RÉSULTATS
Dans quelques expériences préliminaires, nous avons cher-
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ché le pH optimum du milieu pour lhydrolyse de la gélatine. On sait en effet que l’optimum varie suivant le substratum et les conditions ; il n’était par conséquent pas prudent d'emprunter un chiffre à la littérature. Voici le protocole d’une expérience :
Papaïine Byla 0,05 g + 0,5 em3 de solution saturée de ferrocyanure de K ; addition de 40 em de gélatine à 10% fondue, le volume est complété à 80 em3. Un échantillon est porté à la glacière ; d’autres sont additionnés de quantités progressives de CIH IN, et HO NaIN et portés à l’étuve pendant trois heures. Un dernier lot y séjourne huit heures. Le pH est mesuré à l’antimoine. Les résultats numériques des dosages sont indiqués dans le tableau suivant :
pH Formoltitration Rendement mesuré à l’électrode | en cm3 HONa N /25 à antimoine pour 3 cm3 lSacaleulé
avant —- après initial . final addition de formol ÿe
Témoin glacière. . 6,30 GT 2,0 5,1 Étuve 3h. .... 6,30 6,08 1,3 7,6 71 TOI: PNR EE 5,62 5,33 2,3 7,6 71 Les DH nr PS 4,88 4,80 3,5 7,4 66 ue 4,03 4,16 5,4 6,8 49 RHONa St 7,02 6,75 ME 7,2 60 A, MS EUTE 7,78 7,86 -— 5,5 IL
Etuve, 8 h....... 6.30 5,99 1,5 8,6
L’optimum, d’après cette expérience et de nombreuses autres, est situé aux environs de pH 6, mais l’activité est notable entre pH 4et 7 environ. On relève des évolutions assez notables de pH au cours de la digestion. Pour les supprimer et pouvoir travailler à pH constant dans les séries à potentiel d’oxydation-réduction variable, nous avons ajouté, dans la plupart des expériences ultérieures, une quantité d’un tampon au citrate 0,5 M correspondant au dixième du volume du milieu.
Les variations de potentiel ont été obtenues par addition de différents oxydants et réducteurs. Les lots ont été placés dans les tubes décrits plus haut, au moins pour les milieux réducteurs. Le potentiel a été suivi facilement, grâce à ces dispositifs, au cours du séjour à l’étuve et en tout cas mesuré avant le dosage final. L’intensité de la digestion se montre variable suivant les conditions. Dans les cas d’inhibition plus ou moins complète, constatée par la formoltitration, la géla-
tine reprend en gel à la température ordinaire ; elle reste au contraire liquide dans tous les échantillons pour lesquels la formoltitration accuse une hydrolyse dosable. Voici le protocole d’une expérience mettant en évidence l'influence du potentiel d’oxydation-réduction du milieu :
Milieux contenant papaine 0,05 gr., gélatine à 10% 50 cms, tampon de citrate de Na à PH 6,8 10 cm3, volume complété à 100 cm3.
Formoltitr.
Potentiel | en cm3 NaOH | Rendement | Etat final
final N /25 calculé du en mV |avant et après é milieu addition de refroidi
formol Témoin glacière. ..... 25014 PAUVE CES PAT DA FOUT liquide ECUVES he OPEN +218 3,3 ‘3,4 87 — Étuve s he H207 2 252 So 91 = — ee +262 3,2 3,0 70 —— — ne +340 Dana LE 4 solide — +: +375 2,4 1,5 4 — + hydrosulfite... +228 3,4 8,4 87 liquide BR? A EM D PRE 91 ne —— ne — 20 3,2 8,4 87 —
L'activité de la papaine devient donc négligeable vers + 300 mV et est aproximativement constante à tous les potentiels en-dessous de cette valeur.
L'activité de la papaine étant suffisante pour les dosages dans une zone de pH assez étendue, nous avons fait 4 séries d'expériences à des pH différents, à savoir ASS 55 1: 263 0e 6,8. Dans chacune d’elles, nous avons calculé les rendements et les graphiques de la fig. 6 résument les résultats. Ils montrent pour chaque pH qu’au-dessus d’un certain potentiel, l’action de la papaine est nettement arrêtée. Au-dessous de ce potentiel et jusque dans les milieux très réducteurs, l’activité parail constante. Les potentiels d’arrêt sont__100 mV à pH 4,8, +365 mV à pH 5,5, +310 mV à pH 6,3 et +268 mVà PH 6,8 ; ils correspondent à rH 23,4; 23,6 ; 123,3 et 22,8. Il est inté-
ressant de noter que les potentiels des mélanges réalisés sans addition d’oxydants ni de réducteurs se trouvent près de la limite supérieure de la zone d'activité.
=200 Oo +200 “400 m
F1G. 6. — Action de la papaïne sur la gélatine. Courbes d’activité hydrolytique de la papaïne en fonction du potentiel d’oxydation-réduction du milieu pour différents pH.
En abscisses, les potentiels d’oxydation-réduction en mV, en ordonnées l’intensité de l’hydrolyse en p. cent de l’hydrolyse totale possible,
La graine d'orge.
La graine d’Orge nous a semblé devoir fournir un matériel favorable pour l'étude d'un système protéolytique. En une dizaine de jours de germination, 35% de l’azote total sont solubilisés, transportés et resynthétisés dans la jeune plantule (ErrronT). Le ferment nécessaire pour cette mobilisation de l'azote a de bonne heure tenté les chercheurs. Il est signalé dès 1900 par FERNBACH et HUBERT et par WeEis. HARLAY
