LEUR RECHERCHE

Puisque toute la question de la coloration du sérum que nous. avons envisagée se résume à la présence des pigments biliaires, je rappellerai quels sont les moyens de les mettre en évidence.

On sait que le pigment fondamental de la bile est un pigment jäune orangé, appelé la bilirubine, de laquelle dérivent tous les. autres pigments: ;

a) par réduction, la bilirubine donne de l’urobiline, très rare dans les sérums ;

b) par oxydation, elle donne de la biliverdine (verte), de la bilicyanine (bleue), de la bilipurpurine (rouge), et de la cholétéline (jaune);

c) par hydratation simple, on obtient de la bihfuscine;

d) par hydratation et oxydation, de la biliprazine;

e) par réduction et hydratation, de l’hydrobilirubine.

Nous ne dirons rien des différentes bilrubines, cela nous entrainérait beaucoup trop loin; ceux que .la question intéresse-rait, trouveront les documents nécessaires dans la thèse de Piettre.

Je n’envisageraï qüe les procédés de recherche concernant la bilirubine et l’urobiline.

BILIRUBINE

Réaction de Gmelin. — Cette réaction est basée sur ce fait que la bilirubine traitée par un oxydant, acide nitrique nitreux, dans l’espèce, se transforme en de nouveaux corps que nous venons d’énumérer plus haut. On obtient, par le mélange des.

NS

solutions, les diverses teintes ou la superposition des teintes si on les met seulement en contact.

Réactif nitreux nitrique.

Gilbert et Herscher se servent du réactif suivant :

Acide nitrique pur:à 36°..... 2600%0ic.

AUOT RTL 100: €.c.

Nitnite de ssoude...... 112 0,60 gr.

‘Réaction de Hayem. — Cette réaction est une modification

de celle de Gmelin. Dans un tube cylindrique à fond plat, de 1 cm. de diamètre, on met le sérum et on ajoute, à l’aide d’une “pipette effilée, de l’acide nitrique nitreux. 11 se produit au contact, un coagülum qui présente une zone supérieure blanche et une imférieure, jaune. À l’union de ces deux zones, apparaissent les phénomènes colorés. S'il y a de la bilirubine, il se forme un liseré bleu à reflets verdâtres qui finit par disparaître.

‘Réaction de-Grimbert. — On prend 10 c.c. de sérum et om “ajoute:s"c.c. d’une:solution de chlorure de baryum à 10 p. 100. On agite :on filtre, on lave à l’eau distillée, on perce le filtre au fond et‘on‘entraîne le précipité resté sur le filtre par 5 c.c. d’alcookà 90°, renfermant 5 pour 100 d'acide chlorhydrique. On porte quélques instants au bain-marie bouillant. L'alcool qui surnage est vert'bleu, $11 y a des pigments biliaires. Il faut parfois ajou- -ter 2 gouttes d'eau oxygénée pour oxyder le pigment, s’il y ên a-une assez forte quantité. On peut aussi centrifuger au lieu de filtrer.

Cette réaction de Grimbert a été faite pour la recherche de la ‘bilirubine ‘dans l'urine. Je l'ai essayée sur le sérum et je lai abandonnée car elle est assez longue et les résultats ne sont pas très satisfaisants, en raison, sans doute, de la trop faible quantité de bilirubine contenue dans le sérum.

Réaction de Salkowski. — On ajoute du carbonate de soude au-sérum,.puis-goutte à goutte, une solution de chlorure de calcium au 1/10°, on filtre, -on lave le précipité et on le dissout dans l'acide .chlorhydrique, on chauffe; la liqueur devient bleue si elle contient de la bilirubine.

Méthode de von Jaksch. — l'amiante, puis on le coagule à 78-80°, dans une éprouvette étroite. Le sérum ne contenant pas, de bilirubine-est lactescent et coloré en jaune clair; s’il en contient, il prend une teinte verdâtre. Si l’on chauffe à nouveau à 50-60°, le sérum prend, suivant la quantité de bilirubine qu’il contient, une coloration verte plus ou moins intense.

Méthode de Hedenius. — On mn 3 à 4 c.c. de sérum et on ajoute 15 à 20 c.c. d’alcool, on filtre et on ajoute au liquide

filtré, goutte à goutte, de l’acide chlorhydrique à 10 p. 100. On porte à deux reprises à l’ébullition. La présence de la bilirubine se manifeste par une teinte bleu verdâtre qui apparaît après un ‘temps variable.

D'après Hammarsten, la limite de one Fe cette réaction “serait de I pour 50.000.

Méthode de A. Jolles. — I] à basé une méthode de recherche et de dosage de la bilirubine sur l’action des halogènes (CI, Br, I) en solution chloroformique ou alcoolique. La bilirubine dissoute dans le chloroforme donne de belles colorations vertes ou vert bleuâtre. Mais cette réaction est extrêmement

délicate et on peut obtenir des décolorations complètes.

Réaction de Piettre. — I] signale une réaction très sensible, c’est la coloration violette que prend la bilirubine dissoute dans le chlorure de benzyl, sous l'influence des halogènes, du

brome en particulier. Cette méthode permet de déceler des traces .infinitésimales de pigment. Le matière à analyser est traitée à chaud par le chlorure de benzyl, après filtration et refroidissement, on ajoute goutte à goutte une solution très faible de brome dans du chloroforme ou de l'alcool. S'il. y a de la bilirubine, le chlorure de benzyl se colore fortement en violet-bleu.

Si je signale cette réaction si sensible, c’est pour. faire, remarquer qu’elle est applicable à la bilirubine pure : seulement et qu’elle ne peut être un procédé de recherche de ce Loos dans les liquides organiques. - AE ME + ANT -

Méthode de G. Lepehne. — ul préconise la méthode sui- -vante : on place dans 3 tubes: de. 0,4 à 0,6 cm. de diamètre “0,25 c.c. de sérum frais. Dans un des tubes, tube de comparaison, on dilue le sérum avec 0,2 c.c. d’eau. Dans un autre tube, on

ajoute quelques petits grains de caféine associée à du salicylate de soude, pour activer la réaction.

On ajoute alors 0,2 c.c. du diazoréactif suivant: Solution À

ACidessultanihique #2: . O,I

Acide chlorhydrique. ...... on

PAUMSUÉ NN en At 100 Solution B

Nitrite de =Soude. 10: 2. 0,5