VIRUS CHAUFFÉ A

au 20».

pendant 15 minutes.

!•' cobaye.

. -h !•' lapin.

!•' cobaye. . -h 1*' lapin. .

2* cobaye.

. ± 2« lapin.

au 40*.

2« cobaye. . -^ 2« lapin. .

pondant 30 minutes.

!•' cobaye.

. 0 1" lapin.

1" cobaye. .0 !•' lapin. .

2* cobaye.

. ± 2« lapin.

au 100«.

2« cobaye. . ■± 2« lapin. .

pendant 40 minutes.

\ •' cobaye.

. -f !•' lapin.

!•' cobaye. . ± 1" lapin. .

2« cobaye.

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2" cobaye. . -f- 2* lapin. .

pendant 60 minutes.

!•' cobaye. . -f- !•' lapin. .

2* cobaye. . ±. 2* lapin. .

En somme, le virus dilué a produit, au hasard, des lésions tuberculeuses chez les lapins et les cobayes, tandis que le virus atténué par le chauCfage a tuberculisé 7 cobayes sur

8 et 0 lapin sur 8, c'est-à-dire s*est comporté comme du virus scrofuleux.

Un virus tuberculeux qui, introduit dans le tissu conjonclif de lapins et de cobayes, épargne les premiers pour luberculiser les seconds, est donc un virus dont les bacilles, plus ou moins nombreux, sont en tous cas atténués. Cette expérience suffit à démontrer que les lésions dites scrofuleuses, que les lésions tuberculeuses primitivement locales, sont dues à des bacilles atténués.

D'ailleurs, les lésions produites chez le cobaye par inoculation de lésions scrofuleuses sont riches en bacilles et ne peuvent cependant infecter le lapin.

Beaucoup de chirurgiens n'admettent pas les idées de M. Ârloing, cependant nous avons souvent entendu notre maître, M. le professeur Léon Tripier, défendre, en s'appuyant sur des raisons cliniques, la variabilité des tuberculoses chirurgicales, au point de vue de leur virulence. Pour lui, les lésions tuberculeuses locales, mais surtout les lésions articulaires, sont tantôt de véritables affections scrofuleuses, tantôt des foyers de tuberculose très virulente, capable de se généraliser à tout 1 organisme, tantôt des lésions pouvant présenter toute la gamme des virulences intermédiaires.

Dans le premier cas, Thygiène, la suralimentation, l'administration d'huile de foie de morue, la stimulation des fonctions de la peau sont le traitement indiqué. Le pronostic est relativement favorable. M. Tripier fait quelquefois dans ces formes des évidements, des raclages, ampute quelquefois, mais il ne résèque pas.

TUMEURS BLANCHES EXPÉKIUENTALES. 293

Dans le second cas, qui est situé à rexirémité opposée de la gamme virulente, dans le cas de lésions tuberculeuses très infectieuses, le pronostic est grave, le traitement général a peu d*action, les risques de généralisation sont grands si on touche aux tissus tuberculeux; il faudrait pouvoir faire une opération radicale, enlever la totalité des lésions articulaires et péri-articulaires. Aussi M. Tripier ne pratique-t-il alors ni évidements, ni raclages, il ne fait la résection que s'il a la main forcée; il préfère l'amputation.

M. Tripier pense qu'on peut diagnostiquer sinon les formes intermédiaires, au moins les deux formes extrêmes. La tumeur blanche scrofuleuse, qui aurait d'ailleurs généralement, suivant notre maître, un début osseux, a peu de tendance à la suppuration, présente au contraire des fongosités en abondance ; la tumeur blanche tuberculeuse, dont le point de départ serait plus fréquemment synovial, est peu riche en fongosités et a une grande tendance à l'hydarthrose. EnKn l'état général du malade, son âge, une foule de remarques secondaires, aident M. Tripier à compléter le diagnostic; le scrofuleux est jeune, fréquemment atteint de rhinites, kératites, otites, adénites, il a le teint p&leet la peau bouffie, de grosses lèvres ; le tuberculeux est adulte, ne présente aucune trace d'adénites, a fréquemment des antécédents héréditaires; ses lèvres sont fines, sonnez droit, ses yeux excavés, ses cils et sourcils très développés; il présente en somme un beau type.

Cette distinction n'a évidemment rien d'absolu et on est souvent très embarrassé pour se prononcer sur la virulence probable d'une tuberculose chirurgicale, surtout chez l'adolescent. Ce sujet, tout cli-

294 J. COIIRMONT ET L. DOR.

nique, ne peut d'ailleurs nous retenir plus longtemps ; mais nous avons tenu à rappeler les idées de notre maître qui cadrent absolument avec les résultats de' Texpérimentation.

Nous avons été témoins de faits qui apportent un solide appui aux idées de M. Arloinget de M. L. Tripier. Nous avons réalisé pour ainsi dire la contreépreuve, la synthèse des expériences précédentes en prenant sur le fait la production de tuberculoses articulaires locales par un virus tuberculeux atténué ; nous avons vu des bacilles tuberculeux atténués, incapables d'infecter le lapin par la voie sous-cutanée, qui, introduits directement dans son sang, ont fait spontanément élection de domicile dans ses synoviales articulaires pour reproduire chez lui de véritables tumeurs blanches, c'est-à-dire des lésions tuberculeuses locales, primitivement locales et ne se généralisant pas, comme les lésions scrofuleuses et la plupart des lésions tuberculeuses primitivementlocalesdeThomme.

Ce sont ces observations que nous allons exposer en détails.

Désirant étudier Taclion des produits solubles sécrétés par le bacille de Koch,nous avions depuis longtemps essayé, mais sans aucun succès, d'obtenir des cultures pures de bacilles tuberculeux en déposant des fragments broyés de matière tuberculeuse humaine sur des tubes de gélose glycérinée maintenue à + 39^ Nous avons alors résolu de nous servir d'une culture de bacilles de Koch qui était entretenue dans le laboratoire de M. Arloing depuis trois ans.

Nous étions loin de nous douter, au mois de janvier 1890, malgré nos insuccès constants à isoler le bacille de la tuberculose humaine, que cette culture pouvait ne pas être du véritable bacille de Koch, du bacille tuberculeux humain. Elle provenait du laboratoire de M. Pasteur, la semence ayant été donnée à M. Arloing en 1886 par M. le docteur Roux, chef de service à l'Institut Pasteur. Elle était composée de bacilles ne poussant que lentement sur la gélose glycérinée maintenue à + 39° et présentant tous les caractères microscopiques, toutes les réactions colorantes du bacille de Koch. Les cultures en milieux liquides se prêtant mieux que les cultures sur gélose aux expériences que nous avions en vue, nous avons ensemencé des ballons de bouillon glycérines composés suivant la formule de MM. Nocard et Roux ; ces ballons se sont troublés au bout de 7 à 8 jours et ont donné lieu à de belles cultures pures de bacilles ayant tous les caractères des bacilles de Koch. Cherchant à simplifier le plus possible la composition du milieu nutritif, nous avons vu que ces bacilles poussaient aussi, quoiqu'en moins grande abondance, dans de Teau filtrée sur porcelaine et additionnée de glycérine. Le milieu qui nous a paru le plus favorable au développement des cultures, en même temps que réduit aux éléments indispensables à la nutrition, fut un bouillon glycérine ainsi fabriqué :

Viande de veau 500

Eau 1000

ÉbuUition pendant un quart d'heure. Addition de glycérine 6 p. 100. Neutralisation. Filtration. Stérilisation.

j. corRMOsr et i

IS

Ce liquide élnit donc une infusion de viande additionnée de glycérine, mais non du chlorure de so-| diiim, des peptones, etc., qu'on y ajoute pour con-l stituer le bouillon ordinairement employé dans les laboratoires; c'était un bouillon très pauvre. Il nous a paru beaucoup plus favorable au développemenl des bacilles tuberculeux que le bouillon très nutritif;* c'est lui que nous avons adoplé délinitivemenf.

Les cultures obtenues dans ce bouillon commençaient à se développer vers le 8" ou 10' jour, sous Forme de petits flocons nageant dans le liquide et rappelant, quoique plus volumineux, les flocons des cultures de streptocoques. Vers le 20* jour, le trouble était complet et, au bout de quelquesmois, le ballon ne contenait plus qu'une boue grisfttre, très épaisse.

Une culture d'un mois était composée de bacilles 1res mobiles (caractère commun i\ ceux des cultures sur gélose examinés à l'état frais dans une goutte d'eau), ayant la forme et les réactions du bacille de . Koch, mais dont quelques individus s'allongeaîei notablement, au point de constituer de longs articlei 5 ou 6 fois plus longs que les bacilles ordinaires.

Voulant avoir la certitude que nous étions bieo e présence de bacilles tuberculeux, nous avons inocuM plusieurs lapins et plusieurs cobayes dans le courant des mois de décembre 1889, janvier et février 1890, en variant nos modes d'introduction. A notre granAj étonnemenl aucun des lapins ou des cobayes iaoculél dans le tissu conjonclif de la cuisse, même avec t doses énormes de culture ij)li/sieitrs cenlimètres ne devenait tuberculeux, ne subissait même le plw petit trouble dans son état général. Nous consla tioQsle plus souvent à l'autopsie des cobayes un p

abcès caséeux au point d*inoculation, c'était tout.

Les lapins, inoculés dans la chambre antérieure de l'œil, mouraient en un mois environ, avec des tubercules de riris, mais sans généralisation tuberculeuse, sauf un seul qui présenta quelques tubercules des poumons et de la rate. Plusieurs tubes de gélose glycérlnée avant été ensemencés avec ces tubercules de l'iris, l'un d'eux se couvrit d'une colonie de bacilles ayant les mêmes caractères que ceux des cultures primitives.

Les lapins et les cobayes inoculés dans le péritoine avec des doses considérables de culture (6 ce. pour le lapin, 3 ce. pour le cobaye) ont tous été envahis par une éclosion de tubercules généralisés à l'organisme entier (péritoine, intestin, poumons, rate, reins) et ces tubercules de lapins ou de cobayes inoculés dans le tissu conjonctif de la cuisse de cobayes donnèrent lieu à une tuberculisalion typique de ces animaux : mort en 2 mois, abcès caséeux local, ganglions inguinaux, cruraux et lombaires du côté inoculé transformés en tissus tuberculeux, rate et foie tuberculeux.

Nous étions en droit de conclure que nous possédions une culture pure de bacilles tuberculeux de Koch, mais que le vieillissement, la longue série des générations sur gélose glycérinée l'avaient atténuée au point de la rendre inoffensive aux lapins et aux cobayes inoculés dans le tissu conjonctif. Nous étions d'autant plus autorisés à admettre l'atténuation de nos bacilles que les tubercules obtenus chez le lapin ou le cobaye par inoculation intra-péritonéale étaient capables d'infecter le cobaye par la voie conjonctive sous-cutanée. Nous démontrerons dans la suite (voir § 6) que nous avions parfaitement raison, que nous étions bien en possession d'une culture atténuée.

Mais ici nous devons ouvrir une parenthèse. Les travaux récents de Rivolta, de MafTucci, de Cadiot, Gilbert et Roger, etc., paraissent devoir difTérencier la tuberculose aviaire de la tuberculose humaine ou bovine; le bacille de la tuberculose aviaire, bien que ressemblant par beaucoup de ses caractères au bacille de la tuberculose humaine, ne serait probablement pas le véritable bacille de Koch, et MM. Nocardet Roux n'auraient cultivé en bouillon glycérine que le bacille de la tuberculose aviaire. Tandis que le véritable bacille de Koch, le bacille de la tuberculose humaine et bovine, se cultiverait très difiBcilement sur gélose glycérinée, pas du tout en bouillon glycérine, serait plus pathogène pour le cobaye que pour le lapin, et resterait sans action sur les volailles, le bacille de la tuberculose aviaire se cultiverait facilement sur gélose glycérinée et en bouillon glycérine et trouverait chez le lapin un réactif plus sensible à son action pathogène que chez le cobaye, outre sa propriété de tuberculiser les volailles.

Quel que soit le sort que l'avenir réserve à cette différenciation des deux bacilles tuberculeux, nous devions nous préoccuper de connaître Torigine de notre culture et de comparer ses effets à ceux d'une culture de tuberculose humaine. C'est ce que nous avons fait après la communication que notre éminent maître, M. le professeur Chauveau, de l'Institut, a bien voulu faire de nos expériences à la Société de biologie au mois de novembre 1890.

Interrogé par M. Arloing, M. le docteur Roux répondit ne pas se rappeler l'origine de la culture donnée par lui; il avait à celle époque (1886) des cultures de bacilles tuberculeux provenant du faisan, du porc et

de rhomme. Nous étions donc réduits à déterminer expérimentalement la nature de nos bacilles tuberculeux.

Tout d'abord la grande facilité avec laquelle nous obtenions des cultures liquides rapprochait ces microbes des bacilles aviaires. Nous avons alors fait venir d'Allemagne une culture authentique de bacilles tuberculeux humains et nous avons pu constater par nous-mêmes que ces derniers poussent beaucoup plus difficilement sur la gélose glycérinée; examinés au microscope, ils se présentent en amas plus ou moins serrés, constitués par des bacilles immobiles peutêtre en raison de leur agglutinement, tandis que les nôtres sont mobiles et uniformément distribués dans une gouUe de culture.

Le caractère des cultures tendrait donc à faire admettre l'origine aviaire de nos bacilles, ce qui est d'ailleurs infiniment probable; mais les résultats des inoculations qui seront détaillées au § 6 ne sont pas en rapport avec ceux des expériences de MM. Cadiot, Gilbert et Roger; le cobaye est plus sensible que le lapin à l'action de ces bacilles, fait qui les rapprocherait des bacilles humains.

Dans l'incertitude où nous laissaient ces constatalions, nous avons résolu d'inoculer comparativement nos cultures à des volailles, à des lapins et à des cobayes, par plusieurs voies d'introduction. Ces expériences sont encore en cours (1), elles seront publiées ultérieurement et si, comme nous le croyons, elles démontrent l'origine aviaire de nos cultures, elles tendront à ne pas séparer bien nettement la tubercu-

vl) Voir Tappendice.

lose avîaire de la tuberculose humaine, par leurs effets comparés sur le lapin et sur le cobaye. Quoi qu*il en soit, nous étions en possession, au mois de mars 1890, d*une collection de cultures solides ou liquides d'un bacille tuberculeux, suffisamment a//^f/^ par le grand nombre de ses générations successives, pour ne pouvoir tuberculiser le lapin ni le cobaye par la voie conjonctive sous-cutanée, mais engendrant néanmoins une belle généralisation tuberculeuse chez ces deux animaux par la voie péritonéale. Nous commençâmes nos expériences.

Ces expériences, comme nous l'avons dit, avaient pour but Tétude des produits solubles fabriqués par le bacille de Koch. Pour leur résultat général, qui a été la démonstration de l'existence d'un vaccin dans les cultures filtrées, nous renvoyons le lecteur à notre communication du 22 novembre 1890 à la Société de biologie.

Le 31 mars 1890, 5 lapins, appartenant à la même portée, et âgés de i mois environ, pesant de 1000 à 1 125 grammes, sont choisis pour une première expérience. Deux d'entre eux reçoivent le 31 mars dans leur veine auriculaire \ gouttes d'une culture liquide, datant du 27 février; un troisième reçoit la même dose le 3 avril, enfin un quatrième reçoit un demi-ce. de la même culture également le 3 avril. Le cinquième n'ayant reçu que du vaccin ne sera pas mis en ligne de compte.

Le 20 avril 1890, nous prenons, dans une autre portée, 4 lapins, àgcs de 8 à 9 mois et pesant de 1 700 à 1 900 grammes. Deux d'entre eux reçoivent le même

jour, chacun un demi-ce. de la culture liquide du 27 février dans leur veine auriculaire, un troisième est inoculé d*une façon identique le 27 avril, le quatrième ne reçoit pas de culture virulente.

En somme 9 lapins constituent le terrain de ces 2 expériences, et, sur ces 9, 7 reçoivent 4 gouttes ou un demi-ce. de culture liquide de bacilles tuberculeux peu virulents. Tous sont placés dans les meilleures conditions hygiéniques, vivant dans un vaste clos.

A partir de ce jour ces animaux sont fréquemment pesés et examinés'; ils ne présentent rien de particulier et continuent leur croissance normale, augmentant régulièrement de poids. Cinq seulement sont devenus tuberculeux et feront l'objet de ce travail, les autres ayant subi l'influence du vaccin sont encore vivants et ont triplé de poids. Nous ne parlerons dorénavant que de ces 5 lapins, 3 appartenant à Texpérience du 30 mars, 2 à celle du 20 avril; voici d'ailleurs le tableau des variations de leurs poids :

4 gouttes 4 gouttes 1/2 C(\ 1/2 ce. 1/2 ce.

31 mars 31 mars 3 avril 20 avril 27 avril

31 mars. 1000 1125

3 ayril. 1000

l«rinai. 1450 1375 1875 2050

l«rjuin. 1800 1800 2280 2500

l«rjuiUet. 2000 2250 2800 2500 3000

l^sept. 1875(TB) 2125 (TB) (TB) 2150 2950 15 — 2000

20 — 1500 mort 2250 (TB) 2750 (TB)

1er oct. 1875 2180 2625

10 — loOOmort

27 — 2000 mort 2750

5 Dov. 2000

10 — 2400sacrif.

14 — 1800 mort

On voit par le tableau précédent que nos 5 lapins ont régulièrement continué leur croissance et augmenté de poids jusqu'au mois de septembre, soit pendant cinq mois ; pendant toute cette période leur santé a été florissante et rien ne pouvait nous faire soupçonner qu'ils étaient sous le coup d'une infection tuberculeuse. Les bacilles tuberculeux que nous avions introduits dans leur système circulatoire n'étaient cependant pas détruits, ainsi qu'on va s'en rendre compte; ils avaient vécu pendant 5 mois dans l'organisme de ces lapins, non seulement sans manifester leur présence, mais même sans entraver le moins du monde la croissance normale des sujets.

Le 1'' septembre, les 5 lapins accusent une légère diminution de leur poids et chez trois d'entre eux on peut déjà constater de la tuméfaction d*une ou de plusieurs articulations. A partir de cette époque l'amaigrissement augmente rapidement; et le 20 septembre les 2 autres (n*"' 4 et 5) présentent des tuméfactions articulaires analogues à celles des trois premiers.

Du 20 septembre au 14 novembre les lapins i, 2, 3 et 4 meurent dans un état de maigreur extrême ; le 10 novembre le n** 5, chez lequel les lésions étaient moins accentuées que chez les autres et dont la santé était encore satisfaisante (la vaccination avait retardé chez lui l'évolution de la tuberculose, sans pouvoir l'entraver conjplèlément) , est sacrifié par notre mattre. M. le professeur OUier, qui veut bien présenter ces pièces anatomiques à son auditoire et en faire le sujet d'une leçon magistrale.

TUMËUB8 BLA^XUES EXPÉRIMENTALES. 303