IT. — TECHNIQUES

A. — PROPRIÉTÉS DES MUCROPROTÉIDES.

Il existe dans un très grand nombre de tissus animaux et dans diverses sécrétions glandulaires des substances du groupe de la Mucine (mucus, mucoïdes) caractérisées au premier abord par la viscosité de leurs solutions aqueuses, et, après précipitation, par leur affinité pour certains colorants. Une longue série de recherches exposées par Levene (1925) a conduit à considérer ces substances et celles qui constituent la plus grande partie de la chondrine des cartilages, comme des mucoprotéines. Au point de vue de leur structure chimique, les mucoprotéines sont des substances complexes comportant une partie protéique, quantitativement importante, différant vraisemblablement de l’une à l’autre de ces substances et un groupement prosthétique constitué dans tous les cas par un radical hydrocarboné caractéristique, bien défini, l’acide chondroïtine ou l’acide mucoïtine-sulfurique.

Toutes les substances du groupe des mucoprotéines possèdent un ensemble de propriétés communes; elles donnent les réactions générales des substances protéiques, mais elles sont précipitables à froid par l’acide acétique dilué et le précipité ne se redissout pas dans un excès modéré d'acide. Elles sont solubles en milieu alcalin et les bases faibles (chaux, baryte), à demi-saturation, les dissolvent sans les altérer, tandis que les bases fortes (soude, potasse) provoquent à froid une hydrolyse. ,

Les mucoprotéines se comportent comme des acides faibles et sont généralement très peu solubles dans l’eau neutre; quelquesunes cependant se dissolvent dans l’eau distillée ou dans l’eau salée.

Les solutions aqueuses de ces substances sont très visqueuses et filantes, même pour de très faibles concentrations. Enfin, leur hydrolyse donne, lorsqu'elle est poussée assez loin, une amino-hexose réduisant la liqueur de Fehling.

Les constituants protéïques des mucoproteines ont été peu étudiés; il en est tout autrement, depuis les travaux de Krükenberg (1884), de Môrner (1889) et de Schmiedeberg (1891), jusqu'à ceux de Neuberg (1902), de Levene et ses collaborateurs (1913-1925), pour le groupe prosthétique hydrocarboné sous ses deux formes connues : l’acide chondroïtine sulfurique et l’acide mucoïtine sulfurique.

Diverses interprétations ont été données pour la constitution de ces deux acides; nous adopterons icile shéma donné par Levene. Le fait caractéristique est que le radical hydrocarboné complexe commun à ces substances est conjugué avec l’acide sulfurique. Ce radical comporte quatre constituants dont les proportions sont moléculaires; ce sont une hexosamine, l’acide glycuronique, l’acide acétique et l’acide sulfurique. Le radical hydrocarboné est facilement séparé de la partie protéique par une hydrolyse alcaline modérée.

L’acide chondroïtine sulfurique, particulièrement abondant dans la chondrine, est une substance amorphe, soluble dans l’eau en toutes proportions en donnant des solutions visqueuses et de nature colloïdale. Il est nettement acide et est insoluble dans les solvants organiques et particulièrement dans l’acide acétique glacial; cette propriété, comme on le verra plus loin, est utilisée pour sa séparation. L’acide chondroîïtine sulfurique ne réduit pas la liqueur de Fehling, il est attaqué et décomposé en ses quatre constituants par l’hydrolyse acide, en présence de HCL à chaud. Cette hydrolyse commence par libérer le groupement sulfurique qui se transforme en SO‘H?; on obtient ainsi la chondroïtine, quine possède pas encore le pouvoir réducteur et qui ne possède pas de groupement aminé libre. En poussant plus loin l’hydrolyse chlorhydrique on détache le groupement acétique! et l’on obtient un disaccharide : la chondrosine, qui est constituée par l’union d’une molécule d’acide glycuronique et d’une molécule d’aminohexose. Ce disaccharide se dissout comme

1. Cet acide peut être caractérisé et titré sous forme de sels d’argent.

16 H. GARRAULT. — ÉTUDE HISTOCHIMIQUE

un cristalloïde, il ne réduit pas la liqueur de Fehling; sous forme de chlorhydrate, il donne une poudre blanche, soluble dans l’eau en toutes proportions, soluble dans l’acide acétique, insoluble dans l’alcool et les solvants organiques.

Une hydrolyse chlorhydrique plus forte, très prolongée, en présence de chlorure d’étain permet enfin d'isoler l’hexosamine sous forme de chlorhydrate cristallisé, tandis que l’acide glycuronique est détruit.

Le mode d'union des différents constituants de l’acide chondroïtine sulfurique a donné lieu, depuis les travaux de Schmiedeberg, à diverses interprétations; toutefois, des raisons d’ordre chimique conduisent à admettre, pour le mode d'union des quatre constituants de la molécule, un shéma qui a été précisé par Levene. Cet auteur admet que deux molécules se trouvent unies l’une à l’autre par le carboxyle de l’acide glycuronique. L’acide chondroïtine sulfurique pourrait donc être représenté de la manière suivante :

CH 0 250 0H CH? —0—S0?—OH | OH—CH OH—CH | H—C H— C————— : on | H—C OH H—C OH (e) | (e) CH3CO —HNCH | CH3CO — HNCH EC H—C | —0— 0 (e) O loHH OH H H—C—C—C—C—C—COOH H—C—C—G—C—CG—C—COOH | HOHH H | ÉPOATE

L’acide mucoïtine sulfurique présenterait une constitution analogue et la principale différence entre les deux composés résiderait dans la nature de l'hexosamine. Celle-ci est une chondrosamine (2 galactosamine ou 2 talosamine) dans le cas de l’acide chondroïtine sulfurique — tandis qu’elle serait une chitosamine (2 glucosamine ou 2 mannosamine) dans le cas de l’acide mucoîtine sulfurique.

1. Le traitement par l’amalgame de soude permet de pousser l’hydrolyse, sans détruire l'acide glycuronique qui peut alors être isolé et caractérisé sous forme de ses dérivés.