FILTRATION A LA BOUGIE

on aiu’R TGCOurs a un procède mécanicjue tel cjiie la cenlrifugation ou la filtralion, qui fournira un liquide actif si l'activilé est due à unediastase, inactif dans le cas contraire.

Il y a des cas où la diastase est si intimement liée au protoplasma qu’il faut recourir à un broyage préalable des cellules avant de filtrer ou de centrifuger.

La méthode la plus généralement employée pour séparer les diastases des microbes qui les produisent est la filtration, à travers la bougie de porcelaine. On emploie la filtration non seulement dans le but qui vient d’être indiqué, mais encore lorsque l’on veut faire agir les diastases dans des conditions rigoureuses d’asepsie, de manière à se mettre à l’abri des causes d'erreur provenant de l’ingérence des bactéries.

490. — La technique de la filtration est très simple. On commence par vérifier que la bougie ne présente aucune solution de continuité. Pour cela, on la plonge, l’extrémité fermée en bas, dans une éprouvette pleine d’eau, et on yinsuffie de l’air, avec une légère pression, au moyen d’une soufllerie. S'il se produit un dégagement de bulles gazeuses en un point quelconque, la bougie est fissurée et doit être rejetée. Dans le cas

SÉPARATION DKS ACTIONS DIASTASIQUES

fonlraire, on rajuste au moyen d’un tampon d’ouate serré dans le manchon de verre de l’appareil figuré ci-conlre [fig. 52), dans lequel ona versé quelques centimètres cubes d’eau; on y atlapte l’entonnoir au moven d’un petit bouchon de caoutchouc, puis on mouille l’intérieur de l’appareil avec un peu d’eau. On bouche l’orifice de l’entonnoir avec un tampon d’ouale, et on stérilise à l’autoclave à 115“ pendant quinze à vingt minutes.

La stérilisation ne peut être efficace que si l’appareil est rempli de vapeur d’eau ; lorsqu’on le retire de l’autoclave, on doit s’assurer qu’il reste un peu d’eau condensée à l'intérieur du manchon.

On dispose alors le tout dans l’éprouvette à pied tubulée, au fond de laquelle est placé un peu d’ouate, en ajustant bien le bouchon de caoutchouc supérieur. Le liquide à stériliser étant versé dans l’entonnoir, on fait le vide par la tubulure latérale de l’éprouvette ; le liquide filtre à travers la bougie et .se rassemble dans le manchon.

Quand la filtration est terminée, on peut prélever ce liquide au moyen d’une pipette stérile, en prenant toutes les précautions d’asepsie convenables.

491. — On peut appliquer ce procédé à l’étude des diastases de V Aspergillus niger.

Lorsque ce cliampignon a terminé son développement sur le milieu de Haulin, après trois à quatre jours environ, on fait écouler le liquide épuisé qu'il surnage et on le remplace par de l’eau distillée. On recommence cette opération deux à trois fois, de manière ù bien laver la face intérieure du mycélium, et