I. Pas de précipitation il ya. 142 mmg. de N soluble
IL. Biuret ++ il reste...... 6 mmg. 16 = II. » + Dee nee 2 mmg. 90 — AVS ? NA 1 mmg. 50 — V. » Æ DATE Fe 0 mmg. 84 Æ VE. » — DAS ES 0 mmg. 63 VII. » — Mr Tes 0 mmg. 40 — VIII. » — Dents 0 mmg. 40 = IX. » == D'ETR eretee 0 mmg. 38 Ta X. » — D net 0 mmg. 36 —
Ces expériences nous montrent qu’avec les solutions concentrées, la quantité d'azote qui reste soluble diminue de la même manière qu'avec les solutions à 2 %, décroissance d'abord rapide puis très lente.
20 Solutions étendues. — Solution à 1 °,.
I. Pas de précipitation, tout l’azote, soit 14. mmg. est resté soluble. II. Biuret + il reste...., 0 mmg. 70 de N soluble. IT. » ê DES ENRS of 0 mmg. 35 — IV. » ; RTE 0 mmg. 14 — V. » — Dale rt 0 mmg. 09 — VI. » — PURE 0 mmg. 07 = VII. » — De 0 mmg. 07 —
Nous n'avons pas dosé l'azote resté en solution pour des titres alcooliques plus élevés, les quantités restées en solution dépassant les limites de sensibilité pour les prises d'essai mises en œuvre.
Conczusions. — Ces résultats nous permettent de faire les remarques suivantes : ;
À partir d’un titre alcoolique final de 800 (1 vol. dans 5 vol. d'alcool), le biuret est négatif quelle que soit la concentration de la solution gélatineuse précipitée. Mais le filtrat retient toujours un peu d’azote en solution.
Pour des proportions plus importantes d'alcool, la quantité d'azote restant soluble ne diminue que très lentement, et pour un même titre alcoolique final elle semble en proportion directe avec la quantité de gélatine mise en œuvre.
Age
Nous n'avons pas précisé l’origine de cet azote. Sans doute provient-il de divers produits d'hydrolyse existant dans la gélatine.
En faisant des solutions de one contenant la même quantité d'azote que les résidus d’évaporation des filtrats pour y faire la réaction de biuret, nous n'avons pas obtenu de conclusions certaines à ce sujet car une solution contenant moins de 0 g. 03 de gélatine dans 100 cc. d’eau pure ne donne pas la réaction du biuret, L’azote restant peut tenir à
l'azote de cette quantité de gélatine et à des produits d’hydrolyse.
5° Action des sels sur la précipitation de la gélatine par l’alcool au point isoélectrique.
A) GÉNÉRALITÉS SUR L'ACTION DES SELS SUR LES MÉLANGES GÉLATINE-ALCOOL. EXPÉRIENCES DE S' PrzYLECkI. — Nous avons vu dans la première partie (ch. vi, $ 2) de cette étude que les sels neutres exerçaient une action solubilisante sur la gélatine. »
St Przylecki a montré d’autre part que la présence de sels . modifiait les conditions de la précipitation de la gélatine par l'alcool. Il a montré que Ia présence de certains sels était susceptible de retarder ou d'amener l’opalescence ou la coagulation d'une solution alcoolique de gélatine suivant la nature du sel, la valeur des ions qui le constituent, la quantité de sel contenu dans la solution et le pHde cette solution.
Nous sommes attachés à étudier dans quelle mesure ces sels interviennent quand on opère au point isoélectrique.
B) Cxoix pes secs ÉTuDiés. — Ne cherchant pas à établir une liste complète des sels pouvant changer les conditions de la précipitation, nous nous sommes contenté d'étudier l’action des plus courants.
Parmi ceux étudiés par St Przylecki, nous avons choisi :
NaCI, MgCE, SOINa?, SO4Mg, Fe:C1l
no ee
afin d’avoir une liste comprenant :
1 sel à anion et à cation monovalents NaCI
1 sel à anion mono et cation divalent MgCI°
1 sel à anion divalent et à cation mono SO“Na? 1 sel à anion et cation divalents SO4Mg 1 sel à anion mono et à cation trivalents FeCl:
A cette liste de sels étudiés nous avons ajouté CaCF en raison de l’action solubilisante bien connue qu’exercent les sels de Ca sur la gélatine.
C) PRÉPARATION DES SOLUTIONS. — Solutions salines. — Nous avons préparé une solution M/10 de chaque sel (sauf pour FeCk) à pH 4,7 afin d'éviter une modification de concentration en ions H des solutions gélatineuses auxquelles nous avons ajouté ces solutions car nous avons opéré en l'absence de solutions tampons pour éviter l’action possible des sels utilisés comme tampons.
Plus loin nous examinerons le moyen d'étudier l’action de FeCl5 à pH 4,7.
Solutions gélatineuses. — Dans 6 ballons de 50 cc. numérotés de I à VI nous avons placé 25 cc. de solution gélatineuse à 10 % et à pH 4,7 mesurés dans des conditions absolument identiques pour tous les essais.
Nous avons ajouté :
Daos I, 25 cc. de solution M/10 de NaCI
II, 25 ce. M/10 CaCE III, 25 ce. M/10 MgCP IV, — — MgSO:
Vi — — SO:Na° VI, eau distillée (témoin)
Comme il nous était impossible d'obtenir une solution M/10 de FeCF5 à pH 4,7, nous avons opéré de la facon suivante :
Dans deux ballons de 100 cc. nous avons placé 50 ce. de solution gélatinée à 10 % amenée à pH très bas, par addition d’un peu de HCI N/10. Puis nous avons mis dans chacun la quantité prescrite (1/200 de molécule, soit 0 g. 81 de
FeCP, soit 3 cc. 1 de la solution officinale à 26% de FeCF).
Dans ces conditions l’addition de FeCI5 à la gélatine ne . produit pas de précipitation.
L'un des deux ballons nous a servi à déterminer la quantité de soude N/10 nécessaire pour amener le système à pH 4,7. La quantité de soude ainsi déterminée était ajoutée au second ballon en agitant bien soigneusement pour éviter des précipitations, puis nous avons complété à 100 cc. En opérant ainsi nous avons pu obtenir sans précipitation une solution de gélatine à pH 4,7 contenant du perchlorure de fer. C’est la solution VII.
Chaque solution contient 5 % de Pt et 1/20 de molécule de sel par litre :
D) ErTupE DE LA PRÉCIPITATION DE CES SOLUTIONS. — Nous avons pris sept Béchers numérotés de 1 à 7, contenant 60 cc. d'alcool à 960. Nous avons ajouté à chacun 10 cc. de solution saline et gélatinée correspondant à chacun des mélanges I à VII. Nous avons préféré employer 60 cc. d'alcool au lieu de 50, car 50 cc. représentent la quantité-limite, nous estimons qu'il vaut mieux pour assurer la précipitation totale opérer un peu au-dessus de cette limite.
Le contenu de chaque verre est agité soigneusement pour obtenir la floculation complète et un liquide clair.
Dans les trois premiers verres, la précipitation se fait normalement comme dans le témoin 6. En 4 nous avons observé la précipitation du sel par l'alcool (SO* Mg), en 7 nous avons remarqué la forte coloration du précipité alors que la solution surnageante est restée incolore.
Après filtration et concentration du filtrat alcoolique jusqu'à réduction à 10 cc. environ, nous avons dosé l’azote resté soluble dans chacun.
Dans 6 solution étalon il reste .... 0 mmg. 31 de N soluble 1 Nam res 0 mmg. 92 — 2 CAC PTE re 1 mmg. 566 — 3 MORE se 1 mmg. 37 — 4 MgSO: MT 0 mmg. 46 — 5 SON 2? PRE à 0 mmg. 44 — fi Helena ... Ommg. 81 —
LPO
En nous reportant à ces résultats nous observons que la précipitation de la gélatine par l'alcool au point isoélectrique :
19 est moins complète en présence de sels qu'avec de la gélatine sans sel,
29 que les CHsaeee paraissent gêner cette précipitation plus que les sulfates.
Mais on peut se demander si la précipitation des sulfates par l’alcool n’est pas la cause de cette différence d'action.
En étudiant l’action des sels sur la gélatine nous avons vérifié que les sels tampons employés dans les expériences n'avaient pas d'action solubilisante.
La solution acide acétique-acétate de soude et la solution citrate-acide chlorhydrique se sont révélées totalement inactives, nous avons fait les expériences comparatives avec une solution à 5 % à pH 4,7 sans sels tampons, et des. solutions identiques contenant l’une le 1/10 de son volume de solution acétique à pH 4,7, l’autre le 1/10 de son volume de solution citrate-acide chlorhydrique.
Nous avons trouvé avec ces solutions des quantités d’azote restant soluble absolument identiques.
6° Conclusions. — Il résulte de ces expériences que pour précipiter commodément et totalement la gélatine par l'alcool, il faut :
a) Opérer au voisinage du point isoélectrique de la gélatine, ce qui est facilement réalisé à l’aide de sels tampons.
b) Obtenir un titre alcoolique final d'au moins 800.
c) Eviter la présence en quantités notables de certains sels comme NaCI, CaCl, MgCP qui gênent la précipitation.
