 d’après Wright et Douglas. Sur 150 cas de lupus, Bulloch note une moyenne de 0,75 ; les chiffres extrêmes qn'il rencontresonto,2 et 1,4, avec 75 pour 100 des cas inférieurs à 0,8.

Dans la tuberculose pulmonaire, l'indice présente une fixité bien moindre que dans les tuberculoses locales ; 0,3 et 1,8 sont les chiffres extrêmes trouvés par Wright; ceux d'Urwick atteignent 2,6. Dansles formes aiguës ou subaiguës et dans les septicémies bacillaires, la mesure de l'indice opsonique donne des chiffres qui présentent un écart considérable.

Mais un indice opsonique pris isolément n’a en luimême aucune signification. L'étude de la courbe 0psonique a seule un intérêt, comme l'ont montré les recherches cliniques de Baldwin(r), de Bradshaw et Glynn (2), d'Imann (3), de Jousset (4), de Levaditi (5), dé Bulloch(6), de. Strubell(z), de Wolff et Reiter (8), de Szaboky(9).

L'indice opsonique des tuberculeux ne reste pas cantonné entre 0,80 et.1,20 comme le fait celui des sujets sains. Il dépasse ces limites. Une courbe constamment

un peu plus basse que la moyenne signifierait qu'il

(1) Bazowin. Proceed. of the Pathol. Soc. of Philadelphia, 1907, p. 168. (2) Brapsnaw et GLynn. Med. ch. Journ., t. XVI, p. 115.

(3) Imaxw. The Practitioner, t. XI, p. 6r, London, 1906-07.

(4) Jousser, Bull. méd., 15-18 mai. 1907.

(9) Levaprri. Presse méd., 31 août et 7 sept. 1907.

(6) Bucvocu. Trans. of the Royal med. chir. Soc., 1908, p. 6g.

(7) Sreusec. Münch. Med. Woch., n° 44, p. 2172, 1907.

(8) Wore et Rrirer. Deutsche Med. Woch., 8 juillet 1909.

(9) Szasoky. Zeülschrift f. Tub., Bd. XIII, h. 1.

— {3 Me

s’agit d’une tuberculose chronique ou locale stationnaire. Une courbe élevée indiquerait un arrêt dans la marche de la maladie ou la guérison d’une infection tuberculeuse antérieure. Enfin une courbe qui présente des oscillations serait un signe d’une très grande valeur en faveur d'une tuberculose en évolution dont l’activité se mesurerait à l'amplitude des oscillations. Un indice opsonique constamment très bas aurait la même signification.

Ainsi, d’une façon générale, les oscillations spontanées sont un signe de tuberculose pulmonaire. Dans les tuberculoses locales, on n'obtient ces variations de l'indice opsonique que par des procédés artificiels : si la lésion est facilement accessible, comme la tumeur blanche d’une articulation, un léger massage ou'une constriction de quelques minutes modifie considérablement la valeur de l'indice opsonique. D’après Wright, ces manœuvres feraient entrer dans la circulation des poisons élaborés dans le foyertuberculeux ; cette cautoinoculation » qui fait baisser sensiblement la valeur de l'indice serait très utile au diagnostic en permettant

d'affirmer la nature tuberculeuse de la lésion.

Valeur pronostique. — L'étude de la courbe opsonique est, pour beaucoup d’auteurs, le procédé de laboratoire qui donne le plus d'indications pour le pronostic. Wright considère sa valeur comme absolue.

Une courbe sans oscillation, un indice stable, quelle qu’en soit la valeur, est d’un bon pronostic; il indique

un arrêt dans la marche de la tuberculose, une ten-

dance à sa localisation. Un indice variable, alternativement haut et bas, indique au contraire une évolution des lésions ; il est par conséquent d’un pronostic défavorable.

Wright a appliqué l'étude de la courbe opsonique au controle de la fwberculinothérapie. Toute courbe s’abaisse (phase négative) à la suite d’une injection de tuberculine ; elle ne s'élève au-dessus de l'unité qu'au bout d’un certain lemps bien défini (phase positive). C’est pendant cette période qu'il est utile d'entretenir et de fortifier par une nouvelle injection l'amélioration acquise. L'indice sert à fixer le moment où l'injection est utile et à se rendre compte si l’organisme peut en tirer profit. D’après Meakin et Wheeler (1) la stabilité de l'indice au voisinage de l'unité, en même temps qu’elle indique un arrêt dans la marche de la maladie, autorise une thérapeutique par la tuberculine.

L'effet de la tuberculine sur l'indice opsonique des tuberculeux a fait l’objet de travaux intéressants (2)qui démontrent in vivo comme in vitro (3) l'influence très nette de la tuberculine sur l’abaissement du pouvoir opsonique des sérums. M. Manaud a constaté d'autre part que la tuberculine à 1 pour 100 mélangée en parties égales à un sérum, avait, au bout d’une heure à l'étuve,

enlevé au sérum à la fois ses propriétés opsoniques

(1) Meaxin et Wagecer. Brit. med. Journ,, p. 1590, nov. 1905. . (2) GLarke. The Lancet, 20 juin 1907.

(3) A. Maxaup. Soc. de Biol., 3 avril 1909.