CHAPITRE III

Précipitation de la gélatine par les solutions salines concentrées.

de Généralités. 20 Précipitation d'une solution de gélatine à 2 %. 30 Précipitation d’une solution de gélatine à 5 %. 4° Précipitation de la gélatine par les sels en milieu acide et en milieu alcalin. 5° Conclusion.

jo Généralités. — Les sulfates de soude d’ammoniaque et de magnésie sont très couramment utilisés au laboratoire pour précipiter les protéines et pour les séparer.

Ainsi le sulfate de soude employé à demi-saturation à 104 précipite les globulines sans toucher aux albumines et il a été utilisé en raison de cela pour la séparation des albumines sériques (Méthode de Howe). Howe utilise pour cet usage une solution de SO* Na° anhydre à 222 %o. Guillaumin emploie la solution de sulfate cristallisé à 520 %o, ce qui représente 229% de sulfate anhydre. La solution saturée à 370 précipite la totalité des albumines.

Le sulfate d'ammoniaque à saturation précipite toutes les albumines. À demi-saturation il ne précipite que les globulines. L'action de la solution saturée sur les produits de digestion des protéines a servi à les classer en albumoses et peptones suivant qu'ils sont insolubles ou solubles dans cette solution.

Le sulfate de magnésie à saturation précipite les globulines sans précipiter les albumines vraies, il précipite également les histones.

Nous avons étudié l’action de ces sels sur la gélatine en utilisant les solutions salines suivantes :

TA Ne PAR ES Rare LUN POV NME US ID ST ENT OR

pee

b) Sulfate d'ammoniaque............... 400 g. Eau distillée, ....... eus q.s.p. 1.000 ce.

ce qui correspond sensiblement à la solution saturée à froid.

c) Sulfate de magnésie cristallisé......... 600 g. Eau distillée.…......... sus ü0s:.p:0. :1.000cc-

20 Précipitation d'une solution de gélatine à 2% par les sels: — Première expérience. — À 10 cc. d’une solution de gélatine officinale, ajoutons goutte à goutte en agitant un peu de solution saline, il se forme à chaque goutte un précipité qui se redissout par agitation et quand le volume de solution saline ajoutée atteint:

9 cc. pour la solution de sulfate de soude,

6 cc. pour la solution de sulfate d'ammoniaque, 11 ce. 5 pour la solution de sulfate de maynésie,

le précipité formé cesse de se redissoudre et s’accroît si nous continuons l'addition de solution saline.

Versons maintenant 15 cc. de solution gélatinée dans 10 cc. de solution saline, il se forme tout d’abord un précipité abondant puis la précipitation diminue au fur et à mesure de l'addition, et quand les 15 cc. de solution gélatinée sont versés, les précipités formés dans les solutions de sulfate de soude et de sulfate de magnésie sont entièrement dissous; pour la solution de sulfate d'ammoniaque, il faut ajouter 18 cc. de solution gélatinée pour que la redissolution du précipité soit totale.

Dans les trois cas, le précipité formé est facilement soluble dans l’eau froide ou par simple dilution de la solution saline, c'est un relargage. Il n’y a pas de précipitation tant que la concentration finale du sel dans la solution n’atteint pas |

108 gr. °/0o pour le sulfate de soude (SO‘ Na!)

150 gr. °/00 pour le sulfate d'’ammoniaque (SO: (NH:}) 320 gr. °/0o pour le sulfate de magnésie SO‘Mg, 7 H20.

Deuxième expérience. — Cherchons maintenant la concentration saline nécessaire à une précipitation totale. Soit

PET E is

3 séries de 6 Béchers numérotés de 1 à 6 contenant chacun 10 cc. de solution gélatinée à 2 %, et ajoutons respectivement :

10 cc. ; 20 ce. ; 30 cc. ; 40 ce. ; 50 cc. ; 60 cc. de solution saline.

1"e Série. Sulfate de soude, 2e Série. Sulfate d'ammoniaque.

3e Série. Sulfate de magnésie.

Dans chacun, il se produit une précipitation abondante à l'exception du 1° Bécher de la troisième série. Agitons, laissons reposer une demi-heure. Les 6 verres de la première série sont portés dans une étuve à 37°. Au bout de ce temps, filtrons.

Le contenu du 1 verre de la première série ne filtre pas. Celui du second verre filtre mal, les 4 autres filtrent bien.

Tous ceux de la deuxième série filtrent bien et dans la troisième série le contenu du premier verre où il n’y a pas de précipité ne filtre pas, tous les autres filtrent bien.

Dans ces filtrats nous avons étudié la réaction du biuret et nous avons dosé l’azote resté soluble.

Dans les filtrats de la deuxième série, riches en sels ammoniacaux, nous nous sommes contenté d'étudier le biuret. Dans les filtrats de la troisième série, riches en magnésie, l'addition de soude provoque la formation d'un précipité et rend le biuret d'exécution difficile, si bien que nous avons étudié :

1re série (SO“ Na?) — Biuret et azote reste soluble 2e série (SO: NH“)?) — Biuret 3e série (SO* Mg) — azote reste soluble.

Nous avons obtenu les résultats suivants :

1re Série . 2e Série 32 Série Biuret — Azote soluble Biuret Azote soluble