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il n'y a pas de précipitation. En employant un alcool chlorhydrique de titre alcoolique plus élevé, 90° par exemple, on obtient un léger trouble.

Solution concentrée. — Reprenons ces expériences avec une solution de gélatine à 5 %. En versant quelques gouttes de cette solution dans de l'alcool chlorhydrique préparé comme ci-dessus, ont obtient un trouble notable.

L'addition de 4 volumes de cet alcool chlorhydrique à 1 volume de solution gélatinée produit un trouble important. En reprenant ces expériences avec des solutions gélatinées à 10 %, nous avons pu obtenir un précipité de gélatine pour les concentrations alcooliques fortes, et nous avons obtenu un trouble notable par addition de trois volumes d'alcool chlorhydrique à un volume de solution gélatinée..

B) Miieu ALCALIN. — Solution étendue. — Si à 10 cc. d'une solution de gélatine à 2 %, nous ajoutons deux ou trois gouttes de lessive de soude, elle n’est plus précipitée par addition de trois fois son volume d’alcool à 960.

Si nous versons quelques gouttes de solution gélatinée dans une solution alcoolique de soude ainsi préparée :

Soude à 200 gr. °/00 (5 N) 200 cc.

Alcool absolu 800 cc.

Eau distillée, q. s. p. 1000 ce.

il n'y a ni précipitation ni trouble. Mais si on verse un peu de solution gélatinée dans un alcool sodé de titre alcoolique plus élevé, on obtient un léger trouble.

Solution concentrée. — Prenons maintenant une solution de gélatine à 5 %. A 10 cc. de solution ajoutons deux ou trois gouttes de soude au 1/3 et 30 cc. d'alcool à 960. Il se produit un trouble, mais il n’y a pas de précipitation.

De même si nous versons quelques gouttes de cette solution gélatinée dans l'alcool sodé préparé comme ci-dessus, il se forme un trouble notable. Avec la même quantité de soude et un titre alcoolique plus élevé, on obtient un liquide laiteux.

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Dans les mêmes conditions, une solution gélatinée à 10 % donne d’une part un précipité et d'autre part un liquide laiteux que l’on ne peut clarifier mécaniquement.

C) Conczusions. — Ces expériences nous montrent que:

a) Les solutions de gélatine à 1 ou 2 % dont l'acidité ou l’alcalinité est éloignée de pH 7 ne donnent ni précipité ni trouble par addition d’un volume alcoolique égal à 4 fois le volume de la solution gélatinée ;

b) Dans les mêmes conditions, les solutions plus concentrées de gélatine (à 5 % ou 10 %) donnent un trouble qui ne se résout pas totalement en un précipité et que l’on ne peut séparer.

30 Précipitation de la gélatine par l'alcool au point isoélectrique. L

Première expérience : Etudions d’abord la précipitation en milieu acide faible. Mettons dans un verre 30 cc. d'alcool à 960 et ajoutons 10 cc. de solution gélatineuse à 2 %,. Il se produit un précipité et le liquide qui surnage est opalescent. Faisons varier progressivement le pH par addition d'acide acétique à 5 %. Après addition de quelques gouttes d'acide acétique, nous voyons se former dans le liquide de petits flocons que l'agitation précipite sur les parois du verre et sur l’agitateur ; le liquide opalescent s’éclaircit.

Donc pour une certaine acidité la précipitation de la gélatine par l'alcool se fait en donnant un précipité et un liquide clair. Mesurons le pH où se fait la floculation, nous trouvons pH 4,7. à

Etudions maintenant cette précipitation à pH 4,7.

Deuxième expérience. — Pour étudier la précipitation de la gélatine isoélectrique parl'alcool, nous avons d’abord préparé une solution de gélatine à pH 4,7. Nous avons employé pour mesurer le pH la méthode colorimétrique. Nous avons utilisé pour cela l'échelle suivante à base de citrate de soude et d'acide chlorhydrique préparée avec:

1° Une solution citrique obtenue ainsi :

SAS a ere

Dissoudre 21,008 d'acide citrique officinal dans 200 cc d'une solution normale de soude et compléter à un litre.

29 Acide chlorhydrique N/10.

Nous avons préparé une échelle allant de 3,69 à4,95 avec :

Solution citrique. . . . HCI N/10 PH 5 cc. 5 cc. 3,69 5,5 4,5 3,94 6 4 4,15 7 PA) 4,44 8 2 4,65 8,3 À 0 4,70 9 1 4,83 9,5 0,5 | 4,88 10 4,95

Indicateur : Rouge de méthyle (4,4 à 6) et bleu de bromophénol 2,8 à 4,6.

Nous avons amené la solution de gélatine à pH 4,7 par essais successifs en ajoutant d'abord HCI N/10 puis HCI N/100 ou NaOH N/100.

Ajoutons de l'alcool 96° à une solution de gélatine à 2°, ainsi préparée. Quand la quantité d'alcool ajoutée représente une fois et demie le volume de la solution gélatinée, la précipitation commence.

Après addition de 2 volumes d’alcool, nous avons un précipité aggloméré en une masse molle visqueuse et parfois le liquide surnageant est un peu trouble, mais si nous l’agitons le trouble se résout en un floculat qui adhère à l'agitateur et aux parois du verre tandis que le liquide s’éclaircit.

Versons maintenant 10 cc. de la même solution dans un Bécher contenant par exemple 10 cc d'alcool à 960. Chaque goutte de solution gélatineuse y donne un précipité grumeleux. Parfois, au fur et à mesure que l’on ajoute la solution, le liquide alcoolique se trouble, maïs une simple agitation suffit à transformer ce trouble en un floculat.

Le liquide surnageant devient clair eten même temps très facile à filtrer. Donc quand on précipite une solution

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gélatineuse à pH4, 7 par l'alcool, on obtient un précipité et un liquide clair qu'il est facile de séparer par filtration.

Emploi des solutions tampons. — La préparation de solutions de gélatine à pH à 4,7 est une opération délicate qui demande parfois un grand nombre d'essais. D'autre part, la détermination colorimétrique du pH manque de précision. Aussi il nous est arrivé, au cours de nos expériences, d'obtenir après traitement de la solution gélatineuse par l'alcool un liquide restant trouble et n'ayant aucune tendance à floculer et à s’éclaircir par agitation. Parfois l’addition soit d'acide acétique, soit d’acétate de soude, nous a permis d’obtenir la floculation cherchée. Cette addition se faisant par tâtonnementconduit à des résultats peu certains. Nous avons préféré mettre à profit les propriétés des solutions tampons.

En ajoutant une solution tampon de pH 4.7 à unesolution de gélatine amenée au voisinage de ce pH nous sommes sûrs de maintenir le pH final à 4,7

En additionnant nos solutions de gélatine prises au voisinage de pH 4,7 du 1/10 de leur volume de la solution tam-. pon suivante :

Acide acétique M/5 46 ce.

Acétate de soude M/5 54 ce. (Meunier)

nous avons obtenu des solutions de gélatine qui traitées par l’alcool donnaient après agitation un précipité et un liquide clair faciles à séparer par filtration.

La détermination préalable du pH de la gélatine n’est pas indispensable ; il suffit qu’elle ne soit ni trop fortement acide ni trop fortement alcaline. Une solution de gélatine ordinaire additionnée du 1/10 de son volume de la solution tampon précédente nous donne de façon constante, après traite. ment à l'alcool, un précipité et un liquide surnageant absolument limpide après agitation.

Nous avons utilisé également la solution tampon suivante :

. Citrate disodique M/10 83 HCI N/10 17 (Vérain et Chaumette)

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Les résultats obtenus ont été identiques.

Déjà nous pouvons conclure qu'il n’y a qu’au point isoélectrique que l’on peut obtenir la précipitation totale de la gélatine par l'alcool puisqu'il n'y a qu'à ce point que le liquide final ne retient pas la gélatine en suspension.

Nous allons rechercher maintenant quel doit être le titrealcoolique minimum pour que la précipitation de la gélatine par lalcool soit bien complète. Pour cela nous avons étudié la précipitation en faisant varier d’abord le titre alcoolique puis en faisant varier ensuite la concentration de la solution gélatineuse employée.

4 Degré alcoolique minimum nécessaire à une précipitation totale. :

Première expérience. — Soit une série de Béchers numérotés de 1 à 5 contenant respectivement 10 cc., 20 cc., 30 cc., 40 cc., 50 cc. d'alcool à 96°

Versons dans chacun 10 cc. de solution gélatineuse à 2 7 contenant le 1/10 de son volume de solution tampon de pH 4,7.

Dans le Bécher I, il n’y a pas de précipitation.

Dans le Bécher II, il se forme un précipité abondant. Après une soigneuse agitation pour éclaircir le liquide surnageant, nous obtenons un liquide clairsurmontant un précipité mou élastique un peu pâteux.

Dans le Bécher IT, il se forme un précipité plus ferme que le précédent. Ce liquide un peu trouble d’abord se clarifie facilement par agitation.

Dans les Béchers IV et V, le précipité est plus ferme, prend un aspect tendineux.

La déshydratation plus ou moins poussée est vraisemblablement la cause de ces différences d'aspect.

Chaque solution est séparée du précipité par filtration au papier, à l'exception de la solution I où il n’y a aucune précipitation. Pour séparer le liquide II du précipité, il est nécessaire de triturer soigneusement ce dernier pour en exprimer le liquide inclus. ge