CHAPITRE Ii
Précipitation de la gélatine par l’acide trichloracétique.
19 Généralités. 20 Concentration acide nécessaire à une précipitation commençante. 3° Quantité d'azote restant soluble aux diverses concentrations acides. 40 Variation de la quantité d’azote soluble avec la concentration de la solution gélatinée. 5° Conclusions.
10 Généralités. — L'acide trichloracétique en solution à 20 % est aujourd'hui le désalbuminant le plus couramment utilisé en chimie biologique. Il précipite la totalité des albumines, mais laisse passer à travers les filtres la totalité des polypeptides. On l’utilise en ajoutant au liquide à déféquer un volume égal de solution acide à 20 % : c’est la défécation à acidité forte (technique de Moog). On emploie également la solution à 8 %, c'est la défécation à acidité faible. Goiffon emploie une solution à 3 % et défèque le sérum sanguin pour le dosage colorimétrique des polypeptides (index tyrosine) avec :
Sérum 1 cc.
Sol acide 9 cc.
Cristol et Nicholitch, en étudiant l’action de l'acide trichloracétique à diverses concentrations sur le sérum sanguin, ont remarqué que la quantité d'azote restant dans le filtrat passait par deux maxima pour les concentrations de 8 % et 50 %, et présentait un palier entre les concentrations de 10 % et 30 %,. (Voir page 87, courbe IV.)
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Grienfagen et Scholl ont utilisé l'acide trichloracétique pour séparer la gélatine des protéoses utilisant la propriété de celles-ci d’être plus facilement précipitées par l'acide trichloracétique que la gélatine : la précipitation de la gélatine par l'acide trichloracétique exige des concentrations acides élevées.
Nous nous sommes proposé d'étudier cette précipitation et de rechercher les concentrations acides qu'il était nécessaire d'obtenir pour avoir :
a) Une précipitation commençante ;
b) Une précipitation totale.
Et nous avons étudié en même temps la quantité d’azote resté en solution pour les diverses concentrations acides.
2° Concentration acide nécessaire à une précipitation commençante. — Si dans une solution d'acide trichloracétique à 20 % on laisse tomber une goutte de sérum sanguin, ou une goutte de solution gélatinée à 5 % ou à 10 %, il se produit dans les deux cas une précipitation de la matière protéique. Lorsqu'on fait tomber goutte à goutte de l'acide trichloracétique dans du sérum sanguin, chaque goutte acide qui tombe forme un précipité qui se répand dans la masse sans se dissoudre.
Si, au contraire, on ajoute à une solution de gélatine de l'acide trichloracétique à 20 %, chaque goutte d'acide en tombant forme un précipité qui se redissout dans l'excès de gélatine. Cette redissolution se fait jusqu’à ce que l'acide ait atteint au sein du liquide une certaine concentration.
Expérience. — Dans un tube à essai plaçons 10 cc. de solution de gélatine à 2 %. A l’aide d'une burette graduée ajoutons de l'acide trichloracétique à 20 % en agitant soigneusement après addition de chaque goutte. Il nous a fallu ajouter 3 cc. 2 de solution acide pour avoir un trouble persistant.
Cette quantité d'acide est variable avec la concentration de la solution gélatinée, comme le montre l'expérience suivante.
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Expérience. — Dans 6 tubes à essais numérotés de 1 à 6, ‘nous avons mis respectivement :
Solution gélatinée à 10 °/ :
2 ce. 4 cc. 5 ec. 6 cc. 8 cc. 10 ce.
et eau distillée $ 8 cc. 6 cc. 5 ce. 4 cc. 2 ce. 0
Nous obtenons ainsi dans chaque tube 10 cc. de solution gélatinée de concentration
Dans chaque tube nous avons ajouté de l’acide trichloracétique à 20 %, jusqu'à obtention du trouble persistant, il nous a fallu ajouter respectivement :
3 cc. 2 3 ce. 3 3 ce. 4 3 cc. 5 3 ce. 6 3 cc. 6
Donc pour que la précipitation commence, il faut que la concentration de l’acide atteigne une certaine valeur au sein du liquide. Cette valeur est variable avec la concentration de la solution gélatinée; elle doit atteindre 4 g. 8 % pour une solution de gélatine à 2 % et 5g. 30 % pour une solution de gélatine à 10 %. Seule la concentration en acide libre importe et les alcalis retardent d'autant l'apparition du précipité.
Si, lorsque cetrouble est atteint, nous continuons à ajouter de l'acide, le trouble s’épaissit, il se forme un précipité abondant.
Continuons à ajouter de l'acide jusqu'à addition d'un volume égal à celui de la solution gélatinée. Agitons violemment, le précipité s’agglomère en une masse visqueuse à la partie supérieure du tube à essai, laissant au-dessous un liquide clair. Jetons sur un filtre, la filtration est rapide et donne un liquide parfaitement limpide. Cependant la précipitation est incomplète.
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Le filtrat neutralisé donne un précipité par le tanin et une réaction du biuret positive.
30 Quantité d'azote restant soluble aux diverses concentrations acides. — Expérience. — Dans 5 tubes à essais numérotés de 1 à 5, mettons :
Gélatine à 10 % 5 cc.
et respectivement :
PAROISSE Tr dm 4 Acide trichloracétique au 1/3... 1
D CO Le) oh (=)
Nous avons ainsi dans chaque tube la même quantité de gélatine, le même volume final, et les concentrations en acide trichloracétique sont de :
1/30 ‘1/16 1/10 DST CEE
Dans le tube 1 il n’y a pas de précipitation. Le contenu des autres tubes est filtré et nous dosons N resté soluble dans chaque filtrat.
Les chiffres d'azote sont rapportés à 10 cc.
La prise d'essai contient 71 mmg. deN.
ss En 2 iïlreste 49 mmsg. de N soluble ee » 14 mmg. 48 »
À » 2 mmg. 57 »
5 » 1 mmg. 68 »
Sur chaque filtrat, nous avons fait, après neutralisation, la réaction du biuret. Nous l’avons obtenue positive dans les 4 premiers tubes et douteuse dans le tube 5.
Nous avons poursuivi l'expérience par de très fortes concentrations en acide trichloracétique.
Dans les tubes 6, 7, 8 et 9, nous mettons 10 ec. de solution gélatinée à 10 %.
En 6 nous mettons 10 cc. d'acide trichloracétique au 1/2 7 ; 15 ce.
8 20 cc.
9 30 cc.
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Après agitation, nous filtrons et nous dosons N sur 10 cc. de filtrat. SR
En 6 ilreste 0 nue: 87 de N dans 10 ce. de filtrat
IRD 1 mmg. 05 » » »
Nous voyons que pour les très fortes concentrations acides, la quantité d'azote restée soluble croît.
Sur chacun de ces filtrats neutralisés nous avons fait la réaction du biuret ; nous l'avons obtenue négative dans tous.
49 Variation de la quantité d'azote soluble avec la concentration de la solution gélatinée. — Refaisons l'expérience précédente en employant unesolution gélatinée à 5 %-
En dosant N dans les filtrats nous avons obtenu :
En 2 il reste 26 mmg. 6 de N soluble dans 10 cc. de filtrat
3 » 7 mmg. 28 » » »
4 » 1 mmg. 70 » » »
5 » 0 mmg. 85 » » »
6 » 0 mmg. 51 » » »
7 » 0 mmg. 44 » » »
8 » 0 mmg. 53 » » »
9 » 0 mmg. 65 » » »
Avec une solution gélatinée à 2 % nous avons obtenu les chiffres suivants :
Prise d'essai 14 mmg. 2 En 2 ilreste 9 mmg. 80 de N soluble dans 10 cc. de filtrat
3 » 2 mmg. 77 » » »
À » 0 mmg. 23 » » »
5 » 0 mmg. 27 » » »
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Si pour chaque essai nous rapportons la quantité d'azote resté soluble à la quantité d'azote, nous obtenons le tableau suivant :
N® Concentration Azote soluble pour cent d’azote total
des finale PTE CV. TT essais enacide gélatineà10% gélatine à5% gélatine à 2%
