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REINARTZ [| (1950) (66)] congèle la levure dans le gaz carbonique liquide additionné d'éther, puis ajoute un excès d'alcool et extrait à reflux. L'alcool est alors distillé; le résidu est traité à l'eau chaude, D TU par l'acide sulfurique, et extrait par
éther.
KINGSLEY et SCHAFFERT [ (1940)(45) 1 font l'extraction directe au chloroforme, du cholestérol libre et total dans le sérum sanguin.
Enfin, KLEIN et LIPMANN | (1953) (48) ] utilisent l'alcool méthylique à 75 % .
On voit donc que de nombreux solvants et de nombreuses techniques paraissent satisfaire ceux qui les emploient. Nous avons opéré - à l'instar de notre camarade de laboratoire, Jean VILLOUTREIX, qui a fait de nombreux essais -, l'extraction de la poudre sèche de levure, sans diluant, avec l'alcool méthylique pur desséché. L'opération se fait dans un appareil de Kumagawe pendant 6 heures; nous avons vériiié plusieurs fois, en pratiquant de nouveaux épuiserents, que cette extraction de 8 heures était quantitative.
2) Purification de l'Extrait:
L'extrait méthylique, recua 11i quantitativement dans un ballon, est distillé sur bain-marie électrique dans une atmosphère de gaz carbonique pour éviter Les oxydations qui altèreraient les stérols, et le résidu est repris par une petite quantité de benzène bouillant qui dissout les stérols. Le ballon est rincé plusieurs fois avec de petites quantités de benzène. Les solutions benzéniques sont toutes réunies.
Le benzène utilisé doit être très pur, en particulier débarrassé de son thiophène qui fausserait la réaction de LIEBERMANN, Pour éliminer le thiophène, nous traitons le benzène pur du commerce par du nickel de Raney, récemment préparé, avec lequel le benzène est agité, à plusieurs reprises, 20 minutes dans un agitateur mécanique [ (d'après VELLUZ-1951)(84)] . L'absence de théophène dans le benzène ainsi traité était vérifiée par la réaction à l'isatine sulfurique: le thio-
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phène donne, avec ce réactif, une coloration bleueviolette. Le benzène aïinsi traité est filtré, séché sur sodium et ensuite redistillé,
L'extrait benzénique pre écédemment obtenu doit être débarrassé de substances qui fausseraient la réaction de Liebermann, et lo mode opératoire que nous avons choïsi, avec notre Camarade VILLOUTREIX, a consisté à mettre à profit la méthode chromatographique. Nous avons opéré avec des colonnes d'alumine Prolabo, OUT Chromatographie, purifiée selon SANNIÉ [(1937) (1): ébullition dans l'acide chiorhydrique, lavages et granulométrie par sédimentation sélective, séchage et réactivation pendant 2 heures et demie à 400° au four électrique. Les colonnes à chromatographie que nous avons employées avaient un diamètre de L cm, et étaient garnies de l'alumine, précédemment obtenue, sur une hauteur de 4 cm.
Pour l'élution sélective des stérols, nous avons employé le mélange benzène-méthanol 9/I. ne était toujours quantitative par utilisation de 20 #
30 ml. d'éluant.
Les solvants sont à nouveau évaporés sur bainmarie électrique dans une atmosphère de gaz carbonique, et le résidu est alors repris quantitativement par 5 ml. de chloroforme pur pour pratiquer la réaction colorée de ITEBERMANN.
B.- La Réaction colorée proprement dite:
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De nombreux auteurs emploient la réaction colorée de LIEBERMANN-BURCHARDT que nous avons décrite c1-des- SUS °
L'influence des conditions expérimentales, et spécialement celle de la température, est extrémement importante. KINGSLEY et SCHAFFERT [ (1949)(45)) l'ont dé-
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