Monographie de Levene

2. On a utilisé une écrémeuse, en prenant non le bol à plateaux mais le bol séparateur.

mière hydrolyse qui aboutit à la séparation de la partie protéique et du radical hydrocarboné; dans ce cas l’acide mucoïtine ou chondroïtine sulfurique se trouve en solution sous forme d’un sel de potasse.

À partir de ce moment on obtient la séparation de l’acide en combinant les méthodes décrites par Schmiedeberg et par Levene pour l’extraction de l'acide chondroïtine sulfurique à partir du cartilage.

Ces auteurs ont attaqué par la potasse, non pas la substance mucoïde préalablement séparée, mais le tissu lui-même. Schmiedeberg additionne la solution de potasse de 1 à 3 volumes d’alcool, de manière à précipiter le sel potassique de l’acide chondroïtine sulfurique, tout en laissant les protéines en solution!. L'opération est ensuite répétée jusqu’à ce que ni le précipité ni le liquide ne donnent la réaction du biuret. Alors, seulement, le précipité est redissout dans l’eau et neutralisé par HCL. Une dernière précipitation alcoolique permet d'isoler l’acide chondroïtine sulfurique.

La méthode plus récente de Levene et Laforge comporte la neutralisation, puis l’acidification acétique de la solution potassique; ensuite on concentre au bain-marie en présence d’un excès de carbonate de baryum. Une décantation et une filtration permettent d'éliminer les protéines et le carbonate de baryum, l’acide chondroïtine sulfurique est précipité dans le liquide clair par l’addition de huit volumes d’acide acétique glacial.

On a presque toujours utilisé la précipitation alcoolique du sel de potasse de l’acide chondroïtine sulfurique. Le précipité obtenu est redissout dans la potasse afin d’éliminer aussi complètement que possible les protéines — et précipité de nouveau à l'alcool. Ceci permet de le redissoudre dans une très petite quantité d’eau distillée; la solution aqueuse, claire et visqueuse est alors additionnée de huit volumes d’acide acétique glacial ajouté en agitant constamment de manière à précipiter l’acide chondroïtine ou mucoïtine sulfurique. Le précipité obtenu dans ce cas a l’aspect de grumeaux gélatineux et transparents qui tombent et se séparent facilement par filtration.

Le précipité d'acide chondroïtine sulfurique est lavé à l'alcool, réduit en poudre et séché. Cette poudre est ensuite épuisée plusieurs

1, Cette technique est analogue à celle qui permet la précipitation du glycogène par la méthode de Pfulger. +

29 H. GARRAULT. — ÉTUDE HISTOCHIMIQUE

heures dans un extracteur de Soxhlet à l’éther, pour éliminer les dernières traces d’acide acétique. On obtient alors une poudre blanche, hygroscopique, qui doit être conservée à l’abri de l'humidité.

30 Caractérisation du radical hydrocarboné.

Les conditions dans lesquelles on peut précipiter l’acide chondroiïtine ou mucoïtine sulfurique sont déjà par elles-mêmes assez caractéristiques; il en est de même de l’aspect des solutions obtenues avec ce précipité convenablement lavé : ce sont des solutions visqueuses et nettement acides au tournesol, précipitables par un excès d’alcool. Toutefois il est nécessaire de pousser plus loin l’étude en mettant en évidence, d’une part l’existence du groupement sulfurique, d’autre part celle d’un corps soluble réduisant la liqueur de Fehling.

L'hydrolyse chlorhydrique permet d’atteindre ce double résultat. Un poids connu de l’acide en poudre est mis en suspension dans une solution de HCL à 50 p. 100, additionnée d’un excès d’acétate de baryum et chauffé pendant quatre à cinq heures au bain-marie bouillant sous un réfrigérant*.

Au cours de l’hydrolyse on observe la formation d’un précipité lourd de SO,Ba, indiquant que le groupement sulfurique s’est déjà détaché de la molécule. Le liquide s’éclaircit progressivement; lorsque l’opération est terminée, on sépare par décantation et centrifugation le liquide et le précipité; le liquide est déféqué et l’aminohexose réducteur titré par la méthode de G. Bertrand. Le précipité, lavé à l’eau, puis à l’alcool est calciné.

Les proportions théoriques comptées en SO,H, et en glucose sont, d’après le poids moléculaire de l’acide, calculées d’après le shéma de Levene, de 21 p. 100 de SO,H, et 38 p. 100 d’hexose réducteur.

La méthode de séparation effectuée comme il vient d’être décrit ne peut être considérée comme quantitative, mais les rapports de ces deux constituants sont assez intéressants.

Ces opérations donnent une indication qui, jointe aux faits précédemment décrits, permettent d’affirmer que l’on se trouve en présence de l’un des deux acides : chondroïtine ou mucoïdine sulfurique.

1. Nous utilisons un ballon sur lequel le réfrigérant s'adapte directement par un rodage.

D'une part les petites quantités de produit obtenu, même à partir de grandes quantités de tissu, n’ont pas permis de pousser plus loin les recherches.

On a essayé pourtant de faire cristalliser l’hexosamine sous forme de chlorhydrate, mais on n’a pas obtenu de résultats satisfaisants faute de quantité suffisante.

Dans certains cas enfin, le matériel étant trop limité, on a dû supprimer le stade de séparation de l’acide et faire directement l’hydrolyse sulfurique sur le mucoïde brut, afin de mettre en évidence le pouvoir réducteur.