I. — Matériel et méthodes

Le problème qui se présentait à nous était le suivant : comment déterminer la teneur en acide désoxyribonucléique (ADN) (‘) d’un seul noyau cellulaire au moyen des techniques chimiques dont on dispose à l'heure actuelle. Il n’était évidemment pas question de s’adresser à un seul noyau isolé au micromanipulateur pour en effectuer le dosage; en effet, les méthodes de microchimie les plus délicates et les plus ingénieuses telles que celles mises au point par exemple au Carslberg Institute par les professeurs Linpersrrôm-LanG et Hozrer ne permettent pas de mesurer avec précision moins de 1 à 5 y d’azote ou de 0,5 à 10 y de phosphore, ce qui représente déjà une belle réussite technique, mais qui correspondrait certainement à des centaines de mille ou même des millions de noyaux. La microchimie, pour le problème que nous envisagions, ne pouvait rendre plus de service que les méthodes habituelles de la macrochimie. Il fallait donc effectuer le dosage de l'ADN sur un très grand nombre de noyaux, ce qui ne présente aucune difficulté, puis diviser le résultat du dosage par le nombre de noyaux utilisés.

On pouvait évidemment faire ce dosage sur une masse connue d’un organe : le foie par exemple et compter le nombre de noyaux dans une partie aliquote de cet organe fixée, coupée en série et colorée. On sait que l'ADN est exclusivement confiné dans le noyau des cellules, par conséquent le dosage sur le tissu total était légitime. Cependant cette méthode un peu compliquée comportait de grandes causes d’erreur : on se rendra compte, en effet, de la difficulté que présente, même pour un histologiste averti, une numération exacle de noyaux dans une série de coupes d’un tissu. Cette technique théoriquement possible ne peut donner que des résultats approximatifs et ne saurait être utilisée couramment pour un travail de routine. Nous avons donc très vite abandonné cette première idée et nous avons entrepris d'étudier l'ADN de noyaux isolés.

1) Isolement des noyaux.