LE SR
D'autre part, un grand nombre de sels de métaux lourds précipitent la gélatine de ses solutions, HgC® en solution chlorhydrique donne avec la gélatine un précipité soluble dans l’eau chaude. Le sulfate de zinc à saturation (Grienfagen), Hgl! K? en solution acétique (réactif de Tanret) précipitent la gélatine de ses solutions. Le ferrocyanure acétique précipite également la gélatine, mais à condition toutefois que la solution ne soit pas trop concentrée, trop chaude ou trop riche en sel (Hoppe-Seyler).
Les sels ferriques à l'exception des citrates et tartrates, les sels vanadiques, cériques, uraniques, platiniques, auriques, précipitent la gélatine de ses solutions en donnant des précipités insolubles dans l’eau chaude, contrairement à ceux qui sont obtenus avec les selsalcalins etles sels mercuriques.
Les précipités ainsi obtenus retiennent toujours de la substance minérale, même après un lavage prolongé. Le précipité obtenu avec FeCE, étudié après lavage et dessiccation, répond aux caractères suivants : précipité brun rouge insoluble dans l'eau chaude, contenant 16,3% d'azote et 6,45 % de substance minérale.
Avec le nitrate d’urane on a un précipité jaune clair contenant 16,1 % d'azote et 6,4 % desubstances minérales.
Les sels d’alumine augmentent la viscosité de la solution de gélatine sans produire de précipité apparent.
Le permanganate de potassium en solution concentrée agit comme le perchlorure de fer ; il donne avec une solution de gélatine un précipité qui, après lavage, retient des matières minérales et qui est insoluble dans l’eau chaude.
En étudiant la précipitation de la gélatine par les métaux lourds, Lumière et Seyewetz ont fait la remarque suivante :
« Tous les composés minéraux qui en solution peu concentrée précipitent la gélatine sont des oxydants. »
La réciproque n'est pas exacte, la précipitation de la gélatine n'est pas une propriété commune à tous les oxydants minéraux. Cependant la gélatine est encore précipitée par l'eau de chlore et l'eau de brome en donnant des précipités insolubles dans l’eau bouillante.
69 Action des substances organiques. — Alcool. — La gélatineest insoluble dans l'alcool et l’alcool précipite les solutions de gélatine, mais la liqueur précipitante doit être neutre et le titre final doit être d'au moins 70°, dit Perret.
Pour de faibles teneurs en alcool, il n’y a pas précipitation, il y a retard à la prise en gelée.
Acétone. — L’acétone agit comme l'alcool, mais la précipitation exige un titre final moins élevé.
Les précipités fournis par ces deux liquides sont facilement solubles dans l’eau chaude, ils se redissolvent même - par simple dilution de la solution d’où ils sont précipités.
Le formol. — Le formol, très souvent employé pour précipiter les protéines (Mascré et Bouchara), ne précipite pas la gélatine de ses solutions. Il amène la prise en gelée de la solution sans provoquer la séparation de la gélatine.
La gelée ainsi obtenue est insoluble dans l’eau chaude et donne parévaporation un résidu corné très dur.
En dehors de ces corps, il existe un grand nombre de substances organiques susceptibles de précipiter la gélatine de ses solutions, surtout parmi les substances à fonction phénol.
Le tanin. — Le tanin est un réactif bien connu des protéines et c’est un réactif de la gélatine couramment employé. Il donne avec la gélatine un précipité insoluble dans l’eau chaude.
Le tanin étant acide faible, la précipitation de la gélatine par le tanin semble devoir se faire de préférence du côté acide du point isoélectrique, zone d'acidité où les deux sub stances ont des charges opposées, et en fait la précipitation optima a lieu entre pH 4,4 et pH 4,6.
Pour des acidités plus fortes, la réaction est moins sensible et moins complète. Du côté alcalin du point isoélectrique il y a encore précipitation si l’alcalinité n’est pas trop forte. Ainsi à pH 4,9, il y a encore précipitation. A ce point la protéine sedissocie essentiellement comme une substance acide, mais l’ionisation alcaline, bien que très faible, n’est
pas nulle. L’addition de NaCl à la solution agrandit la zone de pH où se fait la précipitation, mais n’augmente pas la sensibilité de la réaction au pH optimum (Smorodintzeff et Mne Adoff).
La proportion des corps réagissants influe également sur la sensibilité de la réaction. En présence d’un grand excès de l’un des corps, la réaction se fait moins bien.
La meilleure précipitation des deux substances est obtenue pour une proportion d’une partie de gélatine à deux parties de tanin. Dans ce cas le précipité comprend la totalité des deux substances réagissantes, il ne reste plus rien dans la solution.
Au pH optimum la limite de détection du tanin par la gélatine est à peu près de 1 pour 150.000 et de la gélatine
par le tanin de 1 pour 300.000. A pH 10, une solution à 0 gr. 25% de gélatine n’est pas précipitée par le tanin.
Le pH optimum de la réaction et la sensibilité limite sont susceptibles de varier avec l’origine du tanin employé, mais présentent malgré tout des limites très étroites.
Acide picrique. — L’acide picrique est un agent de précipitation de la gélatine connu depuis longtemps et il est couramment employé dans la recherche qualitative et même dans le dosage (Berrar).
La précipitation n’a lieu qu’en milieu acide, en milieu alcalin elle ne se produit pas, le précipité obtenu étant soluble dans les alcalis.
Substances à fonction phénol. — Seyewetz et Meunier ont montré que la gélatine était précipitée de ses solutions par de nombreux phénols en solution dans l'eau.
Ainsi le phénol, la résorcine, l’orcine, l’hydroquinone, la pyrocatéchine, l'acide pyrogallique, l'acide picrique, le paranitrophénol, le chlorophénol, la monochlorhydroquinone, l'adurol, l'acide R(disullo 8 naphtol 2.3.6), l'acide G (disulfo B naphtol 2.6.8), l'acide S (monosulfo $ naphtol 2.6) sont des substances à fonction phénol qui comme l'acide picrique et letanin précipitent la gélatine de ses solutions.
Les naphtols, dioxynaphtalines, les amines et aminophé-
L' + Vi Lee " mes \ A DE RS RE
eee
nols ne précipitent pas la gélatine. Parmi les composés organiques ce sont uniquement les phénols ou leurs produits de substitution nitrés halogénés ou sulfoconjugués à l'état d'acides et non de sels qui sont susceptibles de produire la précipitation de la gélatine. Les phénols peu solubles dans l’eau comme l’& ou le B naphiol ainsi queles amines simples ou substituées à l’état de bases ou de sels ne la précipitent pas. Il en est de même des aminophénols simples ou substitués même s'ils sont très solubles dans l’eau.
Ces deux auteurs ont complété leurs recherches en étudiant la composition des précipités obtenus à partir de ces diverses substances.
Les précipités obtenus avec le phénol, la pyrocatéchine, la résorcine, l’hydroquinone, l'acide picrique, etc., sont solubles dans l’eau bouillante, ceux fournis par l'acide gallotanique ne le sont pas.
Après lavage et séchage de ces précipités, les auteurs ont dosé N en comparant le chiffre trouvé avec le chiffre fourni par une gélatine identique ayant subi les mêmes traitements à l'exception du traitement par le réactif précipitant.
La gélatine initiale contient 17,7 % de N.
Précipité obtenu avec :
Phénol 16,4 9%, de N
Résorcine 16,5 »
Hydroquinone 14,32 »
Pyrocatéchine 16,14 »
Acide pyrogallique 16,20 »
Acide picrique 17,59 »
Acide gallotanique 16,37 »
L'étude de la précipitation de la gélatine par les substances minérales et organiques a conduit MM. Lumière et Seyewetz aux conclusions suivantes :
La précipitation de la gélatine par les substances minérales et organiques est un phénomène qui donne lieu à la production de deux types de composés.
a) Substances solubles dans l'eau chaude dans lesquelles on retrouve les propriétés et la composition de la gélatine ini-
RE T Mru
tiale : sels alcalins en solution concentrée, alcool, acétone, phénols à substitution acide.
b) Substances insolubles dans l'eau chaude où les propriétés et la composition du produit initial paraissent notablement modifiées : sels oxydants, acide gallotanique. Il convient de remarquer que ces dernières substances ont pour propriété commune le pouvoir de former de l'oxygène soit directement, soit en présence d’eau. La présence de certains corps comme le sulfate de soude, la thiocarbimide en particulier peut empêcher cette précipitation de la gélatine par les phénols.
Insolubilisation de la gélatine, — En de des substances qui précipitent la gélatine, il convient de considérer celles qui peuvent être ajoutées à ses solutions sans produire de . précipitation mais qui donnent par refroidissement des gelées infusibles à 1000. Cette insolubilisation de la gélatine dans l’eau bouillante se manifeste également après immersion pendant un temps convenable de la gélatine sèche dans les solutions de substances provoquant l'infusibilité des gelées.
= Le nombre de ces substances a été limité pendant longtemps aux sels de chrome et au formol mais cette propriété est commune à un grand nombre de produits provenant de l'oxydation à l'air des phénols en présence d’alcali et en particulier à des corps bien définis comme les quinones, quinhydrones, les chlorimines. Parmi les phénols pouvant fournir des composés d'oxydation susceptibles d'insolubiliser la gélatine on trouve la pyrocatéchine, 'Hydrontiness, l'acide pyrogallique, l'acide gallique.
Dans le cas’ des sels minéraux l’insolubilisation paraît être seulement un phénomène d’oxydation maïs la gélatine fixe ensuite une certaine quantité de l’oxyde du sel qui produit l’insolubilisation.
« Cet oxyde ne se fixe sur la gélatine que s’il peut se former à l’état colloïdal », dit Luppo-Cramer (Meunier).
Avec les substances organiques, l’insolubilisation paraît
s'accompagner de la fixation du résidu organique. Ainsi à partir de la gélatine insolubilisée au formol on peut régénérer le formaldéhyde en faisant bouillir avec l'eau la gélatine insolubilisée par cette substance. Mais aucune autre expérience probante ne permet d'affirmer que la fixation du résidu organique a lieu. Dans le cas des quinones et de leurs dérivés, ces corps ne peuvent être régénérés et la composition centésimale de la gélatine insolubilisée ne permet de tirer aucune conclusion à ce sujet.
La gélatine quinonisée constitue la forme la plus stable de gélatine insoluble connue jusqu’à ce jour car elle résiste non seulement à l'action de l’eau bouillante mais encore à l’action des acides et des alcalis étendus.
8° Tannage de la gélatine. — Le tannage de la gélatine consiste dans sa transformation en un produit insoluble dans l'eau bouillante. Ce tannage aura donc pour base l’action des substances insolubilisantes que nous venons d'étudier.
A) TANNAGE PAR LES HALOGÈNES. — L'insolubilisation de la gélatine par l’eau de chlore ou l'eau de brome n'est pas réalisable bien que l'eau de chlore et l’eau de brome soient susceptibles de fournir avec la gélatine des précipités insolubles. Par ce traitement la gélatine gonfle, se liquéfie sous l'action de l'acide chlorhydrique formé avant d’être tannée. Par contre on obtient facilement le tannage à partir des hypochlorites. En plongeant dans la solution :
Eau 400 Hypochlorite de soude 100 Acide chlorhydrique 2
10 grammes de gélatine mince on obtient en vingt minutes une gélatine insolubilisée un peu colorée en jaune. Un traitement au bisulfite de soude suffit à blanchir et à enlever l'excès de Ci. D'après Meunier, le tannage par le chlore ou le brome est le résultat d'une réaction chimique portant vraisemblablement sur certains groupes aminés de la matière protéique en donnant naissance à des formes chloraminées on bromaminées insolubles dans l’eau chaude.
REC En ESC Me Te RES POUR re ET e
