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surrénales fraîches (mouton ou bœuf) ont été rapidement pulpés et jetés dans 500 grammes d'alcool à 90° bouillant, en prolongeant l’ébullition pendant une demi-heure environ. Le liquide était ensuite décanté et remplacé par une égale quantité d'alcool qui était également porté à l’ébullition. Enfin le marc séparé du liquide a été épuisé par l’eau bouillante. J’ai obtenu ainsi deux liqueurs teintées en jaune un peu brun: la première, alcoolique, renfermant presque tout le chromogène sans albuminoïdes ; la seconde, aqueuse, contenant aussi un peu de chromogène avec les sels et les matières extractives insolubles dans l’alcool fort.

Toutes les deux possèdent en effet les réactions de ce chromogène, elles verdissent par le perchlorure de fer, la teinte virant au violet après addition de carbonate de soude; elles passent au rouge sous l'influence de la tyrosinase, de la teinture d’iode et des autres oxydants dont j'ai déjà parlé au chapitre de la chimie. Mais ces liqueurs alcooliques ou aqueuses n'ont plus la propriété de la macération capsulaire, c’est-àdire qu'elles ne rougissent plus au contact de l’air quel que soit le temps pendant lequel on prolonge l'exposition. Les solutions ayant été portées à une assez haute température en présence de l’alcool, il semblerait résulter de ces faits que le chromogène ne peut seul s’oxyder à l’air et que la coloration rouge doit prendre naissance par l'intermédiaire d’une action diastasique. Il restait donc à caractériser l’existence d’une oxydase, malheureusement les recherches poursuivies dans ce but n’ont donné que des résultats négatifs. Je suis arrivé, il est vrai, à isoler un principe bleuissant très légèrement la teinture de gaïac, mais sans action appréciable sur les autres réactifs des oxydases ou sur la tyrosine et surtout absolument incapable de produire une absorption d’oxygène, même faible, ou d’oxyder le chromogène de la glande. La troisième hypothèse, paraissant la seule possible, mérite d’être étudiée avec quelques détails.

Si on ne trouve pas d’oxydase dans les capsules, on y rencontre au contraire, comme dans les autres organes, des matières albuminoïdes qui exercent une action énergique sur le système « gaïac + H°0° » qu'elles bleuissent fortement, sur-

tout en milieu légèrement acide. De plus, le mélange d’une solution de chromogène avec une petite quantité de ces anaeroxydases et quelques centimètres cubes d’eau oxygénée prend une teinte rose qui s'accentue de plus en plus et devient rouge ; à ce moment la couleur du liquide est tout à fait comparable à celle que les agents oxydants, comme l'iode, le permanganate de potasse ou la quinone, font naître lorsqu'ils réagissent sur le chromogène. Il est dès lors permis de supposer qu'une action du même genre doit avoir lieu dans le suc des capsules surrénales exposé à l'air.

On sait en effet que beaucoup de substances organiques sont capables de modifier les propriétés chimiques de l'oxygène de l'air et peuvent engendrer de petites quantités d’eau oxygénée ou de peroxydes analogues. Richardson a montré qu'il s’engendre de l'eau oxygénce toutes les fois que l'urine fraiche est exposée au soleil en présence de l'air; le peroxyde formé est stable lorsque l'urine à été stérilisée, mais il est rapidement v'anismes.

$ Dans le cas qui m'occupe, on ne peut évidemment songer à

détruit lorsque la liqueur renferme des micro-or

déceler le bioxyde d'hydrogène puisque les macérations organiques renferment des substances capables de le catalyser au fur et à mesure de sa formation; mais il est possible de retrouver la trace de son existence en caractérisant les peroxydes auxquels il a pu donner naissance en se décomposant. C’est à ce résultat que je crois être parvenu en m'aidant d’un réactif tres sensible indiqué autrefois par Schônbein et qui n’est autre que du carmin d'indigo décoloré par le perculfure d'hydrogène. Celui que j'ai utilisé avait la composition suivante :

Faurdistillée MEN 50 centimetres Cubes.

Solution de carmin d'indigo au 1/20. X gouttes.

Acide chlorhydrique pur. . . . . . X —=

Solution de polysulfure de potas-

Sum AU 1/44 IE ELLES CONS IPONPIUECOIOrEr

De préférence, il faut faire agir la liqueur que l’on veut étudier sur un ou deux centimètres cubes de ce réactif dilué dans quatre ou cinq volumes d’eau distillée bouillie. Convenablement préparé et seulement au moment du besoin, l'indigo

décoloré est ramené au bleu par une trace de corps oxydants, de peroxydes tels que l'acide chromique, le bioxyde de manganèse, l'oxyde puce, le perchlorure de fer, l’eau oxygénée additionnée d’une très petite proportion de sulfate ferreux exempt de sesquioxyde. Pour être caractéristique, la coloration bleue doit apparaître immédiatement, car le réactif, en laissant déposer du soufre, peut bleuir seul lorsqu'il reste exposé à l'air pendant quelque temps.

Or, les macérations de capsules surrénales (de bœuf ou de mouton), dans l’eau simple ou en présence de sels neutres (NaCI, (AH*?S0*) donnent la réaction des peroxydes, surtout lorsqu'elles sont restées quelques jours à la lumière dans des flacons incompiètement remplis et à la condition de ne pas avoir été soumises à l’ébullition. Il est à peine besoin d’ajouter que des dissolutions des mêmes sels, placées dans des conditions identiques, n’ont jamais exercé une action semblable sur l’indigo décoloré.

Il semble donc que la coloration rouge formée dans le tissu ou le suc des capsules surrénales lorsqu'ils sont exposés à l’air, n’est pas due seulement à l’action de l'oxygène puisque dans ces conditions le chromogène ne prendrait qu'une teinte violette; il faut plutôt rechercher la cause de ce fait dans une réaction plus complexe et admettre qu’il y a formation d’eau oxygénée et décomposition ultérieure de celle-ci en même temps qu’une oxydation prend naissance pour faire virer le chromogène à la couleur rouge. Ce serait alors un phénomène tout à fait comparable à ceux que l’on peut déterminer au moyen d’un macéré d’organe et de quelques gouttes d’eau oxygénée.

Causes de ces réactions oxydantes et nature des anaeroxydases.

Comment se produisent ces oxydations provoquées par les ferments indirects, doit-on les attribuer aux propriétés oxydantes spéciales qui seraient conférées à l'oxygène mis en

ne

liberté lorsque ces agents sont en contact avec l’eau oxygénée ? Telle est la question qu’il me reste à examiner. Pour la résoudre il suffisait de faire barboter l’oxygène, ainsi déplacé, dans les réactifs tels que la teinture de gaïac étendue d’eau ou une solution de gaïacol; les mêmes expériences furent également reproduites en ajoutant un peu d’eau oxygénée aux liqueurs précédentes. Or, dans aucun cas, les bulles gazeuses ne produisirent de coloration appréciable quelque prolongé qu’ait été le dégagement d'oxygène. Il est done bien évident que les phénomènes d’oxydation déterminés par les anaeroxydases, lorsqu'elles se trouvent mélangées à l’eau oxygénée, ne sont pas le fait de l'oxygène rendu libre ; ils sont dus sans doute à l’action simultanée du ferment et de l’eau oxygénée. Dans ce cas l’un ne pourrait agir sans le secours de l’autre et il se passerait ainsi un fait analogue à la digestion peptique qui ne peut avoir lieu sans la présence de l’acide chlorhydrique, à la fermentation indigotique dans laquelle le ferment oxydant ne peut agir sans l'intervention d’une base soluble ou insoluble, etc. D'ailleurs, la nature de ces matières albuminoïdes peut aussi éclairer la manière de concevoir leur mode de fonctionnement.

Ces agents, qui jouent le rôle d’oxydants à la condition de leur adjoindre l’eau oxygénée qui à elle seule n’agirait pas non plus, peuvent être rangés de par leurs propriétés dans la classe des ferments. Ils sont, en effet, solubles dans l’eau ou les solutions salines, insolubles dans l'alcool, non dialysables, détruits par la chaleur et ils produisent des réactions intenses, relativement à leur masse qui peut être extrêmement faible. C’est pourquoi M. Bourquelot les avait d’abord nommés « ferments indirects », depuis il leur a attribué le nom d’anaeroxydases; cette dernière appellation semble préférable à la première, car elle rend mieux compte de ce fait que les substances en question peuvent provoquer des oxydations même en l’absence de l'air, ce que les oxydases vraies sont incapables de faire. Maintenant, ces substances ont-elles quelque chose de particulier dans leur constitution? C’est ce que j'ai essayé de déterminer. Pour cela, les solutions organiques chauffées à 70° ou bien celles que l’on obtient par macération du coagulum

Le 87 —

alcoolique dans l’eau, ont été additionnées de quatre à cinq volumes d’alcool à 90°, le précipité formé a été recueilli et lavé à l'alcool faible (6o°) pour enlever les sels minéraux. Le produit obtenu après deux précipitations successives du même genre était desséché à 100° et brûlé avec un mélange oxydant composé de carbonate de soude et d’azotate de soude purs; la masse obtenue étant dissoute dans l’eau distillée donne une liqueur contenant une notable quantité de phosphore à l’état d'acide orthophosphorique. Pour le foie, la rate et le rein les proportions de phosphore ont été trouvées égales 4 gr. 49, 0 gr. 99 et I gr. 10 pour 100. De plus, on y rencontre aussi un poids très appréciable de fer ; j'ai dosé dans le foie o gr. 020 de fer pour 100 grammes de tissus frais et dans la rate o gr. 058.

ganes peu actifs, comme les ovaires, ce métal ne s’y décèle qu’à l’état de traces ; il est inutile d'ajouter qu'il s’agit du fer autre que celui qui est dû à la présence de l’hémoglo-

bine. Or, les glandes contenant les anaeroxydases les plus

Pour les or

actives paraissent être aussi celles qui contiennent le plus de fer; ce sont la rate d’abord et le foie ensuite !. Il semble donc que ces ferments sont des composés voisins sinon identiques aux nucléo-albumines, puisque le phosphore fait partie de leur composition; la présence du fer les rapproche de l’hémoglobine dont le pouvoir oxydant est également assez énergique en présence de l’eau oxygénée. En sorte qu’il est permis de supposer que dans ces ferments le fer joue un rôle analogue à celui que M. Bertrand attribue au manganèse contenu dans les oxydases du règne végétal. D'ailleurs, ce côté de la question paraît avoir été entrevu par Spitzer, qui a montré que la décomposition de l’eau oxygénée pouvait être attribuée à des corps nucléo-protéiques ferrugineux que l’on trouve dans les tissus.

Quelle est l'utilité de ces substances si intéressantes ? peuvent-elles produire des oxydations dans l'organisme, ou doiton supposer qu’elles concourent à un rôle de défense, comme on l’a prétendu pour les oxydases vraies ? C’est là une question difficile à résoudre pour l'instant. Après ce qui a été dit

r. Voir thèse Guillemonat, Paris, 1896.

EU précédemment, il est évident que les anaeroxydases ne peuvent produire à elles seules des oxydations; néanmoins de telles réactions ne sont pas impossibles puisque l'organisme contient très probablement de l’eau oxygénée (d’après Schünbein), elles seraient même certaines si on pouvait démontrer la présence de cet agent. Malheureusement ce point paraît difficile à élucider ; on a vu, en effet, que les tissus décomposeraient le bioxyde d'hydrogène au fur et à mesure de sa forma-

tion.