CHAPITRE II

ASPERGILLOSE PULMONAIRE PRIMITIVE OU TUBERCUL' ISE

ASPERGILLAIRE.

A. — Technique suivie pour l'étude des cas d'aspergillose pulmonaire primitive (tuberculose aspergillaire).

Au début de cette étude, il nous paraît indispensable de rapporter la technique que nous avons suivie dans notre thèse de 1 893 sur la tuberculose aspergillaire : c'est elle qui nous a permis de découvrir la maladie chez nos deux gavcurs de pigeons ; c'est elle qu'ont suivie MM Gaucher et Sergent pour arriver au diagnostic chez leur malade ; c'est elle que nous avons employée dans notre étude des peigneurs de cheveux ; c'est elle qui permettra aux observateurs futurs de découvrir de nouveaux cas.

L'examen de nos deux malades nous ayant révélé tous les signes cliniques que MM. Dieulafoy, Chantemesse et Widal, ainsi que M. Potain, avaient si nettement indiqués (toux, essoufflement, expectoration purulente, petites hémoptysies à répétition, signes de bronchite et d'induration pulmonaire), nous avons d'abord essayé de trouver dans les crachais l'aspergillus fumigatus et de l'isoler ensuite, tout en voyant

s'il était possible d'y déceler le bacille de Koch.

L'examen des crachats, par la fuchsine de Ziehl et la double coloration par le bleu de Lœt'fler, répété vingt fois pour chaque malade à des jours différents, ne nous a jamais montré de bacilles chez le premier malade, tandis qu'il nous a permis d'en rencontrer deux fois sur vingt examens chez le second : nous verrons plus tard de quelle importance était pour nous ce résultat.

Nous avons ensuite cherché l'aspergillus dans les crachats, et, sur les vingt examens faits pour chaque malade, nous avons rencontré douze fois chez le premier malade et dix fois chez le second des fragments de mycélium avec des spores disséminées çà et là dans la préparation ; les crachats, fixés par la chaleur sur une lamelle, étaient colorés par une faible solution aqueuse de safranine.

Étant ainsi convaincu que ces crachats contenaient un champignon, nous nous sommes efforcé de l'isoler, pour être sûr que ce champignon était bien l'agent pathogène cherché, l'aspergillus fumigatus : pour cela, nous avons ensemencé, sur des tubes de gélose, les crachats venant d'être expectorés par les malades, comme nous l'avions lu dans l'observation de M.Potain. Pendant 26 jours, nous avonsmis àl'étuve à 37 degrés les tubes de gélose ensemencés avec les crachats du premier de nos malades ; nous avons ainsi cultivé 42 tubes de gélose, et toujours sans résultat. Nous avions, au bout de deux ou trois jours, de superbes colonies de staphylocoques blancs et

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dorés et de streptocoques, mais jamais nous n'avons pu voir pousser une colonie d'aspergillus. Une seule de nos cultures nous a donné un champignon qui avait pris naissance entre deux colonies de streptocoques ; après ensemencement sur gélose glycérinée glycosée, nous avons reconnu qu'il ne s'agissait que d'un mucor. L'insuccès de nos recherches tenait à ce que nous nous étions servi d'un milieu légèrement neutre qui facilitait la culture des microbes banals, et qui rendait impossible dès le début celle de Faspergillus fumigatus ; des cultures sur bouillon, répétées quinze fois, ne nous avaient pas donné d'ailleurs de meilleurs résultats.

C'est alors que nous eûmes l'idée d'employer dans nos recherches un milieu favorable au développement des champignons, et réfractaire à celui des staphylocoques et des streptocoques que Ton rencontre si souvent dans les crachats ; nous avons abandonné les milieux légèrement alcalins pour utiliser les milieux acides, et, parmi ces milieux, nous avons donné la préférence au liquide de Raulin, liquide acide, composé seulement d'éléments minéraux. Nous avons réparti le liquide de Raulin dans des tubes que nous avons stérilisés ensuite à l'autoclave à \ 1 5 degrés. Trente-six heures après l'ensemencement, le premier tube présentait à la surface du liquide une culture blanchâtre, culture composée manifestement de mycélium, qui, en quarante-huit heures, se couvrait de spores et prenait une teinte vert bleuâtre tendre, puis vert foncé un peu sale, se changeant, au bout de quatre jours, en une teinte brunâtre de

noir de fumée, ce qui pouvait faire penser qu'il s'agissait d'aspergillus fumigatus. Ces cultures sur liquide de Raulin devenaient pour nous le moyen de séparation des champignons d'avec les autres microbes et nous les avons toujours employées par la suite. Nous avons fait 42 ensemencements sur ce liquide pour le premier malade, et nous avons trouvé dix-huit fois de l'aspergillus fumigatus, trois fois de l'aspergillus glaucus, deux fois de l'aspergillus fiavescens et deux fois de l'aspergillus niger. Pour le second malade, nous avons, sur 51 ensemencements, trouvé vingt-sept fois de l'aspergillus fumigatus, deux fois de l'aspergillus glaucus, deux fois de l'aspergillus niger, et deux fois du ba'cillus subtilis ; dans tous les autres cas les cultures n'ont rien donné. On voit donc que nous avons pu isoler l'aspergillus fumigatus une fois sur deux dans les crachats des malades.

Cet aspergillus, que nous étions ainsi parvenu à séparer, était-il bien l'aspergillus fumigatus ? Pour résoudre la question nous nous sommes procuré deux échantillons d'aspergillus fumigatus authentique, provenant, l'un du laboratoire de M. Roux, à l'Institut Pasteur, l'autre du laboratoire de MM. Chantemesse et Widal, et nous avons étudié parallèlement l'aspect de ces différents aspergillus sur les divers milieux : sur liquide de Raulin, sur moût de bière, sur gélose faite avec du moût de bière, sur gélose ordinaire, sur gélatine, sur pain humide, sur pomme de terre, nous avons pu constater la similitude absolue des quatre variétés de champignons que nous culti-

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vions, et qui présenlaient les caractères sur lesquels nous avons insisté plus haut quand nous avons fait l'histoire de l'aspergillus fumigalus.

Pour conclure à l'identité des quatre espèces, il fallait encore aller plus loin, et comparer leur action pathogène sur les animaux ; pour cela nous avons entrepris une série d'expériences sur les pigeons et sur les lapins. Nous nous servions de cultures d'aspergillus faites sur gélose au moût de bière, et laissées huit jours à l'étuve ; les spores avaient eu ainsi le temps de bien se développer. On prenait ces spores dans les tubes avec un fil de platine, et on en faisait une émulsion dans du bouillon, jusqu'à ce que le liquide devînt suffisamment trouble : on prélevait un centimètre cube et demi de cette solution avec une seringue stérilisée, et on faisait l'injection pour les pigeons dans la veine axillaire, et pour les lapins dans les veines de l'oreille. Quatre pigeons et quatre lapins ont été ainsi successivement traités.

Les résultats furent tous positifs et nous prouvèrent de la façon la plus nette que, sur les divers milieux, l'identité de forme et d'aspect de l'aspergillus venant de nos deux malades et de celui de MM. Chantemesse, Widal et Roux, était une même identité de nature, puisque notre champignon tuait les pigeons en trois à quatre jours, et les lapins en six et huit jours, tout comme les champignons témoins, et que c'était bien à leur action pathogène qu'avaient succombé ces animaux, puisque nous retrouvions le parasite dans leurs organes (foie, pou-

mon, rein): ces organes cultivés sur liquide de Raulin ont donné en quatre à cinq jours des cultures pures du champignon, sans association d'autres microbes. L'identité avec l'aspergillus fumigatus se trouvait ainsi complète, et c'était bien h cet agent pathogène que nous avions affaire.

Une autre question immédiatement se posait : cet aspergillus fumigatus se rencontrait-il spécialement dans les crachats de nos deux malades, ou bien pouvait-on le trouver chez tous les individus atteints d'affections chroniques des voies respiratoires, tuberculose pulmonaire ou bronchite chronique? Sa présence n'était-elle pas due à une cause fortuite, à une contamination étrangère, par l'air de nos salles ou celui du laboratoire dans lequel s'effectuaient nos recherches? Nous avons tenu à élucider tous ces points, et, pour cela, nous avons faitun grand nombre d'ensemencements de crachats de tuberculeux avérés d'abord, des poussières des salles et du laboratoire ensuite. Voici quels en ont été les résultats : sur 64 ensemencements de crachats faits dans notre salle d'hommes et pris chez des tuberculeux avancés, pas une seule fois nous n'avons obtenu l'aspergillus fumigatus; nous avons rencontré onze fois l'aspergillus niger, huit fois le bacillus subtilis, six fois l'aspergillus glaucus, trois fois l'aspergillus flavescens, et dans 37 cas les résultats ont été négatifs. Sur 36 ensemencements faits à la même époque dans la salle des femmes, nous avons trouvé cinq fois l'aspergillus niger, quatre fois le bacillus subtilis et deux fois l'as-

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pergillus flavescens ; dans 25 cas les résultats ont été négatifs. Nous avons donc fait 100 ensemencements de crachats de tuberculeux sans rencontrer une seule fois l'aspergillus fumigatus (1). lien a été de même de l'examen des poussières de nos salles et de notre laboratoire. Nous avons laissé débouchés dix tubes de liquide de Raulin dans notre salle d'hommes, et dix dans notre salle des femmes, en les laissant recueillir pendant trois à quatre jours les poussières de ces salles ; leur culture nous a donné une fois de l'aspergillus niger dans la salle des hommes, et une fois du bacillus subtilis dans la salle des femmes ; les autres résultats ont été absolument négatifs. Bien plus, nous avons examiné deux fois des poussières de notre salle d'hommes, accumulées depuis de longues années sur une poutre : nous n'avons, dans ces deux cas, obtenu que de l'aspergillus glaucus et de l'aspergillus niger. Enfin, quatre tubes débouchés dans notre laboratoire pendant huit jours et quatre autres tubes ensemencés avec des poussières résultant du balayage ne nous ont donné qu'une fois une culture, celle de l'aspergillus flavescens.

Il nous a semblé dès lors que l'on pouvait admettre que les crachats de nos malades seuls contenaient

(I) Des résultats analogues ont été constatés par MM. Gaucher et Sergent sur des crachats de malades quelconques. Nous devons dire aussi que ces faits paraissent assez concorder avec ceux que nous avons rapportés plus lard sur la recherche des spores de 1 aspergillus fumigatus dans la salive et le mucus nasal de personnes saines et malades. Sur cinquantediuit cas, nous n'avons constaté qu'une seule fois la présence du champignon dans la salive.

l'aspergillus fumigatus, et que cet agent pathogène devait certainement jouer un rôle dans leur affection ; mais cet agent était-il le seul en jeu, n'y avait-il point autre chose, nos malades ne pouvaient-ils point être atteints de tuberculose de Koch, fait que nous ne pouvions élucider, leur maladie ne les menaçant pas d'une issue fatale, et les autopsies antérieures n'ayant pas pu en donner la confirmation ? Chez les trois gaveurs de pigeons dont l'observation est rapportée par MM. Dieulafoy, Chantemesse et Widal, il n'existait point de bacilles dans les crachats, malgré les examens souvent répétés, et chez le premier de nos malades cet examen avait été également négatif; chez notre second malade, deux fois sur vingt examens nous avons trouvé du bacille de Koch, en très petite quantité il faut le dire. S'agissait-il d'une tuberculose pulmonaire concomitante?

Pour élucider cette question de la tuberculose chez nos deux malades, question qui nous intriguait beaucoup, nous avons eu recours au moyen scientifique qui, jusqu'à présent, paraît le mieux réussir dans les cas douteux ; nous nous sommes adressé à l'inoculation au cobaye, et nous avons successivement inoculé des crachats de chaque malade à une série de quatre.cobayes mis dans une cage préalablement désinfectée. Dans chaque cage nous avons placé un cobaye témoin.

Ces huit cobayes, morts spontanément ou sacrifiés au bout de trois mois, étaient tous atteints de tuberculose bacillaire de Koch. Nous avons trouvé des bacilles

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dans la pulpe splénique de ces animaux, tandis que leurs organes ne présentaient aucune trace de tuberculose aspergillaire, puisque les cultures faites pour la recherche de l'aspergillus sont toutes restées stériles. De plus, les cobayes témoins sacrifiés beaucoup plus tard, au bout de quatre mois et demi seulement, n'étaient point tuberculeux. La tuberculose de Koch, présentée par ces huit cobayes, ne pouvait provenir que des malades eux-mêmes, et il fallait bien admettre qu'en plus des lésions produites par l'aspergillus fumigatus, ces malades devaient certainement être atteints de tuberculose vulgaire. 11 s'agissait donc chez eux d'une lésion pulmonaire complexe due à des agents pathogènes différents, dont l'un avait préparé le terrain à l'autre.

La technique que nous venons d'indiquer a été suivie en tous points par MM. Gaucher et Sergent. Guidés par la profession de leur malade, ils examinèrent ses crachats sur lamelles colorées au violet de gentiane dilué. Sur dix-huit examens, ils trouvèrent cinq fois des filaments ténus, grêles, assez larges, simulant à première vue des brins de fil, mais sans têtes sporifères, ni spores. Par contre, sur douze lamelles colorées à la fuchsine de Ziehl, ils ne purent pas une seule fois rencontrer de bacilles de Koch. Ces crachats du malade, recueillis dans un crachoir stérilisé et fermé hermétiquement par une plaque de verre maintenue adhérente aux bords par une couche de vaseline, furent ensemencés dans des tubes contenant du liquide de Raulin stérilisé : sur

27 tubes, un seul a donné une culture d'aspergillus fumigatus. L'ensemencement fait aussi dans dix tubes de gélose glycérinée a donné une seule fois une culture d'aspergillus fumigatus. Ce champignon, sur 37 cultures, a donc donné deux fois des résultats positifs. Sa virulence a été essayée sur un pigeon qui, inoculé dans la veine axillaire, est mort trente-six heures après, avec des lésions du foie : cet organe, ensemencé dans le liquide de Raulin, a reproduit l'aspergillus fumigatus. Enfin, les auteurs ont inoculé un cobaye avec les crachats de leur malade. L'animal, sacrifié 40 jours plus tard, ne présentait pas trace de tuberculose de Koch.

Toute cettesérie de recherches a permis à MM. Gaucher et Sergent d'arriver au diagnostic de tuberculose aspergillaire simple et primitive.

C'est une technique analogue que nous avons suivie dans les cas des peigneurs de cheveux que nous avons rapportés en 1895.

Lors de notre visite à Savigny-le-Temple (1), nous avons recueilli hors de l'atelier de peignage, dans la cour de lamaison, des crachats du père, de la mère et du fils ; nous les avons emportés dans des tubes stérilisés.

A. — M. Féré (2) avait déjà deux fois examiné

(1) Comme nous le dirons plus loin, c'est à Savigny-le-Temple (Seine-et-Marne) que nous avons fait toute notre enquête sur ces malades qui habitaient alors cette localité : sur trois personnes composant cette famille de peigneurs de cheveux, le père et la mère étaient seuls atteints.

(2) C'est à l'obligeance de M. Féré que nous avons dû la connaissance de ces deux cas. t

Rénon. — Asperrjillose. 13

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bactériologiquement les crachais du père, et il avait été surpris de n'y point trouver de bacilles de Koch ; il n'avait pas d'ailleurs non plus remarqué de fragments de mycélium.

Nous avons pratiqué l'examen des crachats dans deux séries, l'une, comprenant les crachats emportés avec nous, l'autre, des crachats que nous nous sommes procurés quinze jours après, en les faisant recueillir dans des vases stérilisés envoyés à cet effet. Dans la première série, les crachats du père et de la mère ont été examinés six fois par le procédé rapide (une demi-heure dans la liqueur de Ziehl chauffée jusqu'à production de vapeurs, traitement par l'aniline chlorhydrique pendant quelques secondes, décoloration par l'alcool absolu, coloration au bleu deKuhne), et six fois par le procédé lent (vingt-quatre heures dans la liqueur de Ziehl à froid, puis mêmes opérations que plus haut) : nous n'y avons jamais trouvé de bacilles de Koch, mais quelques microbes banals colorés en bleu, notamment des cocci et des tétragènes. Pour les crachats de la seconde série, les mêmes examens (six fois par le procédé lent, et six fois par le procédé rapide) ont été renouvelés, et toujours avec le même insuccès, de sorte que nous avons pu faire vingt-quatre examens pour le père et autant pour la mère sans découvrir un seul bacille.

Pour contrôler d'une façon encore plus rigoureuse l'absence probable du bacille de la tuberculose vulgaire, nous avons inoculé sous la peau de l'abdomen six cobayes, trois avec une émulsion des crachais du

père, trois avec une émulsion de ceux de la mère. Les animaux n'ont pas maigri; sacrifiés quarante-deux jours après l'injection, ils ne présentaient aucune trace de tuberculose dans leurs organes. Nous étions, dès lors, bien obligé d'admettre l'absence de bacilles de Koch dans ces crachats.

B. — Les deux séries de crachats ont été colorées avec de la thionine, dix fois pour le père et la mère dans chaque série. Cinq fois chez le père nous avons trouvé des fragments de mycélium, et deux fois des formes conidiennes. Dix fois chez la mère nous avons pu observer, sur nos préparations, un feutrage de mycélium ramifié typique. La thionine a mis en lumière quelques bâtonnets de subtilis, quelques cocci, quelques formes de levures et des tétragènes.

Des cultures de crachats sur tubes de liquide de Raulin portés à l'étuve à 37 degrés étaient faites dans les deux séries. Sur onze tubes venant du père, nous avons vu trois fois se développer une culture d'aspergillus fumigatus; huit fois les tubes sont restés stériles. Sur onze tubes venant de la mère, six ont donné des cultures d'aspergillus fumigatus, un du bacillus subtilis, quatre de la levure rose, un seul a été stérile. Dans ces tubes, l'aspergillus fumigatus s'est toujours développé aux dépens de la partie ensemencée du crachat, soit qu'elle nageât à la surface du liquide, soit qu'elle fût, aux contraire, tombée au fond : dans ce cas, le champignon émettait une série de filaments mycéliens qui montaient progressivement dans toute la couche liquide pour ne donner des

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spores qu'à la surface. Les cultures des crachais de la mère ont donné des cultures d'aspergillus moins nombreuses qu'on aurait pu croire, d'après l'aspect des préparations : cela tient très probablement au développement plus rapide des levures signalées plus haut, qui, en modifiant la composition chimique du milieu, n'ont pas permis l'évolution plus lente du champignon. Celui-ci était d'ailleurs bien pathogène. Nous avons inoculé simultanément deux lapins dans les veines de l'oreille, l'un avec deux centimètres cubes d'émulsion de deux palettes de spores venant des crachats du père, l'autre avec la même dose de spores provenant de la mère, et nous avons vu les animaux maigrir et succomber le sixième et le septième jour, avec les lésions tuberculeuses rénales typiques de l'infection aspergillaire : les reins, ensemencés sur liquide de Raulin, nous ont donné en quatre jours des cultures d'aspergillus fumigatus.

C. — Les crachats furent ensemencés aussi sur des tubes de gélose : au bout de quinze jours, nous pouvions constater la présence de colonies de staphylocoques blancs, de bacillus subtilis, de levure rose et de tétragène. L'absence de champignon était prévue d'avance, puisque nous avions indiqué en 1893 l'impossibilité de cultiver l'aspergillus fumigatus des crachats sur la gélose ordinaire en présence des germes étrangers.

D. — La bizarre profession des malades permettait peut-être de supposer une affection pulmonaire peu connue, due aux parasites mycosiques des cheveux,

le favus ou letrichophyton. C'était une hypothèse bien invraisemblable, puisque l'état des cheveux dans ces deux maladies rend toute utilisation industrielle impossible. Nous avons tenu néanmoins àladiscuter, et nous nous sommes adressé à notre ami, M. Eugène Bodin, dont on connaît la compétence sur la question. M. Bodin a recherché les bacilles de Koch dans les crachats, et n'en a point constaté la présence. Par la thionine il a pu trouver des formes conidiennes très nettes ; enfin il a fait, avec ces crachats, deux ordres de cultures, les unes sur gélose peptonisée à 5 p. 100 pour la recherche du favus, les autres sur gélose maltosée de Sabouraud pour déceler le trichophyton. Voici quels ont été les résultats, au bout de quinze jours de séjour à l'étuve à 20 degrés : sur quatre tubes de gélose peptonisée à 5 p. 100 ensemencés avec les crachats de la mère, quatre fois les cultures ont donné de l'aspergillus fumigatus associé dans deux tubes à dutétragène et à de la levure rose, et dans deux autres au mucor mucedo . Sur les quatre tubes de cette même gélose ensemencés avec les crachats du père, on n'a trouvé que deux fois de l'aspergillus fumigatus, associé à de la levure rose et à du tétragène ; dans les deux autres tubes il existait du staphylocoque doré, du tétragène et du mucor mucedo.

Les recherches sur gélose maltosée de Sabouraud ont porté sur trois tubes pour les crachats du père, et trois tubes pour ceux delà mère. Les trois premiers ont donné une culture d'aspergillus fumigatus associé une fois au pénicillium glaucum et à la levure

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rose, et deux fois au même pénicillium, à la levure rose et à l'aspergillus flavus. Les trois derniers n'ont donné que deux cultures d'aspergïllus fumigatus, associé à du pénicillium glaucum, de la levure rose et du mucor mucedo ; le troisième ne contenait que du pénicillium et de la levure rose. Il n'y avait ni favus, ni tricophyton dans ces cultures.

Les recherches de M. Bodin, faites dans un autre but, confirmaient donc nos résultats : absence du bacille de Koch, présence de l'aspergillus fumigatus plus fréquente chez la mère que chez le père.

Il était dès lors évident que, par examens sur lamelles et par cultures, nous avions isolé des crachats de nos malades un champignon pathogène, l'aspergillus fumigatus ; c'était, de tous les germes trouvés, le seul qui pût expliquer les signes stéthoscopiques observés.

On peut voir que la technique que nous avons suivie a été la même dans tous ces faits, et c'est elle dont nous recommandons l'emploi dans les cas douteux.

B. — Étiologie.

Les observations d'aspergillose pulmonaire primitive ont été jusqu'ici rapportées chez des personnes qui, d'une façon directe ou indirecte, maniaient des graines et des farines contaminées par les spores d'aspergillus fumigatus : les gaveurs de pigeons et les peigneurs de cheveux, qui utilisent la farine dans leur industrie. Il est très vraisemblable, que de nouveaux

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cas pourront être observés plus tard chez des grainetiers et des meuniers. Pour ces derniers cependant, nous devons faire remarquer que l'emploi des moulins modernes perfectionnés, qui ne laissent pas de poussières libres, mais qui les recueillent dans des chambres spéciales, dites chambres à poussières, doit restreindre la possibilité de la contagion. Ce n'est seulement que dans les anciens moulins à meules, comme on en trouve encore beaucoup à la campagne, qu'on pourra la rencontrer.

1° Des gaveurs de pigeons. — Les gaveurs de profession, assez nombreux autrefois à Paris, ne sont plus guère qu'une dizaine, maintenant que le commerce des pigeons a quitté les Halles, pour se monopoliser presque tout entier entre les mains de quelques négociants qui, l'un à Boulogne-sur-Seine et les autres à Charenton, envoient chaque matin sur le marché de Paris, lespigeons tués etprêts àêtre vendus. C'est donc seulement aux environs de Paris que l'on gave les jeunes pigeons qui viennent presque tous du Maçonnais et de la haute Italie : ces derniers sont gavés à leur passage à la gare de Modane par un gaveur attaché spécialement à cette gare. Comment s'opère le gavage des pigeons ? Le gaveur fait préparer dans un baquet un mélange à parties égales d'eau, de grains de millet et de grains de vesce, il emplit sa bouche de ce mélange, puis prend chaque pigeon par les ailes d'une main, de l'autre lui ouvre le bec et y pousse autant de substance nutritive que le pigeon peut en recevoir. Cette manœuvre demande à peine une à

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deux secondes par chaque pigeon, de sorte que chaque gaveur peut gaver jusqu'à 2000 pigeons le matin et autant le soir, soit 4000 dans sa journée. Dans les moments de presse, le nombre des pigeons gavés par chaque homme peut aller jusqu'à 6000.

2° Des peigneurs de cheveux. — Ces industriels achètent aux chiffonniers de Paris les cheveux trouvés dans les boîtes à ordures et les démêlent en les classant par longueur, couleur et grosseur, pour les revendre ensuite. Si le cheveu est sec, le peignage se fait directement, mais si le cheveu est un peu gras, pour le dégraisser et éviter qu'il ne casse, on le recouvre de farine, ce qui facilite l'opération et rend le cheveu plus beau : on se sert pour cet usage de farine de seigle. De ces traitements successifs que subit le cheveu, il résulte un dégagement considérable de poussières dans lesquelles la farine tient la plus grande place : c'est cette dernière d'ailleurs qui est incriminée par les malades et, comme nous disait l'un d'eux, « c'est la farine qui nous tue ».

Un fait les avait péniblement impressionnés : il leur était impossible d'élever des animaux dans leur maison; les oiseaux (serins, chardonnerets, passereaux) succombaient en quinze jours ou trois semaines après avoir toussé et considérablement maigri ; les chiens ne pouvaient vivre plus de trois mois; les chats seuls résistaient.

Il suffit d'ailleurs de rester quelques minutes dans l'atelier de peignage pour se rendre compte que L'air y est irrespirable.

PATIIOGÉNIE.

P Pàthogénie de la çontamination des gaveurs de pigeons. — Si les affections pulmonaires ne sont pas rares chez les gaveurs, c'est peut-être parce les pigeons sont loin d'être tous bien portants. Ils peuvent arriver malades, et les affections qu'ils présentent sont pour nous des plus curieuses. Nous avons eu l'occasion d'observer onze pigeons malades, qui sont morts sous nos yeux. A leur autopsie, nous avons vu que cinq avaient ce qu'on appelle le « chancre », déjà décrit en parlant de l'aspergillose spontanée des oiseaux, et le chancre seul ; que trois avaient à la fois le chancre et de la tuberculose d'autres organes ; enfin que les trois derniers n'avaient que de la tuberculose pulmonaire. Ce chancre, que nous avons retrouvé huit fois sur onze pigeons, est très connu des gaveurs qui lui attribuent souvent leur maladie ; sur ces huit chancres, qui tous furent cultivés sur liquide de Raulin, un seul a donné une culture d'aspergilllus fumigatus. Plusieurs fois, nous avons obtenu des cultures de sl;iphylocoques. 11 semble résulter de l'examen de ces huit pigeons chancreux, que l'aspergillus fumigatus joue un bien faible rôle dans lé genèse des chancres, tandis que les infections banales dues aux staphylocoques paraissent avoir une grande influence sur leur développement.

Nous avons fait cette élude des lésions présentées

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spontanément par les pigeons malades, parce qu'on pourrait se demander si le chancre ne serait pas la cause de la contamination des gaveurs : ceux-ci sont forcés en effet de pousser plus violemment le mélange d'eau et de grains dans le bec du pigeon, quand il est chancreux; les grains pénèlrent moins facilement par l'orifice ainsi rétréci, il en résulte pour le gaveur un contact un peu plus prolongé que de coutume avec lanimal, ce qui, pour beaucoup d'entre eux, serait la cause du mal, mais nous avons vu que l'aspergillus est loin d'exister dans tous les chancres, et nous pensons que c'est ailleurs qu'il faut chercher la raison de la maladie.

MM. Dieulafoy, Chantemesse et Widal, et M. Potain émettent l'hypothèse que peut-être les spores d'aspergillus existent sur les graines, et que dans ce cas, l'homme et le pigeon trouvent sur la graine la cause commune de leur affection ; nous avons longuement insisté sur la présence des spores d'aspergillus fumigatus sur les graines et nous pensons aussi que c'est là la cause principale de la contamination des gaveurs. Il se passe chez eux quelque chose d'analogue à ce que l'on rencontre chez les animaux qui contractent la maladie par l'ingestion des aliments mélangés de spores : celles-ci s'échappent et tombent dans le larynx et la trachée.

2° Pathogénie de la contamination des peigneurs de cheveux. — Nous avons assez longuement insisté sur le peignage des cheveux pour qu'on ait pu déjà incriminer les poussières émises dans cette opération :

notre conviction s'est faite plus profonde quand nous eûmes assisté à toutes ces manipulations qui laissent l'air presque irrespirable, et c'est sur ces poussières qu'a porté notre examen.

Lors de notre première visite à Gentilly (1), au mois de juillet 1895, nous avions emporté dans un I ube stérile despoussièresrecueillies sur un abat-jour, et nous les avions ensemencées sur gélose, sur bouillon, surmaltose de Sabouraud et surliquide de Raulin. Sur gélose, nous avons obtenu des colonies de staphylocoques blancs etdusubtilis ; sur bouillon, nous avons constaté les mêmes microbes accompagnés d'un mucor ; sur liquide de Raulin, il existait à la fois de l'aspergillus glaucus et de l'aspergilllus fumigatus ; sur maltose, c'est l'aspergillus fumigatus seul qui s'est montré.

Frappé de l'apparition inattendue de ce champignon pathogène dans ces poussières, nous avons répété les expériences avec tout ce que nous avions emporté de Savigny-le-Temple. Les poussières générales, celles résultant du second peignage, la farine de seigle, ont été ensemencées dans des séries de onze tubes de liquide de Raulin, mis à l'étuve à 37 degrés pendant dix jours.

A. — Les poussières générales ont donné trois fois de l'aspergillus fumigatus seul, deux fois de l'aspergillus fumigatus accompagné dans un tube d'aspergillus tlavus et d'un mucor, et dans un autre d'aspergillus

(1) Avant de s'établir à Savigny-le-Temple, ces peigneurs de cheveux demeuraient à Gentilly.

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glaucus et d'un mucor. Un tube a donné de l'aspergillus flavus, un autre de l'aspergillus niger, un dernier de l'aspergillus nigrescens ; trois sont restés stériles.

B: — Les poussières, résultant du deuxième peignage, ont donné deux fois seulement de l'aspergillus fumigatus, accompagné dans un tube d'aspergillus flavus. Quatre tubes se sont couverts d'aspergillus niger mélangé une fois à de l'aspergillus nigrescens, une fois à du subtilis, une autre à de la levure rose. Trois tubes sont restés stériles.

C. — La farine de seigle a donné trois tubes d'aspergillus fumigatus seul, un tube d'aspergillus fumigatus accompagné de levure rose, un tube d'aspergillus fumigatus mélangé d'aspergillus nigrescens, un tube d'aspergillus flavus, un tube d'aspergillus niger. Quatre tubes sont restés stériles.

D. — Sur onze tubes ensemencés avec les cheveux bruts, aucun n'a donné de culture d'aspergillus fumigatus. Nous avons obtenu deux tubes d'aspergillus flavus, un tube d'aspergillus nigrescens, deux tubes d'aspergillus niger, quatre tubes de subtilis, un tube d'aspergillus glaucus et un tube de levure rose. Il est possible, probable même, qu'en multipliant les cul tures de ces cheveux bruts nous soyons arrivé à y déceler de l'aspergillus fumigatus ; la différence avec les autres cultures n'en est pas moins sensible, el la présence plus fréquente du champignon dans la farine semble bien indiquer que c'est elle surtout qu'il faut incriminer.

PATI10GÉNIE. 20a

L'aspergillus fumigatus, retiré de cette farine et des poussières générales, était d'ailleurs pathogène : deux lapins ont été inoculés dans les veines, l'un avec deux centimètres cubes d'une émulsion de deux palettes de spores venant de la farine, l'autre avec la même quantité de spores venant des poussières : ils sont morts en quatre et cinq jours de tuberculose généralisée typique du foie, des poumons et surtout des reins ; un des deux présentait même une péritonite tuberculeuse granulique à forme ascitique, et c'est la première fois que nous observions le fait chez le lapin. Les organes de ces animaux, cultivés sur liquide de Raulin, ont donné des cultures du champignon, preuves de l'origine aspergillaire de l'infection.

Il était fort probable que l'aspergillus fumigatus de la farine tirait son origine de la surface des grains de seigle ; nous nous sommes procuré du seigle à la Halle aux blés, et nous en avons fait des ensemencements sur cinq tubes de liquide de Raulin : deux tubes sont restés stériles, l'un a donné une culture d'aspergillus fumigatus accompagné d'aspergillus glaucus, les deux autres ont donné des cultures pures d'aspergillus fumigatus.

E. — Désirant essayer l'action des poussières générales, sur le pigeon, ce réactif si sensible à la tuberculose aspergillaire, nous avons, tous les deux jours, inhalé six pigeons avec ces poussières : cinq sont morts, un seul a résisté. Le premier a succombé dixsept jours après le début de l'expérience, ayant considérablement maigri ; à l'autopsie, ses poumons

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étaient complètement infiltrés de gros tubercules, de la dimension de lentilles, caséifiés et ramollis par places ; deux fragments ensemencés sur liquide de Raulin ont donné en cinq jours une culture d'aspergillus fumigatus.

Le second pigeon est mort le vingtième jour. Ses poumons étaient parsemés de tubercules plus petits que ceux du pigeon précédent; leur ensemencement sur liquide de Raulin a donné de l'aspergillus fumigatus.

Le troisième, le quatrième et le cinquième n'ont succombé que trente, trente-trois et trente-cinq jours après le début des inhalations. Leurs poumons contenaient de gros tubercules disséminés, accompagnés de la lésion buccale connue sous le nom de chancre des pigeons ; les chancres et des fragments pulmonaires, ensemencés sur liquide de Raulin, ont donné en quelques jours des cultures d'aspergillus fumigatus.

Le sixième pigeon paraissait bien portant et résistait; nous l'avons sacrifié par chloroforme le quarantehuitième jour. Il n'était pas amaigri, et ses poumons ne contenaient que deux cicatrices sur la face externe du côté gauche ; le poumon droit était complètement indemne. Des cultures, faites sur liquide de Raulin avec des fragments circonscrivant ces deux cicatrices, sont restées stériles.

Chez les cinq premiers pigeons, l'affection avait évolué de la même façon que chez les pigeons inhalés par nous en 1893 avec des spores virulentes : au bout de quelques jours les plumes se hérissaient, le pigeon se rétractait en boule, en faisant le gros dos et

cachant complètement sa tête ; l'évolution seule avait été plus lente.

Ces résultats étaient pour nous une confirmation complète du rôle pathogénique des poussières dans la genèse de l'affection pulmonaire de nos malades ; ils étaient de plus la vérification expérimentale de la cause de la mort rapide des oiseaux dans l'atelier de peignage.

Dans ces deux cas, c'est donc bien aux spores contenues dans la farine qu'on doit attribuer l'infection.

3° Pathogénie de la contamination en dehors des gaveurs de pigeons et des peigneurs de cheveux. — Il est fort possible que l'infection aspergillaire atteigne aussi les personnes qui ne sont pas en rapport d'une manière aussi immédiate avec les graines et les farines : tel est, par exemple, le cas rapporté par Arkle et Hinds, chez un cultivateur (qui avait manié cependant des graines), et chez lequel la pathogénie semble identique à celle indiquée plus haut.

Il est également fort possible que l'affection puisse s'observer chez des malades qui vivent plus ou moins éloignés de cette cause de contamination. Les recherches que nous avons entreprises cette année nous permettent de comprendre la possibilité de l'infection en pareil cas, puisque nous avons pu trouver des spores d'aspergillus fumigatus dans le mucus nasal et la salive de personnes qui n'avaient aucune affection aspergillaire; mais cette constatation, ainsi qu'on va le voir, est loin d'être la règle.

A la fin du mois de novembre 1895 et au début du

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mois d'avril 1896, nous avons recherché dans la salive et le mucus nasal de personnes, les unes saines, les autres atteintes d'affections les plus diverses, la présence possible de spores d'aspergillus fuinigatus (1).

I. Nos examens du mois de novembre ont porté sur huit femmes saines de la Clinique d'accouchements, hospitalisées au dernier terme de leur grossesse normale. Le procédé de recherches était le suivant : avec un petit fragment d'ouate hydrophile, en forme de boulette, stérilisé à l'autoclave à 120 degrés, nous prenions sur chaque malade, à l'aide d'une pince stérilisée, un peu de salive et de mucus nasal : les petits morceaux d'ouate étaient ensuite ensemencés chacun dans un tube de liquide de Raulin (2) mis à l'étuve à 37 degrés. Nous nous étions préalablement assuré qu'emprisonnées dans l'ouate hydrophile, les spores d'aspergillus fumigatus pouvaient facilement, sur ce liquide, donner du mycélium et venir à fructification.

Les seize tubes sont restés stériles, après un séjour de vingt jours à l'étuve.

II. Au début du mois d'avril 1896, nous avons fait les mêmes recherches sur les malades atteints d'affections les plus diverses qui venaient demander

(1) Rénon, Recherche des spores de l'aspergillus fumigatus dans le mucus nasal et la salive de personnes saines et malades (Soc. de biol,, 2 mai 189G).

(2) Les tubes employés avaient 14 millimètres de diamètre; la hauteur du liquide était à peu près de 4 centimètres dans chaque tube.

à la consultation de l'hôpital Necker (1) des avis médicaux. L'examen a porté sur cinquante malades, hommes ou femmes ; l'ensemencement a été fait comme nous l'avons dit plus haut, et sur le même milieu.

Dans quelques cas nous avons obtenu des résultats positifs. Nous commencions par nous débarrasser des tubes qui, après huit jours de séjour à l'étuve à 37 degrés, n'avaient donné aucun développement de mycélium aux dépens du fragment d'ouate ensemencé : la longue pratique des cultures sur le liquide de Raulin nous avait appris que ce délai de huit jours est toujours suffisant pour permettre la genèse des premiers filaments mycéliens qui mettront ensuite plusieurs jours à terminer leur évolution. Soixante-cinq tubes stériles furent ainsi retirés de l'étuve, soit vingt-sept pour le mucus nasal, et trentehuit pour la salive.

Les autres tubes y furent encore laissés quatorze jours : tous furent définitivement retirés le vingttroisième jour. Dans les tubes où la hauteur de liquide de Raulin n'excède pas cinq centimètres, jamais un mycélium d'aspergillus fumigatus n'emploie vingttrois jours à s'élever du fond du tube à la surface et parvenir à fructification, remarque importante pour expliquer une partie des résultats obtenus.

(I) La circonscription médicale de l'hôpital Necker, établie par le nouveau règlement hospitalier, comprend, à Paris, les quartiers d'Auteuil, de Grenelle, de Javel, Saint-Lambert et Necker ; elle s'étend de plus aux communes suburbaines de Clamart, d'Issy et de MalakofT.

Rénon. — Asperr/illose. 14

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Des douze tubes ensemencés avec la salive, et qui sont restés vingt-deux jours à l'étuve :

Un a donné une culture d'aspergillus fumigalus.

Cinq ont donné une culture d'une levure blanche.

Cinq ont donné du mycélium, qui s'est arrêté dans son développement vers le huitième jour de séjour à l'étuve, et s'est maintenu distant de 1 à 2 centimètres de la couche supérieure du liquide.

Des vingt-trois tubes ensemencés avec le mucus nasal et restés vingt-deux jours à l'étuve :

Un a donné une culture d'une levure blanche.

Un a douné une culture d'aspergillus niger.

Un a donné une culture d'aspergillus nigrescens et d'aspergillus fumigatus.

Trois ont donné une culture d'un mucor.

Cinq ont donné des cultures d'aspergillus fumigatus.

Onze tubes ont donné du mycélium dont le développement s'est arrêté au bout de huit jours, et, qui, comme plus haut, n'a pas gagné la surface du liquide.

On voit donc que dans nos deux ordres de recherches, sur cinquante-huit cas, nous n'avons constaté qu'une seule fois la présence des spores de l'aspergillus fumigatus dans la salive, et six fois dans le mucus nasal : ce champignon était pathogène pour le lapin. Nous ignorons à quelles espèces appartiennent ces mycéliums, dont le développement s'est trouvé interrompu dès les premiers jours, et s'est arrêté très vraisemblablement à cause de la température de 37 degrés, trop élevée pour eux. On peut ainsi voir de quelle utilité est l'emploi du liquide de Raulin, non seulement pour séparer les bactéries des champignons, mais encore pour différencier les unes des autres les espèces mycosiques.

Dans huit cas seulement, nous avons pu obtenir des cultures positives de la salive et du mucus nasal chez les mêmes personnes, et, dans deux de ces cas, les résultats ont concordé :