PERTE

-200 © +200 400 mV

FIG, 9. — Expérience analogue à celle de la fig. 8: pH du milieu — 7

-200 [eo] +200 mV 400

F1G. 10. — Expérience analogue à celle de la fig, 8 : PH du milieu = 8.

potentiel peut rester stable si la substance introduite com porte un pouvoir tampon dans la zone du potentiel réalisé ; dans le cas contraire, on assiste à des évolutions dont nous donnons quelques exemples (tableau 3). On voit qu'après des variations initiales souvent considérables, le potentiel se maintient ensuite, pendant la plus grande partie du temps de digestion, dans une zone suffisamment bien définie pour que la mesure finale de potentiel que nous utilisons ait une signification.

ORGE PH 7» GLYCÉR.

O +200 400 mV

Fi1G. 11. — Expérience analogue à celle de la fig. 8 : pH du milieu — 7, addition de glvcérine.

Nous avons constaté dans ces conditions (voir fig. 8, 9 et 10) qu’une augmentation de potentiel (par rapport à celui s’installant dans les lots qui ne sont additionnés d’aucun réactif) diminue encore le rendement de la protéolyse. Un abaissement du potentiel au contraire intensifie la libération de groupements aminés pour l’amener à un maximum qui est atteint dans les trois séries d'expériences aux environs de 0 mV par rapport à l’électrode à hydrogène normale. Quand on abaisse le potentiel au-delà, l’activité protéinasique diminue ; il y a donc comme pour le pH un optimum d'activité dans l'échelle des potentiels d’oxydation-réduction. Une addition de glycérine au milieu ne change pas sensiblement les résultas ip).

Paroi d’Actinia equina L.

Comme échantillon de tissu d'animaux inférieurs, nous avons choisi la paroi d’Actinia equina L. Cette Actinie se trouve

Se

en grandes quantités à Rioscoff (Bretagne) sur les rochers entre les niveaux des hautes et basses mers moyennes. Nous avons pu utiliser pour chaque expérience au laboratoire de Roscoff des animaux qui venaient d’être prélevés sur la grève ou qui, du moins, n'avaient séjourné que très peu de temps dans un aquarium bien aéré. \

Les Actinies peuvent, suivant les conditions d’alimentation, présenter soit des croissances très rapides, soit des fontes tissulaires considérables. Nous pouvions donc supposer l’existence d’un système fermentaire apte aux hydrolyses comme aux synthèses des protéines. Chez Anemonia sulcata, SAVIANO a signalé l’existenèe d’une tryptase active en milieu neutre et faiblement alcalin. L’inconvénient du matériel choisi est son hétérogénéité du point de vue histologique. En lavant les Actinies à l’eau de mer et en raclant la face intérieure de l’animal fendu par un coup de ciseaux, nous avons pensé obtenir: un point de départ aussi constant que possible.

Quelques essais préliminaires ont mis en évidence une activité protéolytique notable d’une purée de paroi; cette activité se manifeste dans une large zone de pH aux environs de la neutralité. La présence d’un tampon de pH est nécessaire, la purée étant extraordinairement peu tamponnée: la purée initiale sans aucune addition étant à pH 6,9 à 7,3, l’addition d’une goutte de CIH n/10 à 60 cm$ de purée diluée; 5 fois abaisse le pH à 5; 3 gouttes l’amènent à pH 2,5. D’autre part, la présence de phosphate s’est montrée indifférente quant aux activités enzymatiques que nous avons re- Cherchéesi Le pH descend considérablement au cours de l’autolyse (de 7 à 5, par exemple), si l’on n'introduit pas de tampon. Pour éviter cette variation qui rendrait illusoire toute interprétation des potentiels de platine mesurés, nous avons systématiquement opéré en milieu phosphaté n/20. L’autolyse apparaît comme assez peu sensible au pH : une zone d'activité maxima s'étend de pH 5,8 à 8,3. Nous avons donc pu explorer l'influence du potentiel d’oxydation-réduction du milieu pour plusieurs pH assez éloignés les uns des autres.

Nous donnons un protocole d'expérience pour indiquer la technique suivie et montrer en même temps le caractère relativement homogène des résultats obtenus dans une même série d'expériences. D’une série à l’autre, l'amplitude des phénomènes observés a été, au contraire, assez variable.

Expérience 9 : Sept individus d’Actinia equina en bon état sont ouverts. Il se produit une contraction énergique de la paroi dont on lave et racle la face interne. 15 g. de paroi ainsi obtenus sont brovés au mortier à l’aide de sable lavé et additionnés de 30 cm3 d’éau

distillée, 20 cm3 d’eau de mer et 10 em3 de tampon de phosphates n /2 à pH 6,7. La suspension est centrifugée ; le liquide trouble est réparti en lots différemment traités et porté à l’étuve à 380 pendant 22 heures après addition d’une goutte de toluol dans chaque tube. À la sortie de l’étuve, on mesure les potentiels d’oxydation-réduction des échantillons et on titre à la soude n/25 d’après SOERENSEN.

Augmen- Formoltitration tation Potentiel | en cm3 NaOH N/25 de N final avant — après formoltien mV addition de formol trable en % du témoin

Témoin glacière. ........... 2,02 0,67 Etuve, sans addition. ...... 806 1,90 1,02 Etuve, agité énergiquement au début du séjour à l’étuve: .…. 326 70 0,92 |Etuve, tube fermé sans air .. | — 40 1,45 0,95 Etuve, + ascorbate Na, avec ÉVRE Rs PTE CET +194 1,90 1,05 Etuve, + ascorbate Na, sans.

MR ee AN CRE || 1-0?) 0,99 Idem, quantité d’ascorbate DIUS AO COMPAEN LE sir to — 88 1570 0,95 Etuve, + bleu de méthylène SAN SIDA ANNE Den Nes à + 38 165 0,98 Etuve, + bleu de méthylène TÉUIRSANS AIDE MEN AR —381 1,85 0,70 LACS RSR Re JU 346 1,90 0,68 Etuve + hydrosulfite Na sans ERA SANS NT ARS PR Er En —245 1,80 0,85 Etuve + ferricyanure de K s BE D ENIOSaLS MM TNA +418 1,90 0,85

Les résultats de cette expérience se transcrivent en une courbe à optimum de ‘potentiel très net avec inhibition de l’activité aux potentiels bas et élevés. Le lot laissé sans addition «et en présence d’air ne réalise pas les conditions optimales. La purée utilisée paraît peu tamponnée vis-à-vis des variations du potentiel d’oxydation-réduction comme pour les variations du pH. Le seul conditionnement des lots en dehors de toute addition de réactifs (à savoir le diamètre des tubes, la quantité d’air en présence ou l’agitation) entraîne des variations notables du potentiel. D’autres variations sont obte-

EMI

nues par addition d’ascorbate, d’hydrosulfite de Na, de colorants plus ou moins réduits, de ferricyanure ou de H20?2. Les flotitements de l’ensemble des valeurs expérimentales (voir fig. 12) en opposition avec la bonne précision obtenue dans une série (voir le protocole) ne semblent pas s'expliquer par la nature du réactif ou le procédé physique qui a permis d'obtenir le potentiel mesuré.

- - xX ex

-100 [a +100 200 300 400 my

F16. 12. — Activité autolytique d’un extrait aqueux de paroi d’Actinies (Actinia

equina L.) en fonction du potentiel d’oxydation-réduction du milieu, pH = 5. (Voir note p. 47).