CHAPITRE III

Germination et fécondation des spores. — Délais. — Observations

sur la fécondation.

Peu de temps après avoir été déposée sur le limbe, la spore germe. Les époques favorables sont le mois de mai et surtout novembre-décembre -janvier.

Elle émet un filament épais transparent, terminé par une pseudo-spore généralement lisse au début, grosse, couleur brun-clair ou ambre. La marche de ce filament est le plus souvent sous-épidermique ; il s'enfonce dans la feuille au sortir de la spore et apparaît à petite distance terminé par sa pseudo-spore. Souvent comme obéissant à une loi d'attraction, celle-ci émerge près d'une spore femelle qu'elle touche et féconde [b, pi. I et c, pi. II). Si aucune spore femelle ne se trouve dans le voisinage, la pseudo-spore mâle peut se dessécher et périr, mais elle peut aussi émettre un, deux ou plusieurs jets secondaires [c, d, e, pi. II) terminés également par des pseudo-spores plus petites que la première qui vont, comme la première, à la recherche d'une spore femelle ; la subdivision peut continuer, la pseudo-spore mâle diminuant de volume juscju'cà devenir très petite, aussi petite que la pseudo-spore femelle que nous décrirons plus loin, mais conservant une forme triangulaire, pointue, qui indique que sa nature est de percer.

On a observé sur feuilles de chêne et d'épicéa, à travers l'épiderme, des subdivisions sous-épidermiques du filament mâle ; (jnehiues cas très rares ont été vus à la surface (^, pi. II).

]{n novembre-janvier, le filament présente quelquefois une marclie superficielle très courte. Ces exceptions peuvent être sans doute attribuées, soit à la dureté de l'épiderme du

Fig. 4 — Exemple assez rare d'évoluliou d'un germe mâle.

limbe, soit à l'état de la spore brisée et fendue par la trituration, soit à la vigueur, à la brutalité de la germination en cette saison : celle-ci est parfois si impétueuse que la pseudospore ne se donne pas le temps, dirait-on, de percer l'épiderme, afin d'aller plus vite au but. Elle se dirige alors franchement sur la spore femelle voisine et y applique sa pointe [a et c, pi. I et fig. 8). Lorsque la spore mâle se trouve tout à côté d'une femelle, elle peut suivre dans son développement la marche indiquée dans la figure 4 ; c'est-à-dire que par

une série de transformations successives rapides, elle prend la forme d'un petit ver dont la tête demeure parfois coiffée d'un morceau de tégument rugueux enlevé à la spore et dont la partie fine féconde directement ou par filament. L'évolution peut être terminée dix jours après l'ensemencement ; pour la bien observer, il faut la suivre jour par jour.

Ce mode de fécondation est fort rare, puisque sur des centaines d'observations, je ne l'ai aperçu que trois fois, mais de façon certaine ; deux fois en juillet et une fois en octobre,

sur un chêne mal placé, malingre, privé d'air et de soleil, en un mot dans des circonstances défavorables par la qualité et la position de la feuille. Ayant voulu me rendre compte la dernière fois si le filament intermédiaire, parfaitement visible, qui reliait l'extrémité du ver à la spore

lemellé, partait de celle-ci ou du ver, j'ai passé sur le limbe un pinceau mouillé, la spore a fini par s'en aller et il est resté ce qu'on voit figure 5, n° 2, la petite pointe noire qui était cachée est devenue parfaitement visible.

On peut, à première vue, confondre avec ces sortes de petits vers fécondateurs le croissant des fig. a et d, pi. I, et penser qu'il y a erreur. En réalité, les deux objets sont différents. Les croissants des figures a et d, pi. I, ne sont autre chose qu'un reste de tégument de la spore mâle qui s'est vidée dans sa pseudo-spore. Les germinations superficielles mâles de cette forme se voient en hiver.

Que font pendant ce temps les spores femelles ? Les unes demeurent inertes, les autres émettent un ou plusieurs filaments terminés par une sporule plus petite que les pseudospores mâles d'origine, noires et généralement rondes.

Ce filament chemine sous l'épiderme ou à la surface, en hiver ; quelquefois la sporule reste accolée à la spore {d, pi. II). D'autres fois elle se dirige comme obéissant à une attraction vers une spore ou pseudo-spore mâle voisine et la touche [a et d, pi. I, b, pi. II).

Après un délai variable, selon les saisons, on voit quelques-unes de ces sporules devenir, sans doute par suite de fécondation, plus grosses, luisantes, dures, absolument sphériques. Ce sont alors vraisemblablement des œufs ou germes complets ; ils peuvent laisser apercevoir comme un commencement de germination, sur feuilles. Tombant à terre, ils engendreraient, lorsque les circonstances s'y prêtent, le mycélium truffier.

Quelquefois, on voit apparaître ejt été d^s sporules, disposées en chapelet, distancées et reliées par un filament invisible qui part de la spore femelle {a, pi. Il) (i).

Les spores femelles peuvent émettre, comme je l'ai dit, un ou plusieurs filaments à sporules (fig. 6j. On pourrait con-

1. Les sporules qui se présentent ainsi t-n chapelet à la surface du limbe, en été seulement, donc en un moment très défavorable, ne pourraient-elles pas être assimilées à des conidies, d'après l'idée que nous nous en faisons?

dure de là qu'il existe des germes multiples dans chaque spore femelle, celle-ci étant en quelque sorte une sporange plutôt qu'une spore^ Cette manière de voir serait confirmée par l'aspect que présentent certaines spores fraîches vues par transparence. On aperçoit à l'intérieur des globules isolées et distinctes, sept, huit ou davantage : ces globules seraient alors autant d'ovules femelles indépendants.

Puisque nous parlons ici de l'aspect des spores , nous devons ajouter que, malgré d'attentives recherches, il n'a pas été possible d'apercevoir entre les spores aucun signe extérieur de sexualité, sauf peut-être l'indice "%

dont on vient de parler. Hors de là, rien ne paraît différencier les spores, soit entre elles ^ dans Vasque, soit au dehors.

En résumé, les modes de fécondation seraient les suivants :

Fécondation de spore femelle par pseudospore mâle ;

Fécondation de sporule femelle par spore ou pseudo-spore mâle. ^,. ^

Enfin, quelques indices et une ou deux observations directes laisseraient supposer qu'il peut y avoir production d'œufs par rencontre sous-épidermique de filaments.

La fécondation, étant donné que la pseudo-spore mâle est constituée, peut-elle avoir lieu autre part que sur la feuille ? Il semble que non. On a mis en contact prolongé des germes mâles, obtenus sur feuille avec d'autres spores en milieu humide ; aucun résultat n'a été obtenu. Les spores de sexe différent, même germées, restent indéfiniment en contact, autre part que sur feuille, sans qu'il se produise rien qui ressemble à une fécondation.

Naturellement la spore mâle ne produit pas d'œufs, mais elle émet, comme nous l'avons dit, des filaments terminés par des pseudo-spores de plus en ])lus petits : celles-ci, malgré leur forme triangulaire, peuvent donner l'illusion d'être

des œi;fs germant surtout lorsqu'ils sont à demi-noyés dans le parenchyme ou en contact avec l'œuf d'une spore femelle voisine.

A cette cause d'erreur dans l'observation s'en ajoute une autre plus sérieuse et spéciale à la Truffe. Le limbe des feuilles est couvert de débris de toutes sortes produits par l'écrasement que l'on a fait subir à la pulpe, afin d'en libérer les spores. Ces fragments ronds, pointus, ovoïdes, difformes et de toutes couleurs, sont confondues avec les pseudo-spores mâles que l'on croit alors voir partout ou que l'on ne voit nulle part.

Cette difficulté d'observation existe à un bien moindre degré lorsqu'on étudie les spores de basidiomycètes.

Délais. — Les délais entre l'ensemencement et l'accouplement sont, en mai et pendant l'hiver, de neuf à dix jours au moins ; ils se prolongent parfois beaucoup et l'on peut voir de nouvelles pseudo-spores paraître et des fécondations se produire à plusieurs semaines de distance.

De juin à septembre les délais sont plus longs. Il y a alors enonnéinent de manquants ; toutefois, sur feuille abritée et humectée, on aperçoit quelques germinations. Le développement est long : on dirait que la nature cherche à gagner du temps. Ainsi, contrairement à ce qui se passe pour d'autres champignons, tels que Morilles, Psalliotes, etc., les spores de Truffe peuvent commencer leur évolution pendant les mois chauds, quitte à la prolonger sans hâte jusqu'aux gelées.

Après un temps, court en été, la pseudo-spore mâle se flétrit et tombe.

A partir de février, la saison est peu favorable.

En résumé donc, de ce qui précède, on peut conclure que les spores de Truffe se comportent comme des gamètes dissemblables et que, par conséquent, la Truffe est wne. plajite hétérogame.

Terminons ce chapitre par quelques observations de technique microscopique.

Fig. 7. — Filament sous-cpidermique aperçu au printemps.

Les filaments sous-épidermiques sont invisibles ; ils peuvent être très exceptionnellement aperçus à travers l'épiderrae sur feuilles jaunes transparentes, ensemencées au printemps {6, pi. I et fig. 7).

On arrive à distinguer de temps en temps, sans le secours des colorants, certains gros filaments mâles extérieurs des germinations d'hiver, malgré leur transparence, lorsqu'ils ne sont pas trop longs. La figure 8 montre une forme de germination assez fréquente.

Les colorants, avec ou sans l'emploi préalable de décolorants (eau de javelle diluée, etc.), n'ont aucune action directe sur ces filaments, mais ils peuvent les faire apparaître par la teinte qu'ils donnent à ce qui les entoure ou en déposant sur leurs parois.

L'hématoxiline, le brun de Bismark, le bleu de quinoléine, l'iode, le nitrate d'argent, la fuchsine ont donné à ce point de vue des résultats équivalents et généralement médiocres. Le violet de méthylène réussit mieux. On teinte légèrement de violet quelques gouttes de glycérine étendue d'eau; le morceau de feuille, très petit, est laissé plusieurs heures dans cette préparation, puis observé.

Fig. 8. — Différentes étapes de quelques germinations extérieures d'hiver.