CHAPITRE II

Recherches personnelles — Etude d’une levure nouvelle :

SACCHAROMYCES SARTORYI n. sp.

La levure qui fait l'objet de ce chapitre à été isolée le 25 mars 1926 chez un malade âgé de 31 ans, entrant à l'hôpital pour bronchopneumonie et congestion pulmonaire. Les crachats ne contiennent pas de sang mais sont très purulents. L'examen des urines ne décèle ni sucre, ni albumine.

Prélèvement des crachats. — Le prélèvement comporte quelques points de technique qu'il est nécessaire de rappeler. Nous avons toujours recueilli les crachats dans un récipient aseptique, sans trace d’antiseptique, après avoir fait gargariser le malade avec de l'eau bouillie. Nous recommandions aussi au malade de ne pas y mettre de salive.

Afin de recueillir les expectorations plus directement et éviter les contaminations de provenance buccale, nous avons également employé le procédé dit « Procédé du Miroir de Rosenthal ». Il consiste à mettre en place, au fond du pharynx, comme pour un examen laryngoscopique, un miroir assez large et stérilisé. On fait alors tousser le malade, ce qu'il fait souvent spontanément, et on récolte ainsi sur la glace l’exsudat purulent qui y est projeté. Le crachat recueilli, nous avons dû le débarrasser de la salive, s’il en est imprégné, soit en

le disposant sur du papier filtre qui boit la partie liquide et laisse les parties compactes, soit en le prenant à l'aide d’une pince et en l’agitant plusieurs fois dans l’eau.

Examen bactériologique des crachats. — L'examen bactériologique des crachats a été effectué un très grand nombre de fois et chaque jour, pendant toute la durée de la maladie qui dura trois mois et demi. Cet examen n’a jamais révélé la présence de bacilles tuberculeux, d’oospora acido résistant (actinomyces), pas plus que de microbes tels que Pneumocoque de Talamon, Fraenkel, Pneumobacilles de Friedlander ; par contre, nous avons constamment trouvé la présence d'une levure dont nous donnerons une description complète en même temps qu'une étude approfondie dans un instant.

Albumino-réaction. (Réaction de Roger et Lévy VALENSI, 1909). — Nous avons également pratiqué l'albumino-réaction.

Pour effectuer cette réaction, nous avons recueilli les crachats fraîchement émis dans un récipient bien sec, en évitant qu'ils ne contiennent une trop grande quantité de salive ou de sécrétion naso-pharyngée. Dans un verre à pied, nous les additionnons d'une quantité équivalente d’eau distillée. Pendant quelques minutes, nous triturons avec une baguette de verre pour diviser la masse et rendre le mélange à peu près homogène. Nous séparons la mucine en la coagulant

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et nous ajoutons quelques gouttes (4 à 6 pour 5 cmc. de crachats) d'acide acétique, mais sans excès pour ne pas empêcher, ultérieurement, la précipitation de l'albumine. Il faut cependant en ajouter assez, une quantité insuffisante laisserait passer la mucine dont la présence serait gênante pour la recherche de l’albumine. Nous filtrons sur papier Chardin. Nous vérifions l’absence de mucine ou de nucléo-albumines dans le filtrat. Dans le filtrat réparti dans des tubes, nous recherchons l'albumine par la chaleur et l'acide azotique, selon la technique employée dans les analyses d'urine. Nous recherchons également l’albumine du filtrat par le ferrocyanure de potassium (solution Do): À cet effet, nous versons un centimètre cube de cette solution dans un tube à essais, nous filtrons directement sur le réactif les crachats traités par l'acide acétique : le liquide filtrant, plus léger, surnage sans se mélanger au réactif. Dans le cas de présence d’albumine, un anneau opaque se forme à la limite des deux liquides.

La réaction a été constamment négative, c'est d’ailleurs le cas pour les bronchites aiguës et chroniques, et aussi dans l’asthme. Nous avons effectué ces recherches car, envisagée au point de vue diagnostique, cette réaction ne peut être utilisée que pour chercher à différencier la tuberculose chronique de la bronchite chronique non tuberculeuse.

Examen cytologique des crachats. — A l'examen

= Jp

cytologique des crachats du malade, on aperçoit surtout des polynucléaires intacts ou altérés, avec un aspect réticulé ou granuleux du protoplasme, disparition plus ou moins complète des granulations, pycnose des noyaux (globules de pus). Quelques eosinophiles (mono ou polynucléaires), que la coloration par l’hématéine-

eosine met bien en valeur.

ÉTUDE BOTANIQUE de la LEVURE

Description de la levure dans les crachats. —

Elle consiste en éléments ovalaires, parfois arrondis, sans capsule, et mesurant 3 & 2 à 4 u de diamètre. Mais ce ne sont là que des dimensions moyennes car on en observe aussi de tailles très variables. Nous n'apercevons jamais de formes filamenteuses n1 de formes ascosporées. Tous ces éléments bourgeonnent activement.

Cette levure croît facilement sur les principaux milieux employés en mycologie, et son bourgeonnement s’y effectue comme chez les Saccharomyces : à l’une des extrémités de la cellule, se forme un bourgeon séparé de la cellule mère par un collet plus ou moins marqué. Le bourgeon reste quelque temps accolé à son élément d'origine ou bien se sépare très vite, laissant parfois une cicatrice ombiliquée très visible.

Généralement, sur les milieux solides, un seul bourgeon se forme ; parfois, cependant, sur des cultures datant de quelques mois, on voit des éléments plus gros, à membrane épaisse, arrondis et ressemblant à des chlamydospores, donner plusieurs bourgeons à une de ses extrémités, ou encore, un seul bourgeon à chacun de ses pôles, ou deux bourgeons à une extrémité, un seul à l’autre. Les différentes cellules filles naissant d'un même élément, peuvent ne pas se séparer immédiatement, restér unies et continuer, chacune, à bourgeonner. On a ainsi de petits chapelets de levures très

spéciaux comme forme. Mais la dislocation de ces chapelets ne tarde pas à s'effectuer et nous voyons alors la forme typique de la levure, c'est-à-dire une cellule bourgeonnante unique.

Nous n'avons jamais rencontré, à côté de cette forme typique, ronde ou légèrement ovalaire, des éléments allongés ni de filaments proprement dits.

Il est à noter aussi que, dans les cultures âgées, surtout sur milieux solides, on ne trouve pour ainsi dire plus de bourgeonnement et que presque tous les éléments présentent la forme arrondie.

Optimum cultural. — L'optimum de croissance a été déterminé à l’aide de cultures sur carottes placées respectivement à des températures de + 16°, 220, 250, 349, 370, 419, 430, 450, L'optimum cultural se trouve compris entre + 25 et + 34. À 37 et 38°, la levure végète encore très bien. À + 419, son développement n'a pas lieu.

Conditions d'apparition du voile. — Les conditions d'apparition du voile sur bouillon pepto-glycérinéglucosé, sont les suivantes : à + 40 et à + 389, pas de voile ; à + 36-370, voile très léger formant une très mince pellicule au bout de huit jours ; à + 26-289, pellicule très mince après cinq jours ; à + 20-229, pas de voile après un mois ; à + 15-18, pas de voile, même après un mois.

Examen microscopique du voile. — Les voiles

ones

jeunes sont formés d'éléments ovalaires et d'éléments sphériques, mais aucune des cellules ne s’étire en boudins et ne s'associe de manière à former une sorte de faux-mycélium. Dans le dépôt de fond, on ne constate que des cellules sphériques non encapsulées.

Formation des ascospores. — Nous avons suivi, pour essayer d'obtenir la sporulation de cette levure, la technique de ENGEL-HANSEN.

D'une façon générale, pour qu'une levure sporule, il est nécessaire que ses cellules soient jeunes et bien nourries. Il faut qu'elles aient accumulé dans le protoplasme des réserves suffisantes pour assurer la formation des ascospores. Nous avons donc employé un milieux de choix, en l'occurrence, le moût de bière. Il est nécessaire de cultiver la levure dans ce milieu nutritif que l'on renouvelle deux ou trois fois. Cette opération a pour but de rajeunir la levure. Cette technique effectuée, il est indispensable de soumettre l'organisme à l'inanition. Dans ces conditions, la levure se trouvant dans l'impossibilité de se multiplier par bourgeonnement, sera susceptible de former dans ses cellules des ascospores. Suivant la technique de ENGEL-HANSEN, nous avons déposé notre levure rajeunie : ΰ sur un bloc de plâtre ; 2° sur bloc d'argile cuite ; 3° sur bloc de porcelaine poreuse.

Trois conditions sont nécessaires et même indispensables pour obtenir la sporulation : 1° le libre accès

d'air; 2° une température favorable ; 3° un certain degré d'humidité.

Pour réaliser toutes ces conditions, nous placions le bloc de plâtre dans un cristallisoir dans lequel nous versions une certaine quantité d’eau distillée. Celle-ci a pour but de former au fond du récipient une couche suffisamment épaisse pour atteindre environ la moitié de la hauteur du bloc de plâtre. Le bloc doit seulement s’imbiber d’eau. Notre cristallisoir étant fermé à l’aide d'un couvercle non rodé afin d'assurer librement l'accès de l'air. L'appareil ainsi préparé était stérilisé à l’autoclave à + 115° pendant une demi-heure. Les cellules levures rajeunies étaient ensuite recueillies et déposées sur bloc de plâtre, sur bloc d'argile et sur bloc de porcelaine poreuse. Cette opération est assez délicate. Nous avons d'ailleurs répété un très grand nombre de fois ces opérations car nous nous sommes servis successivement de moût liquide et de moût gélatiné. Ici, une observation qui a son importance : lorsque nous nous servions de moût de bière liquide, nous prenions soin de le filtrer : nous raclions, à l’aide d’un scalpel ou d’un fil de platine flambé, la levure qui restait déposée sur le filtre et nous la placions sur la surface du bloc de plâtre (1). Lorsque nous employions le moût

(1) Il est facile de fabriquer soi-même ce bloc de plâtre. Il suffit de mélanger deux volumes de plâtre en poudre aux trois quarts du volume d'eau. On

pétrit ce mélange et on lui donne une forme cylindrique ou aplatie à l’aide d'un moule (tube creux, verre de montre, verre de boîte de Pétri, etc.).

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gélatiné, nous raclions avec un scalpel une petite portion de la culture que nous disposions sur le bloc. Nous fermions ensuite le cristallisoir à l’aide de son couvercle et nous placions à l'étuve entre -+ 25 et - 34° (optimum de croissance). D'autres expériences étaient faites concurremment, à des températures de + 25 et + 302.

Nous avons également employé le dispositif imaginé par Hansen et qui a reçu le nom de flacon de HANSEN. On évite ainsi la facile infection du cristallisoir par les bactéries. C'est un flacon cylindrique dont le col est fermé par un capuchon rodé à l’émeri et surmonté d’un tube que l'on bouche par un tampon de coton qui permet l'aération. Un tube latéral inséré sur un côté du flacon est fermé par un tampon d'amiante. On introduit dans l'intérieur du flacon, en ouvrant le capuchon, une couche de plâtre en bouillie sur laquelle on scelle un bloc cylindrique de plâtre. On stérilise ensuite le flacon dans un autoclave à + 1152. L'opération terminée, on ouvre le capuchon et, à l’aide d’un fil de platine, on introduit rapidement un fragment de la levure à étudier. On referme le capuchon et on met ensuite de l’eau stérilisée dans le fond du flacon au moyen du tube latéral.

En dernier lieu, nous avons employé également la technique de HOLM et POULSEN et substitué le bloc de plâtre au papier buvard imprégné d'une solution faible de lactose.