II. — Recherches personnelles
1° Précipitation de la gélatine ordinaire par l'acétone. — A) SOLUTIONS ÉTENDUES. — En versant une solution de gélatine à 2 % dans l’acétone, il se produit comme avec l’alcool un précipité blanc qui s'agglomère en une masse d'aspect un
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peu tendineux ; le liquide qui surnage est trouble, opalescent et ne se clarifie ni par filtration ni par centrifugation.
Le précipité formé très dur au début acquiert une consistance plus molle à mesure que l’acétone est diluée par la solution ajoutée.
Versons maintenant de l’acétone dans une solution de gélatine à 2 %, les premières gouttes d’acétone qui tombent déterminent la formation d’un précipité qui disparaît en se répandant dans la masse ; puis l’addition d’une plus grande quantité d’acétone provoque une précipitation persistante. Lor$que la quantité d’acétone ajoutée atteint un volume égal à celui de la solution, le précipité s’agglomère en une masse blanche molle d'aspect fibreux, enserrant dans ses mailles une grosse quantité de liquide. Le liquide qui surnage est trouble, opalescent. Triturons un peu le précipité pour en exprimer le liquide et décantons. Ajoutons de nouveau un volume d’acétone, ily a précipitation d'une nouvelle quantité de gélatine. Décantons une seconde fois le liquide surnageant, ajoutons de l’acétone, ilne se produit pas de précipité mais le liquide reste trouble.
B) SoLuTIONS CONCENTRÉES. — Etudions maintenant ce qui se passe avec les solutions concentrées.
Versons de l’acétone dans une solution de gélatine à 5 % par exemple. Tout se passe comme précédemment, mais le précipité est plus important. Si nous ajoutons de façon massive un volume d'acétone à un volume de solution gélatinée, nous obtenons un précipité occupant la presque totalité du volume de la solution primitive, mais une simple trituration suffit pour exprimer le liquide inclus.
En versant dans l’acétone, la solution gélatineuse à 5 ‘, nous obtenons le même résultat qu'avec la solution à 2 2e
Dans toutes ces expériences nous avons obtenu un précipité surmonté d’un liquide opalescent qu'il nous a été impossible de clarifier mécaniquement.
Mais le trouble ou le précipité obtenu par action de l’acétone sur une solution de gélatine disparaît par addi-
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tion d'acides forts ou d’alcalis : nous en avons été amené à étudier la précipitation de la gélatine en fonction de la réaction du milieu.
2° Précipitation de la gélatine, par l'acétone en milieu acide et en milieu alcalin. — Si à 5 cc. d’une solution de gélatine à 2 %, contenant une goutte d'HCI pur, ou une goutte de lessive de soude, nous ajoutons 5 cc. d’acétone il ne se produit aucune précipitation. On peut donc en conclure déjà que la présence d'acide ou d'alcali dans une solution de gélatine, empêche sa précipitation par l’acétone.
Mucieu AcDE. — Nous avons étudié cette action avec de l’acétone contenant 36 gr. 5 d’HCI par litre préparé ainsi :
En additionnant une solution à 2 % de gélatine de son volume de ce liquide, il n'apparaît ni trouble ni précipité. Après addition de 1 volume 1/2 d’acétone chlorhydrique, le trouble apparaît ; après addition de 2 volumes, nous avons obtenu un liquide laiteux, mais il n'y a pas de précipitation. |
En opérant de même avec une solution de gélatine à 5 %, ‘nous avons obtenu après addition de 2 volumes d’acétone un précipité surmonté d'un liquide fortement opalescent.
En versant dans l’acétone chlorhydrique la solution gélatineuse, nous avons obtenu un précipité et un liquide opaque laiteux.
La présence d'acide chlorhydrique a retardé la précipitation, mais en milieu chlorhydrique, le liquide surmontant le précipité reste plus trouble qu’en milieu neutre.
Muraeu ALCALIN. — Ne pouvant obtenir une solution acétonique de soude à 40 grammes par litre, en raison de la faible solubilité de la soude dans l’acétone, nous avons opéré en mettant la soude dans la solution gélatinée de façon à obtenir une concentration finale identique, afin
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de mener l'expérience en parallèle avec l'expérience à HCI.
Soit 3 tubes contenant 10 cc. de gélatine à 2 %. Ajoutons respectivement :
2 ce. — 3 ce. 4 ce. de NaOH 5N puis : |
8 cc. 12 ec. 16 ce. d'acétone
Dans le premier tube nous n'avons pas de précipité. Dans le second nous avons un trouble, le troisième prend un aspect laiteux.
Ajoutons à 50 ce. d’acétone, un mélange de 10 cc. de soude 5 N et de 10 ce. de gélatine à 2 %, il y a précipitation, et le liquide surnageant est fortement opalescent.
Donc la soude de même que l'acide chlorhydrique modifie la précipitation de la gélatine par l'acétone et conduit toujours à l'obtention d'un liquide fortement opalescent : opalescence due à de la gélatine restée en suspension dans le liquide. Toutefois, nous pouvons remarquer que l’action des acides forts et des bases fortes est moins accentuée avec l'acétone qu'avec l'alcool. Une solution de gélatine à 2 se trouble par addition d'acétone chlorhydrique, donne un précipité pour les fortes concentrations en acétone chlorhydrique, alors qu'elle ne donne aucun trouble ni aucun précipité avec l'alcool chlorhydrique ou sodé :
39 Précipitation de la gélatine par l'acétone au point isoélectrique. — Première expérience. — Soit une solution de gélatine à 2%; préparée avec de la gélatine ordinaire dont le pH oscille en général de 6à 7. Additionnons cette solution de 3 fois son volume d'acétone. Nous obtenons un précipité et un liquide surnageant opalescent. Faisons varier progressivement le pH en ajoutant goutte à goutte de l'acide acétique à 5 % en agitant soigneusement. A un certain moment, nous voyons apparaître dans le liquide de petits flocons qui se précipitent sur les parois du vase et sur l'agitateur, tandis que le liquide s'éclaircit.
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Pour une certaine acidité il y a donc résolution du trouble en un précipité.
Voyons ce qui se passe au point isoélectrique.
Deuxième expérience. — Soit une solution de gélatine à 2 %,, à pH 4,7. Additionnons cette solution de son volume d’acétone, il se forme un précipité mou, élastique ; agitons et triturons pour exprimer le liquide retenu par le précipité. Le liquide surnageant, d'abord un peu trouble, se clarifie par agitation. Le trouble se résout en un précipité.
Versons maintenant un peu de cette solution de gélatine dans l’acétone. La gélatine est précipitée tandis que le liquide se trouble, le précipité est grumeleux, dur, à aspect d’albumine coagulée. Agitons, nous voyons se former dans le liquide de petits flocons que l'agitation précipite sur les parois du verre et sur l’agitateur, laissant un liquide clair, limpide, facile à filtrer.
Donc au point isoélectrique, l'addition d’acétone à une solution gélatineuse amène la formation d'un précipité facile à séparer par filtration du liquide clair qui le baigne : à ce point isoélectrique, il nous sera possible d'obtenir la précipitation complète de la gélatine.
Pour réaliser pH 4,7 dans la solution de gélatine, nous avons mis à profit les propriétés des solutions tampons, comme nous l'avons fait en étudiant la précipitation de la gélatine par l'alcool. Une solution de gélatine ordinaire additionnée du 1/10 de son volume de solution tampon (solution acétique ou citrique) est facilement précipitée par l’acétone. Après agitation, le précipité obtenu est facile à séparer par filtration du liquide clair qui le baigne.
Au cours de ces expériences, nous avons remarqué que la précipitation de la gélatine par l’acétone est moins sensible aux faibles variations de pH que la précipitation par l'alcool, c’est-à-dire que la zone d’acidité (voisine de pH 4,7) où se fait la floculation, estplus étendue pour l’acétone que pour l'alcool. Cette propriété est sans doute en relation avec le pouvoir ionisant des deux liquides. Le pouvoir ionisant
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de l’acétone est en effet beaucoup plus faible que celui de l'alcool.
4° Concentration minima en acétone nécessaire à une précipitation complète. — On ne peut parler de précipitation totale de la gélatine qu'au point isoélectrique, car nous avons vu que dans les autres eas le liquide retenait toujours un peu
- de gélatine en suspension. C'est done à ce point que nous
étudierons la précipitation totale. ù
SOLUTIONS ÉTENDUES. — Soit à Bèchers numérotés de I à V dans lesquels nous avons placé respectivement :
10 ce. 20 ee. S0 ce. 40 ce. 30 ee.
d'acétone. Dans chacun, nous ajoutons 10 ce. de solution gélatinée contenant 1/10 de son volume de solution tampon à pH 4,7. Le contenu de chaque verre est agité soigneusement pour aider la floculation et la rendre bien complète. Nous obtenons en I, un précipité mou, spongieux, à consistance de gelée semi-fluide. En II, un précipité un peu plus ferme mais conservant un aspect géliforme.
Dans les autres verres, le précipité est grumeleux, plus ferme, mieux déshydraté. Séparons par filtration les prècipités et recueillons les filtrats. Après concentration des filtrats, évaporation de l’acétone, faisons la réaction du biuret, puis dosons l'azote resté soluble dans chacun :
Biuret I ET Il ?
IL et suivants —
Le dosage d'azote resté soluble est fait après évaporation de l’acétone, minéralisation au kjeldalh et dosage de NHS, formé par distillation (voir 2 partie, ch. 1, $ 4).
La prise d'essai renferme... ... 28 mmg. 4 de N Où LU Cest. res 2 mmg. S0 de N soluble D DE RTE ER 0 mmg. 31 »
RS SR CR QE 0 mmg. 09 »
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USE Re 0 +... 0 mmg. 06 »
