B. — RECHERCHES SUR LES HÉMOCYANINES
Les hémoglobines des divers animaux prétentent des propriétés physico-chimiques très voisines. Celles des hémocyanines des divers invertébrés présentent au contraire de notables différences sur lesquelles les travaux de Redfield et de son école, de E. Stedmann et E. Stedmann ont attiré l’attention.
a) Propriétés physico-chimiques des hémocyarxines du P ouipe et de la Limule.
Dans de premières recherches j’ai étudié les caractères physico-chimiques des hémocyanines de deux espèces animales zoologiquement très éloignées : le poulpe (mollusque : octopus vulgaris) et la limule (trilobite : limulus polyphenus). La première n’avait fait l’objet d’aucune étude physico-chimique antérieure, la seconde avait été bien étudiée par R.edfield a des points de vue différents de celui auquel je me suis attaché.
L’étude de l’hémocyanine de la limule présente un intérêt particulier, car le limulus est un animal de type archaïque, en voie de disparition, chez lequel, suivant Dhéré, on pouvait a priori s’attendre à trouver une hémocyanine très différente de celle des animaux de la faune moderne, comme le poulpe.
La cataphorèse de l’hémocyanine du limulus a montré que cette protéine a un point isoélectrique unique à pH = 6,2. Celui du pigment sanguin du poulpe est, par contre, à pH = 4,8, soit voisin de celui des hémocyanines des crustacés modernes (établi par E. Stedmann et E. Stedmann ). Les deux hémocyanines étudiées possèdent chacune un minimum de solubilité correspondant dans l’échelle de pH à leur point isoélectrique. Les courbes de neutralisation de leurs solutions pures ont en outre permis d’établir les courbes de pouvoir tampon de ces corps en fonction du pH. Dans l’un et l’autre cas, les courbes de pouvoir tampon ont présenté deux minima, 1 un correspondant aux points isoélectriques respectifs des protéines étudiées et 1 autre situe a pH = 7,8 pour l’hémocyanine du poulpe, et à pH = 9,0 pour l’hémocyanine du limulus.
Ce dernier pigment se différencie donc nettement du premier et aussi, selon, les recherches de E. Stedmann et E. Stedmann, de toutes les hémocyanines étudiées chez les animaux zoologiquement moderne. Peut-être faut-il voir là la conservation d’un type archaïque de pigment sanguin de certains invertébrés.
J’ai en outre essayé de me rendre compte si les hémocyanines contiennent, comme les hémoglobines un groupement prosthétique métallique fixé à la «partie protéique» de la molécule.
b) Sur le groupement prosthétique des hémocyanines.
Dans les conditions où l’hémoglobine se décompose en hématine et en globine, — en particulier par l’action des acides dilués — l’hémocyanine perd son cuivre. Y a-t-il libération de cuivre ionisé ou d’un groupement prosthétique cuivrique? Aucun des arguments apportés jusqu’ici en faveur de l’existence d’un tel groupement dans les hémocyanines n’emporte la conviction. Or, dans la transformation de l’hémoglobine en globine et en hématine, le pigment sanguin, de point isoélectrique 6.7 donne naissance à une protéine de point isoélectrique 7.5, et cela du fait de la mise en liberté du groupement prosthétique.
L’expérience a montré, dans les cas des deux hémocyanines étudiées, que ni le point isoélectrique, ni le pouvoir tampon, ni la solubilité des protéines ne présentaient de variation notable, après avoir été portées à pH = 2 pendant 1 heure, opération qui en détache le cuivre et leur fait perdre toute capacité de combinaison avec l’oxygène. Les hémocyanines se comportent donc à cet égard différemment des hémoglobines et il est peu vraisemblable qu’elles possèdent un groupement prosthéti-
que analogue à l’hématine. J’adopte l’opinion de Henze qui en fait des «protéinates de cuivre».
