CHAPITRE XV
HYDROLASES
Généralités sur les diastases
286. — La préparation des solutions diastasiques comporte souvent une macération plus ou moins prolongée des organes animaux ou végétaux avec de l'eau, de la glycérine, etc. Cette macération doit se faire de préférence à basse température, la masse étant fréquemment agitée. Les organes diastasiféres doivent être au préalable broyés ou hachés aussi finement que possible.
Le mélange est ensuite jeté sur un filtre, les premières portions étant repassées jusqu’à ce que le liquide obtenu soit clair; on gagnera en général beau-
IIYDROLASES
coup de temps en employant le papier Chardin pour la filtration. Le liquide obtenu doit être utilisé aussitôt, scs propriétés diastasiques s’atténuant plus ou moins vite au contact de l’air, sous l’action de la lumière, etc.
287. — L’intensité des réactions diastasiques est très fortement influencée par les conditions physiques (température) et chimiques '(acidité, alcalinité) de l’expérience. Il importe donc de se placer dans les conditions les plus favorables à la réaction envisagée. Pour cela la température optima, préalablement connue ou déterminée, sera maintenue constante au moyen d’un bainmarie muni d’un régulateur de température, les tubes contenant les liquides en expérience étant plongés dans l’eau de ce bain-marie et non placés dans une étuve à air chaud. La réaction optima, également connue à l’avance, sera établie au début de la recherche et vérifiée par un titrage en présence d’un indicateur convenable (méthvlorange ou phtaléine, suivant les cas).
288. — Presque toutes les solutions diastasiques perdent complètement leur activité lorsqu’on les porte à la température de 100° pendant quelques instants. On ne devra donc jamais négliger de faire, parallèlement à l’expérience que l’on cherche à réaliser, une expérience témoin , dans laquelle la solution de diastasc aura été préalablement chauffée pendant cinq minutes dans un bain-marie en ébullition. Seule, la différence entre les actions observées en présence de la diastase active et de la diastase chauffée peut être attribuée à l'activité diastasique.
Dans l’étude des produits de cette activité, la re-
GÉNÉRALITÉS SUH LES DIASTASES
cherche qualitative doit être complétée autant que possible par une évaluation quantitative de l'une au moins des substances formées.
289. — Dans les recherches dont la durée dépasse une à deux heures, on a toujours à craindre le développement des bactéries, surtout si on opère aux températures comprises entre 30° et 30°. Aussi, dans les cas où il sera impossible d’opérer asepliquemenl, on devra avoir recours aux antiseptiques, choisis de telle sorte qu’ils n:entravent pas l'action de la diastase. Le fluorure de sodium, à la concentration de 1 °/0, 2 °/0 au plus, peut être fréquemment utilisé; le chloroforme, employé en quantité telle que le liquide en soit saturé et à condition que les tubes ou vases utilisés soient bien bouchés , pour éviter l’évaporation superficielle de l’antiseptique, peut aussi rendre des services. 11 convient de noter à ce propos que le chloroforme réduit la liqueur de Fehling; par conséquent, lorsqu’on aura à rechercher ou à doser un sucre parmi les produits d’une réaction diastasique, effectuée en présence de chloroforme, il conviendra de chasser d’abord ce dernier par une ébullition de quelques instants.
290. — D’après les transformations qu’elles accomplissent, les diastases peuvent être classées de la manière suivante :
1° IJydrolases , produisant un dédoublement avec fixation d’eau (ce sont de beaucoup les plus nombreuses);
2° Oxydases, fixant l’oxygène de l’air sur certains composés;
3° Clastases , provoquant la rupture de la molécule, sans fixation d’aucune sorte.
HVniiOI.ASKS
Préparation d’une solution de sucrase de la levure
291. — Prendre 20 grammes de levure pressée du commerce et les mélanger dans un mortier avec 10 à 15 grammes de sable fin lavé, en ajoutant peu à peu 5 centimètres cubes d'eau, puis broyer le tout pendant quatre à cinq minutes. Ajouter 40 centimètres cubes d’eau, en plusieurs l'ois, bien mélanger et laisser en contact pendant une demi-heure en agitant fréquemment. Filtrer de manière à ne recueillir le liquide que lorsqu’il ne passe plus de débris cellulaires ou, mieux encore, centrifuger.
Dans le cas où la levure employée contient une quantité notable de glycogène, le liquide filtré ou centrifugé est opalescent.
Influence de la réaction et de la température sur la sucrase
292. — Préparer une solution de saccharose à 20 “/„ et en introduire 10 centimètres cubes dans six tubes à essai. Préparer d'autre part une dilution d'acide acétique à 1,5 9/e, et faire les mélanges suivants :
Témoin 1 . . . .
Neutre 2
Acidité ) .j optima ÿ '
1 centimètre cube sucrase bouillie -j- 4 centimètres cubes d'eau.
1 centimètre cube sucrase active -j- 4 centimètres cubes d’eau.
1 centimètre cube sucrase active -j- 1 centimètre cube acide acétique à 1,5 °/0 + 3 centimètres cubes d'eau.
Acide
