CHAPITRE IV

EXPÉRIENCES DE CULTURE ET D'INOCULATION

Plusieurs observateurs ont depuis longtemps tenté de suivre les transformations du Bilharzia, et, pensant que le cycle biologique de ce dernier était semblable à celui des distomes, ont essayé de fournir à son embryon des hôtes dans lesquels il pourrait accomplir ses métamorphoses. Dans ce but, ils ont ensemencé d'oeufs de Bilharzia des aquariums renfermant différentes espèces d'animaux aquatiques. Toutes les expériences ont été vaines. On a fourni à l'embryon les hôtes les plus divers, pris parmi des mollusques ou même parmi des arthropodes ; jamais on n'a pu voir l'embryon pénétrer dans ces hôtes et s'y transformer, de sorte que jusqu'ici, il y a une lacune complète dans l'histoire de cet intéressant parasite. Sa première phase larvaire (embryon infusoriforme) nous est connue, aussi bien que sa forme adulte et sexuée, mais le ou les intermédiaires qui existent entre les deux termes extrêmes échappent absolument à la science Nos expériences, comme toutes celles qui ont été faites jusqu'ici, ont ou des résultats négatifs; nous les reproduirons cependant, parce qu'elles nous paraissent'avoir un intérêt dans la question, tant à cause de leur continuité, qu'à cause des divers procédés qui ont été employés pour obtenir une moculation soit directe, par l'œuf ou l'embryon avalés tels que par les sujets, soit indirecte, en faisant manger à nos individus en expérience des animaux aquatiques qui, mis en contact avec les embryons ciliés, auraient pu servir d'hôtes à ces derniers, à leurs rédies ou à leurs cercaires.

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Université de Lyon. — i\. \.

ÉTUDE SUR LE BlLHARZIA HyEMATOBIA

Expériences de culture des embryons dans l'eau.

Nous avons déjà vu plus haut (page 39) comment se comporlenl dans l'eau les embryons éclos; mais il est clair que le procédé de culture employé dans les expériences susindiquées, très bon pour permettre de suivre les embryons immédiatement après qu'ils ont quitté leiir coquille, est iabsolument insuffisant à tout autre point de vue, car les embryons confinés dans une petite masse d'eau pure, ne renfermant ni plantes ni animaux, ne se trouventpas dans des conditions normales, et peuvent fort bien ne pas se développer. Aussi, pour fournir à nos larves des conditions de vie semblables à celles qui favorisent le développement des distomes en général, nous nous sommes préoccupés de rassembler dans des cristallisoirs des plantes aquatiques sur lesquelles elles auraient pu s'enkyster comme le font les cercaires des douves, et des animaux dans lesquels elles auraient, au besoin, trouvé un hôte capable de les héberger elles ou leurs descendants.

Pour cela nous avons ,^installé sur des éviers bien éclairés un certain nombre de cristallisoirs larges de 20 à 30 centimètres, profonds de 10, et dans lesquels on a placé différentes plantes aquatiques: Lemna minuta, Lemna gibba, Utricularia viilgaris, Jussiœa, Myriophyllum, différentes espèces appartenant au genre Potamogeton, ainsi que des touffes du Cresson commun. De petites trompes d'Alvergnat faisaient passer de nombreuses bulles d'air à travers la couche aqueuse et empêchaient ainsi toute putréfaction de se manifester. Tous les jours des centaines d'œufs de Bilharzia, en parfait état, étaient jetés dans l'eau des cristallisoirs. Mais malgré toutes les précautions prises, les embryons du distome ne vivaient dans cette eau parfaitement pure que pendant 24 ou 48 heures au plus. Nous ne retrouvions ensuite que les cadavres des embryons plus ou moins altérés. Mais dans aucun cas, nous n'avons pu constater une tendance à une transformation quelconque. Jamais nous ne les avons trouvés fixés aux feuilles des plantes aquatiques ou à l'intérieur de leurs tissus.

Ces expériences ont été faites au printemps de lannée 1893,

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lorsque nous avions à notre disposition des œufs en quantité considérable. Le laboratoire était, à ce moment-là, fortement chaulfé, de telle sorte que jamais la température de l'eau des cristallisoirs n'est descendue à un minimum de -{-12".

A la suite des insuccès qui furent le seul résultat de cette longue série d'expériences, nous avons pensé que peut-être, dans les cristallisoirs la masse des eaux était trop peu considérable pour permettre aux embryons de subir leurs métamorphoses *, et pour remédier à cet inconvénient nous avons installé un grand aquarium de la contenance de 70 à 80 litres, et dans lequel ont vécu bientôt une foule d'algues, de petits crustacés et d'animaux inférieurs constituant une faune peu différente, au moins au point de vue des genres, de celle qui anime l'eau des birkets dans lesquels se développe probablement le Bilharzia. Ce qui prouve d'ailleurs que les conditions de vie, dans cet aquarium, n'étaient pas très différentes de celles que l'on observe dans ces sortes de mares, c'est que nous avons pu y faire vivre pendant quelques temps des coquilles fluviatiles rapportées d'Egypte. Nous avons ensemencé cet aquarium pendant deux années, en y jetant, chaque jour, un grand nombre d'œufs; puis nous avons recherché les embryons, soit en puisant de l'eau en différents points de son étendue, soit en y faisant des pêches au filet fin. A l'aide d'une petite pochette en soie promenée dans l'aquarium, nous ramenions une grande quantité de ses hôtes, algues, crustacés, infusoires, mais nous n'avons jamais retrouvé d'embryons de Bilharzia, ni d'autres formes animales qui puissent être regardés comme dérivés de ces embryons. Comme par ce procédé de recherche les embryons pouvaient nous échapper, bien qu'en réalité, s'ils s'étaient développés, ils dussent

1. On sait, en effet, que l'étendue de leur habitat a sur la croissance des animaux aquatKiues une influence considérable, et que les animaux conflnés dans de petites masse d eau resten nams (Voyez de Varigny, Recherches sur le nanisme expérimental, Jo^u•n de Anal., 1894). Les données de Seraper, rapportées par de Varigny être enVon '"'^'^'"V"""''-^"^ ''^"teur allemand atîachait une valeur pén ètre encore plus considérable à ce facteur: Ictendue de l'habitat aussi n'v aurait il

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ÉTUDE SUR LE BILHAUZIA HyEMAÏOBIA

être cil nombre considérable, nous avons pensé à faire profiter les' embryons dos avantages de ce milieu, tout en les renfermant dans un endroit limité où il nous serait facile de les retrouver. Pour cela, nous avons construit des sortes de pièges dans lesquels les embryons étaient retenus, et qui, places dans l'aquarium, permettaient au liquide contenu dans ce dernier de circuler dans leur intérieur. Ces pièges consistaient en de petites pochettes de soie dans lesquelles on plaçait un grand nombre d'œufs, et qui, fermées par un lien circulaire, étaient plongées dans l'aquarium. Les œufs y éclosaient très bien, comme nous avons pu nous en rendre compte, et l'eau de l'aquarium y pénétrait librement en passant à travers les pores de l'étoffe, d'ailleurs assez grands; en effet, examinée au microscope, la soie se présentait comme un lacis régulier de fils croisés à angle droit, et laissant entre eux des espaces quadrangu- I aires mesurant environ de 2 à 5 centièmes de millimètre. Il est certain que quelques embryons pouvaient, en s'effilant, s'échapper par ces interstices, mais le plus grand nombre d'entre eux restait dans le piège, comme nous avons pu nous en convaincre plusieurs fois., Au bout de vingt-quatre heures, les pochettes étaient retirées de Feau, ouvertes, et en raclant leur intérieur avec un scalpel, on ramassait une infinité d'animaux microscopiques, rotateurs, infusoires, qui s'y étaient introduits, en même temps que quelques embryons provenant des œufs qui y avaient été enfermés. Ces embryons, qui s'étaient trouvés au point de vue du milieu dans des conditions bien plus favorables que ceux élevés dans de petits cristallisoirs, s'étaient cependant comportés comme ces derniers, c'està-dire étaient morts sans s'être développés.

Pensant que peut-être une aération insuffisante pouvait être la cause de nos insuccès, dans le même aquarium, nous avons jeté les œufs tout simplement dans de petits filets en soie placés à la surface même du liquide, et par conséquent en contact constant et facile avec l'air atmosphérique. L'éclosion des œufs se faisait parfaitement bien dans ces conditions, mais de même que précédemment, nous pouvions constater que les embryons ne tardaient point à périr au lieu de se transformer.

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On peut donc conclure de nos expériences répétées avec une grande persévérance pendant deux années consécutives, que l'œuf éclùt dans l'eau et que l'embryon vit dans ce liquide pendant plusieurs heures, mais que ne pouvant pas se transformer dans un pareil milieu, il ne tarde pas à mourir.

Expériences de culture des embryons dans les liçtuidea

organiques.

Nous avons vu que l'urine empêche l'éclosion des œufs et tue les embryons éclos. 11 importait de rechercher l'action d'autres liquides organiques, aussi avons-nous expérimenté à la fois sur le lait et sur le sang.

Lait. — On stérilise du lait afin d'empêcher sa coagulation, et on le distribue dans plusieurs cristallisoirs de petite taille (5 centimètres de diamètre pour 2 1/2 de hauteur) dans lesquels on introduit un certain nombre de caillots légèrement dilacérés, et renfermant des œufs vérifiés en bon état. Les cristallisoirs sont abandonnés dans l'étuve à 37 degrés pendant 24 heures. Au bout de ce temps on les retire, on verse le lait sur une large feuille de papier à filtrer à la surface de laquelle il est aisé de retrouver les caillots. Ces derniers, examinés au microscope, sont remplis d'œufs complets (formés par l'embryon et la coquille), pas une coquille ne se montre vide, il est évident qu'aucun œuf n'est éclos. Un examen répété a toujours confirmé ce résultat, les œufs riéclosent pas dans le lait. Mais les œufs qui ont séjourné 24 heures dans le lait à 37 degrés renferment-ils des embryons encore aptes à éclore? Rien n'est plus facile à décider. Si l'on lave à l'eau les caillots extraits du lait, et qu'on les place dans une goutte d'eau pure, on ne tarde pas à voir éclore les embryons, et ces derniers nous ont paru aussi vivaces que ceux provenant de caillots retirés fraîchement de l'urine.

Il faut donc conclure de ceci, que les œufs n'éclosent pas dans le lait, mais qu'un séjour de vingt-quatre heures dans ce dernier n'altère pas l'embryon qu'ils renferment. Contrairement à l'urine, le lait ne tue pas les embryons déjà éclos. Si après avoir fait naître

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dans une goutte d'eau plusieurs embryons cilids, on ajoute du lait, les embryons continuent à se mouvoir dans ce liquide sans paraître incommodés. On peut les observer dans le lait pendant deux ou trois heures, à la condition d'éviter la dessiccation, mais il est impossible d'avoir des observations aussi suivies que celles rapportées ci-dessus, page 60 ; en effet, il est impossible, à cause de l'opacité du lait, de retrouver au bout de vingt-quatre heures les embryons qui avaient été mis dans ce dernier la veille. Quoiqu'il en soit, on voit que les embryons qui n'éclosent pas dans le lait peuvent néanmoins y vivre pendant quelques heures.

Sanr/. — Le sang donne les mômes résultats que le lait. Nous avons fait à ce sujet de nombreuses expériences en nous servant de sang de veau, de mouton, ou de lapin, préalablement défibriné pour éviter la formation d'un caillot qui aurait arrêté les mouvements des embryons et aurait pu tuer ces derniers en les emprisonnant dans son intérieur. Les œufs placés dans le sang n'éclosent pas, du moins nous ne les avons pas vus éclore en les observant pendant deux ou trois heures consécutives dans une goutte de sang. Il a été impossible de prolonger l'observation vingt-quatre heures, parce que le sang mis à l'étuve subit pendant ce laps de temps des modifications chimiques très considérables à la suite desquelles il s'y forme des flocons d'albumine au milieu desquels

11 est impossible de retrouver les caillots renfermant les œufs. D'ailleurs les œufs qui ont séjourné dans le sang donnent bien vite des embryons dès qu'on les met dans l'eau pure. Enfin, lorsqu'on place des embryons éclos dans du sang défibriné, ils continuent à se mouvoir comme s'ils étaient dans l'eau, et rien n'est curieux comme de voir leur corps transparent se déplacer avec rapidité en laissant derrière eux un sillage incolore dû à l'écartement des globules rouges. On peut observer ces mouvements pendant un certain temps. Ces résultats pouvaient être prévus, car, si les œufs éclosaient dans le sang les embryons se rencontreraient en grand nombre chez les individus atteints de Bilharziose, tandis qu'on n'en a jamais trouvé. Quoi qu'il en soit, ces résultats expérimentaux, quoique négatifs, étaient intéressants à signaler.

EXPÉRIENCES DE CULTURE ET D'INOCULATION

Tentatives d'inoculation à différents moUusçLues de nos pays.

Dans de grands aquariums, placés dans les conditions dont nous avons parlé plus haut, nous avons jeté au milieu des Lemna et d'autres plantes aquatiques, de très nombreux individus des différentes espèces de Limnées qui vivent dans les sources, les ruisseaux ou les mares des environs de Lyon. C'étaient les espèces suivantes, déterminées avec soin par notre savant ami M. Locard :

Limnma auriculata;

— Hartmanni;

— laciistrina ;

— succinea;

— Pfeifferi;

— roxa;

— peregra.

Tous les jours, trois ou quatre mille œufs, au moins, étaient jetés dans l'eau de ces aquariums, et chaque jour aussi, un certain nombre de mollusques étaient péchés pour être autopsiés minutieusement. Dans l'eau des aquariums, sur les feuilles des plantes aquatiques, ou sur les corps même des Limnées, nous avons trouvé des coques nombreuses et vides d'œufs de Bilharzia, des embryons ciliés morts et déformés, mais jamais dans les organes ou les tissus de ces mollusques autre chose que les cercaires des différentes douves du Mouton ainsi que des kystes renfermant une forme d'un distome inconnu, mais qui ne peut être le Bilharzia, puisque nous l'avons rencontré un très grand nombre de fois sur des Limnées provenant directement des sources de nos environs et n'ayant point encore été mis en contact avec les œufs ou les embryons de notre parasite. Espérant obtenir plus facilement l'infection des Limnées en réduisant l'espace et la quantité d'eau, nous avons placé ces mollusques, accompagnés de Lemna, dans de très petits cristallisoirs. Tous les matins, de grandes quantités d'œufs en bon état étaient projetés dans ces aquariums en miniature dont l'eau était

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soigneusement maintenue en bon état. Tous les jours, un certain nombre de Limnées étaient autopsiées avec soin, leurs organes examinés au microscope; mais le résultat liit toujours négatif, comme dans les expériences précédentes.

A des mollusques de la vallée du Nil.

Au mois de janvier 1894, nous avons rapporté des environs du Caire un grand nombre de Vivipara unicolor Oliv., qui pullulent dans les mares et les canaux de la basse et de la moyenne Egypte. Ces animaux, arrivés en parfait état, furent placés dans un aquarium où ils se multiplièrent rapidement, preuve que les conditions d'existence au milieu desquelles ils se trouvaient devaient leur être éminemment favorables. Chaque jour, depuis la fin de janvier un grand nombre d œufs étant jetés dans cet aquarium. Au mois de juillet, les Vivipara furent autopsiées avec un soin minutieux, mais ne présentèrent jamais rien qui pût ressembler à un kyste, à une rédie ou à un cercaire pouvant être regardé comme une forme larvaire du Bilharzia.

A des cobayes.

Un lot de douze cobayes est distribué dans un certain nombre de cages de notre laboratoire. Tous les jours, depuis le 28 janvier 1893 jusqu'au 2 juillet de la môme année, on leur introduit dans l'estomac une petite sonde œsophagienne. Par ce tube on fait pénétrer dans la cavité stomacale un grand nombre d'œufs de Bilharzia englobés encore dans des caillots sanguins ou tenus en suspension dans de l'eau.

Ces animaux sont tous sacrifiés du 3 au 7 juillet. L'autopsie est faite avec le plus grand soin, mais on ne trouve aucune trace du parasite, sous la forme adulte ou larvaire, ni dans le foie, ni dans la veine porte, ni dans les veines mésentériques. Les vessies de ces animaux, examinées avec beaucoup de soin, ne montrent aucune trace d'œuls dans les couches superficielles ou profondes de la muqueuse. Les poumons sont aussi parfaitement sains.