E. — ÉTUDE CHIMIQUE

19 Extraction de la substance mucoide.

La solubilité dans l’eau distillée de la substance mucoïde, signalée précédemment, est insuffisante pour obtenir une bonne séparation. Nous avons utilisé l’extraction à l’eau de chaux, diluée au demi, jusqu’à épuisement des fragments de tissu muqueux préalablement broyés et réduits en pulpe fine!.

Les différents liquides d’extraction, visqueux et filants, sont débarrassés des résidus par filtration sur une passoire fine et par

1. Pour éviter la présence de mucus d’origine épithéliale les têtes de Poissons utilisées étaient, après savonnage, brossées à l’eau de chaux diluée pour éliminer le mucus épidermique et les fragments de tissus étaient débarrassés autant qu’il était possible non seulement du tégument et des cartilages mais encore des tubes de Lorenzini qui les

pénètrent dans certaines régions (ils sont, comme on le sait, remplis d’un mucus dense d’origine ectodermique).

centrifugation. Pour environ 1 kilogramme de tissu frais haché, l'extraction presque complète des mucoïdes est obtenue avec 9 à 6 litres d’eau de chaux diluée. Les substances mucoïdes sont précipitées par une quantité d'acide acétique glacial, juste suffisante pour acidifier nettement le liquide d’extraction!.

Le précipité apparaît généralement sous forme de flocons très fins qui tombent lentement; on peut hâter la séparation en ajoutant un peu d’alcoo!l ou d’acétone. Le précipité est alors séparé par décantation, puis par centrifugation; il est ensuite lavé et redissout dans une petite quantité d’eau de chaux afin d'éliminer les diverses substances insolubles. Une nouvelle précipitation acétique donne un précipité qui est lavé, traité par les alcools, puis mis en suspension dans l’alcool-éther, et recueilli par filtration après déshydratation convenable. Après séchage à 37° on obtient la substance mucoïde sous la forme d’une poudre blanche.

Cette séparation a été effectuée sur le tissu muqueux rostral de Raja batis et de Oxyrhina Spallanzanii.

Quoique de telles séparations ne puissent être considérées comme quantitatives, il est intéressant de considérer quelques chiffres obtenus

Avec Raja batis une des extractions a porté sur 1 070 grammes de tissu frais et l’on a obtenu 17 grammes de mucoïde, ce qui représente 1,59 p. 100 du poids frais de tissu, soit 15,9 p. 100 du poids sec.

Avec Oxyrhina Spallanzanii 310 grammes de tissu frais ont fourni 3 grammes de mucoïde, soit 0,98 p. 100 du poids frais et 9,8 p. 100 du poids sec.

De tels chiffres représentent des valeurs minima dues aux pertes inévitables survenues au cours des diverses manipulations et aussi à la difficulté de rassembler toute la totalité du précipité dont une partie demeure souvent à l’état de très fine suspension.

20 Caractérisation de la substance mucoide.

Pour la caractérisation de ce mucoïde, nous avons suivi dans ses grandes lignes la technique indiquée dans le chapitre 11. La sépa- 1. Bien que les mucoïdes ne se dissolvent pas dans un excès d’acide acétique, il ne

paraît pas indiqué d'augmenter inutilement la proportion de cet acide car des protéines peuvent se redissoudre et stabiliser la suspension qui tombe mal.

64 H. GARRAULT. — ÉTUDE HISTOCHIMIQUE

ration du groupe hydrocarboné a été réalisée sur des échantillons de 10 grammes environ de mucoprotéine sèche; celle-ci était agitée et dissoute dans 400 centimètres cubes de lessive de potasse à 2 p. 100. S'il existe un résidu insoluble, celui-ci est recueilli et repris par une nouvelle quantité de lessive de KOH, jusqu’à ce que l’on soit sûr qu'il ne cède plus aucune substance soluble. Les liqueurs potassiques sont réunies, centrifugées, le liquide clair est additionné de 3 à 5 volumes d'alcool à 959 et après agitation, on laisse tomber le précipité floconneux qui s’est rapidement formé et qui représente le sel de potasse de l’acide chondroïtine ou mucoïtine sulfurique. Le liquide alcalin surnageant, qui garde en solution les substances protéiques proprement dites, est décanté et le précipité est recueilli par centrifugation. Il est purifié par une nouvelle précipitation alcoolique, une nouvelle dissolution dans la potasse 2 p. 100, puis lavé à l’alcool et séché.

Dans le but de séparer l’acide, le sel de K est redissout dans la plus petite quantité possible d’eau distillée, centrifugé pour éliminer les quelques résidus insolubles et le liquide visqueux et clair est additionné de huit volumes d’acide acétique glacial. On obtient alors un précipité gélatineux, pâteux, très analogue, par son aspect et ses propriétés, à celui obtenu quand on sépare, suivant la même technique, l'acide chondroïtine sulfurique du cartilage.

Ce précipité est séparé par filtration et celle-ci s'effectue d'autant mieux que la concentration initiale du liquide étant plus forte, le précipité est plus dense; puis, il est lavé à l’alcool, déshydraté et enfin épuisé à l’éther afin d’éliminer les dernières traces d’acide acétique. 10 grammes de mucoïde en poudre ont permis d'obtenir 1 gr. 6 de ce produit, qui représente environ 16 p. 100 du poids du mucoïde initial.

La suite des opérations et l’aspect du précipité indiquent que ce produit est vraisemblablement l’acide chondroïtine ou mucoïtine sulfurique : il se dissout dans l’eau en donnant une solution visqueuse, nettement acide au tournesol. Son étude a été poursuivie au moyen de l’hydrolyse chlorhydrique en présence d’acétate de baryum, pendant plusieurs heures, à 100°. La marche de l’hydrolyse correspond aux indications précédemment données et l’on obtient d’abord, au sein du liquide fortement coloré en brun, un

dépôt blanchâtre et lourd de SO,Ba, mettant ainsi en évidence le groupement sulfurique caractéristique des acides précités. L’hydrolyse terminée, le précipité barytique est séparé par centrifugation et lavé; le liquide clair est déféqué au nitrate mercurique et le sucre réducteur est titré.

Les chiffres obtenus pour Raja batis par ce titrage et par la pesée du SO,Ba, calculés en glucose et en SO,H,, donnent 19 p. 100 de sucre réducteur et 3,3 p. 100 d’ SO,H, Rappelons que ces valeurs approximatives ne peuvent donner qu’une indication.

Les très faibles quantités de tissu préorbital prélevées chez la Roussette n'ont pas permis d’en faire l’étude chimique complète; toutefois on a isolé le mucoïde brut et celui-ci a été soumis directement à l’hydrolyse sulfurique. Le dosage du sucre réducteur calculé en glucose a donné des chiffres de l’ordre de 20 p. 100.

Cette étude chimique, effectuée sur les tissus muqueux de deux espèces de Plagiostomes, permet d’affirmer que la substance dissoute dans le liquide interstitiel du tissu conjonctif muqueux est bien une mucoprotéine. Les caractères généraux et les propriétés histochimiques constatées chez d’autres espèces, dont les quantités trop petites n’ont pas permis les mêmes recherches, permettent de supposer que la constitution de leurs tissus muqueux est identique.