CHAPITRE IV RÉACTIONS DE PRÉCIPITATION

La réaction de précipitation est caractérisée par la formation d’un précipité résultant de la rencontre d’un antigène avec son anticorps. |

Elle fut appliquée pour la première fois au diagnostic de la tuberculose par Bonome (1). Cet auteur recueillant des extraits de-bacilles tuberculeux humains ou bovins, ou bien des extraits d'organes tuberculeux, les mettait en présence de sérums d'animaux et d'hommes. Il prétendit avoir obtenu ainsi des précipités assez nets avec les sérums tuberculeux pour pouvoir, non seulement poser un diagnostic, mais même reconnaitre l’origine humaine ou bovine de l’infection. Les sérums d’individus sains n'auraient jamais donné de précipités. Bertarelli (2) est arrivé au même résultat.

Mais Dammann et Stedeferer puis Zwick (3) qui ont essayé cette méthode au laboratoire et en clinique, se

sont élevés contre sa valeur en soutenant qu’on n’obtient

(1) Bonowe. Centr, f. Bakt. Orig., 1907, XL, p. 391. (2) BerrareLLi. Riv. di ig. e di Sani Publ.. t. XVIIT, 1907. (3) Zwicx. Folia Serologica, 1909, IX, p. 172.

CEE

pas de précipitation quand on emploie un extrait bacillaire qui ne précipite’ pas spontanément.

Szaboky (x), Stoerck (2) et Porter trouvent la précipito-réaction souvent positive avec le sérum des sujets sains.

Porter (3) a recherché cette réaction avec le sérum de 381 tuberculeux dont 25 avaient subi un traitement tuberculinique, et 301 sujets non tuberculeux cliniquement. Sa technique consistait à mélanger dans un tube parties égales d'extrait bacillaire au cinquantième, et de sérum au vingtième ; l'extrait bacillaire était un filtrat sur porcelaine d’une émulsion tuberculeuse additionnée ou non /de phénol. Le mélange était mis à l’étuve à 37° pendant 12 heures.

L'auteur trouva une précipito-réaction positive chez:

12 pour 100 des sujets sains ;

35 pour 100 des tuberculeux au début :

60 pour 100 des tuberculeux chroniques ;

20 pour 100 des tuberculeux aigus ou très avancés.

Les sérums des tuberculeux qui avaient suivi un traitement tuberculinique présentaient une réaction positive.

En outre, ayant comparé entre elles les réactions de précipitation et de déviation du complément (Bordet-

Gengou), Porter n'a pas trouvé de relation entre les

(1) Szasokyx. Zeitsch, f. Tuber., 1909, XIV, p. 276. (2) Srorrok. Wien. Klin. Wochens., 1909, LIX. (3) A.-E. Porter. Journ. of infect. diseases, 1910, VII, p. 87.

OS deux phénomènes ; dans la plupart des cas où il y avait précipitation, il ne constatait pas de déviation du complément. |

En France, MM. Bezançon et de Serbonnes (1) ont étudié la réaction en se servant, comme antigène, d’un filtrat obtenu en passant sur bougie une émulsion contenant 3 grammes de bacilles tuberculeux humains broyés dans 60 centimètres cubes d’eau salée physiologique, et mise pendant une demi-heure à r120°. Ils diluaient au dixième cet extrait bacillaire pour le mélanger aux sérums d'expérience. Le mélange était laissé une heure à l’étuve et douze heures à la température du laboratoire. Les auteurs sont d’avis qu’il est préférable de ne pas éhauffer le sérum, les précipitines paraissant altérées par la chaleur.

Les résultats obtenus dans ces conditions ont fait penser à MM. Bezançon et de Serbonnes que la précipito-réaction n'avait aucune valeur diagnostique ; elle leur paraît dénuée de toute spécificité dans la tuberculose. Ils ont constaté un énorme précipité chez les pneumoniques.

Cependant, ces auteurs ont remarqué que, parmi les tuberculeux, ils n’obtenaient de précipitation vraiment abondante que chez les résistants et aussi à la fin des poussées aiguës. Il y aurait au contraire une diminution du pouvoir précipitant au début des rechutes.

Il serait donc permis, jusqu’à un certain point, de

(x) F. Bezancon et H. pe Sersoxnes. Journ. de Physiol. et de Pathol. génér., 1909, p- 1097, et Soc. d'éludes scient, sur la tub., janvier 1910.

LETULLE. A

he REMBT

considérer un précipité abondant comme un élément de favorable augure et il « paraîtrait légitime de parler de précipito-pronostic ». |

Pour M. Milhit, la réaction est dénuée de toute valeur dans la tuberculose. Il la trouve surtout intense chez les typhiques et les pneumoniques dontlautopsie ne révèle aucune lésion tuberculeuse. D'autre part, il constate que le pouvoir précipitant d’ün sérum est diminué pendant la digestion, à l'inverse du pouvoir opsonique qui est augmenté (1).

MM. Vincent et Combes (2)se sont servis de la réaction de précipitation pour mettre en évidence les préeipitines spécifiques dans le liquide céphalo-rachidien des malades soupconnés de méningite tuberculeuse. Ils mélangent cent gouttes de liquide céphalo-rachidien frais à une goutte de tubereuline brute; le tube est placé à l’étuve à 38° ou à 55° pendant douze heures. Si la méningite est tuberculeuse, il se forme un louche très net. Malheureusement cette réaction n’est pas spécifique : Les auteurs l’ont vue positive dans des méningites d'origines diverses, dans la syphilis cérébrale (Vincent, Straus et Teissier) et dans la fièvre typhoïde. Toutefois une réaction négative sera en faveur d’une

méningite non tuberculeuse.

À la suite d’une communication de MM. Calmette et

(1) Mrcurr. Revue de la Tub., juin 1910.

(2) Vixcenr et Comes. Soc, de Biol., 5 juin et 18 déc. 1909.

bi

Massol(1) sur le pouvoir précipitant vis-à-vis des diverses tuberculines du sérum de bovidé immunisé par des inoculations intraveineuses de bacilles bovins cultivés sur bile de bœuf glycérinée, André Jousset, puis Vallée et Finzi constatent également ce pouvoir précipitant des sérums d'animaux hyper-immunisés et essayent de l'utiliser comme moyen diagnostique.

Ici la méthode consiste à mélanger un sérum précipitant (et non plus de la tuberculine) à la sérosité dont on suspecte l’origine tuberculeuse.

M. Jousset(2) obtient son sérum précipitant par des inoculations lentes et progressives à divers animaux (lapins, chèvres, ânes) de bacilles humains morts, puis vivants. Le sérum de ces animaux donne un précipité volumineux après une heure d’étuve à 38° en présence des diverses tuberculines ou des cultvres filtrées de bacilles de Koch, comme l’ont montré MM. Calmette et Massol. Le précipité maximum est obtenu en faisant le

sérum 4

mélange dans la proportion suivante : === 8 FE bouillon 1

» OU, ce

sérum 40

: ; la tuberculine tuberculine :

qui revient au même,

brute étant du bouillon de bacilles réduit au dixième. Le volume du précipité s’abaisse si l’on augmente le facteur sérum ; il se produit probablement une redissolution secondaire. D'autre part, lorsqu'on met en présence d’un sérum précipitant des quantités progres-

(1) A. Cazmezre et L. Masso. Acad. des Sciences, 8 nov. 1909. (2) André Jousser. Soc. de Biol., 18 déc. 1909.

sivement décroissantes de tuberculine, il arrive un moment où la précipitation n’existe plus. C’est la limite de sensibilité du sérum à la tuberculine. Certains de ces sérums peuvent déceler jusqu’à 1/10 000° de tuberculine brute.

Dans ses essais d’application de la méthode des sérums précipitants au diagnostic de la tuberculose chez l'homme, M. Jousset opère de la facon suivante : 8 gouttes de sérosité suspecte sont mélangées à 32 gouttes de sérum précipitant ; les résultats sont lus après une heure d’étuve à 38°. La réaction s’est montrée positive pour les 6 sérums de phtisiques cachectiques et pour les 4 liquides de pleurésies bacillaires examinés. Elle a été une seule fois positive (et 2 fois douteuse) sur 6 liquides céphalo-rachidiens de méningites tubereuleuses, et négative pour les 3 sérums de tuberculeux au début. Enfin, elle s’est montrée négative pour 6 sérums de malades non tuberculeux et 6 liquides céphalo-rachidiens de méningites non tuberculeuses. L'auteur pense que cette réaction est trop inconstante pour être envisagée comme une méthode d’avenir.

MM. Vallée et Finzi(1) ont appliqué la précipitoréaction à la recherche de la tuberculose des bovidés. Ils ont trouvé très fidèle la méthode qui consiste à mélanger 4 parties de sérum à examiner et 1 partie de bouillon filtré de culture bacillaire.

En outre, comme André Jousset en clinique humaine, | \

(1) H. Vaurée et G. Frvzr. Soc. de Biol., 11 déc. 1909, 22 janvier et

12 février 1910.

ces auteurs ont fait agir un sérum précipitant sur des sérums de bovidés et de chiens tuberculeux. En mélangeant un volume de sérum d’animal tuberculeux à deux volumes de sérum de cheval hyperimmunisé par des injections intraveineuses de bacilles tuberculeux humains, ils obtenaient, après 2 heures à l’étuve à 38° et .2 heures à la température du laboratoire, la formation d’un trouble homogène qui se condensait bientôt et formait des flocons fins, blanchâtres, restant longtemps en suspension. La réaction recherchée sur 33 bovins tuberculeux et 39 bovins sains, a été d'accord dans tous les cas sans exception avec le diagnostic contrôlé soit par l’autopsie, soit par l'épreuve de la tuberculine. Elle a aussi été très nette avec le sérum de 4 chiens expérimentalement infectés de tuberculose ; 3 chiens témoins reconnus indemnes à l’autopsie n’ont donné aucune précipitation.

MM. Vallée et Finzi en concluent que, « lé sérum des animaux infectés de tuberculose renferme un antigène ‘précipitable par les anticorps du sérum de cheval hypervacciné ».

Dans leurs expériences ils ont étudié, parallèlement à la précipitation du sérum d’animal tuberculeux par le sérum de cheval hyperimmunisé, la méthode de précipitodiagnostic qui consiste à mettre en présence le sérum du tuberculeuxetune dilutionde tuberculine au dixième. Les deux procédésleur ont donné « des indications parallèles, également nettes. Ils se complètent mutuellement et méritent d’être utilisés de concert, disent MM.Vallée et Finzi, car l'intensité de la précipitation obtenue avec

ER Von

l’une ou l’autre méthode est en rapport, semble-t-il, avee l’étendue et la gravité des lésions. Dans le cas de lésions limitées et récentes, le sérum du malade ne précipite que lentement la tuberculine, mais fournitavec le sérum de cheval hyperimmunisé une réaction rapide et plus évidente que la première. Lorsque le malade offre des lésions anciennes et étendues, les réactions. inverses sont enregistrées.

La réaction précipitante aurait donc, pour M. Vallée, une très grande valeur. Cet auteur et M. Guinard ont même cru pouvoir l'utiliser pour obtenir des précipités de tuberculine sensibilisée, analogues aux vaccins de Besredka et susceptibles de rendre des services dans le traitement de la tuberculose (1).

Malheureusement, les recherches précédentes n’ont pas été confirmées par celles que MM. Calmette et Massol (2) effectuèrent sur. plusieurs centaines d’échantillons de sérums d'hommes et d’animaux tuberculeux, sur le sérum de bovidés de l’Institut Pasteur, hyperimmunisés contre le bacille bovin, et sur les sérums provenant de chevaux hyperimmunisés par M. Vallée contre le bacille d’origine humaine. Leurs expériences leur ont permis d'établir les faits suivants :

« 1° Le sérum non chauffé ou chauffé des sujets tuberculeux (homme, bovidé ou cobaye) ne fournit que

très exceptionnellement un précipité en présence de

(1) H. Vazzée et L. Guinarn. Acad. des Sciences, 2 mai 1910. (2) À. Gazmerre et L. Masso. Acad. des Sciences, 25 juillet 1910.

solutions de tuberculine ou de bouillon filtré de cultures de tuberculose bovine ou humaine. Dans l’une de nos séries d'expériences, sur 12 sérums de malades phtisiques et sur 5 sérums dé bovidés saisis à l’abattoir pour tuberculose, que nous avons étudiés parallèlement en présence de tuberculine (extrait bacillaire préparé suivant technique précédemment décrite)(1}), la réaction de précipitation n'a été trouvée positive qu’une seule fois : il s'agissait d’un bœuf tuberculeux en très bon état de santé apparente.

« 2° Le sérum de bovidé ou de cheval hypervacciné contre le bacille bovin ou humain, et parfois aussi le sérum des sujets tubereuleux, fournissent fréquemment un précipité très net lorsqu'on les dilue de 5 volumes d’eau distillée. Ce précipité peut être séparé par centrifugation ; 100 grammes de deux de nos sérums en ont donné respectivement 908 milligrammes et 914 milligrammes. Il est soluble dans l’eau salée physiologi- ‘que. Dans les mêmes conditions, le sérum de bovidé normal donne un précipité impondérable.

« La même réaction de précipitation par l’eau distillée s’observe souvent avec les sérums de sujets atteints de diverses maladies infectieuses (fièvre typhoïde, pneumonie; l’un de nous l’a observée à Alger, avec le Dr Gillot, dans des cas de typhus exanthématique).

« Cette réaction n’est donc pas spécifique : elle révèle apparemment la mise en liberté d’une proportion

plus ou moins grande de globulines.

(x) Soc. de Biologie, 13 novembre 1909, p. 528.