CHAPITRE III

RECHERCHES SEROLOGIQUES ET IMMUNOLOGIQUES CHEZ LES SUJETS TRAITES PAR L'ANASTAPHYLOTOXINE

La loxine et son dérivé formolé, l’analoxine, entrainent, comme nous l’avons vu, la formation d’une antitoxine spécifique facilement décelable dans le sérum par des procédés de laboratoire, bien définis à l’heure actuelle.

Au cours de nos deux années de vaccinothérapie antistaphylococcique à l'Hôpital Pasteur, nous avons été naturellement conduit à rechercher chez nos malades l’antitoxine engendrée par les injections d’anatoxine et nous avons essayé de dégager peu à peu le rôle exact que jouait l’antitoxine staphylococcique dans la formation de l’immunité.

Voyons d’abord, au préalable, les méthodes qui permettent de doser l’antitoxine staphylococcique.

Méthodes employées pour le dosage de l'antitoxine staphylococcique

Au cours de nos premières tentatives de traitement des staphylococcies externes par l’anatoxine, nous avons titré le sérum des malades par la méthode intra-dermique. Puis, nous lui avons préféré la méthode hémolytique plus maniable et plus rapide. Les deux méthodes nous ont toujours donné des résultats concordants.

MÉTHODE HÉMOLYTIQUE

On procède de la manière suivante, pour le dosage hémolytique :

Dans une série de tubes à hémolyse, on introduit la quantité fixe de toxine correspondant à la dose test hémolytique (1) ou à une fraction de cette dose, et des quantités décroissantes du sérum à titrer, par exemple 1 .c., 0:cc:5, 0 cc. 2, Occal>: Chaque tube, préalablement ramené au volume de 2 cc. est additionné d’une goutte de globules rouges de lapin, lavés trois fois et dilués au 1/3, qui sert d’indicateur de la réaction. Après agitation, les tubes sont placés pendant une heure à l’étuve à 37°. Ils sont ensuite retirés de l’étuve et laissés une heure à la température du laboratoire. On fait alors la lecture de l’hémolyse.

Le dernier tube non hémolysé indique la valeur antitoxique du sérum en unités internationales.

Exemple.

SÉFUMECRCC) re Er Î 0,5 0,4 0,25 0,1 0,08 0,05 0,025 Toxine (dilution au 1/10). 0,23 0,23 0,23 0,23 0,23 0,23 0,23 0,23 HÉMOINSEM RER UE NECRECE 0 0 0 0 + + + + Titrage en unités antitoxi- QUES NUE re Rd hit 0,1 (PTT 1 JS 4

La valeur antitoxique de ce sérum exprimée en unités internationales est comprise entre 0,4 et 1 unité par ce.

Pour obtenir une approximation plus parfaite, il suffira de renouveler l’expérience en faisant des dilutions de sérum au 1/5, au 1/6, au 1/8, au 1/10 ; si dans le tube contenant la dilution au 1/8, nous n’observons pas d’hémolyse, notre sé-

rum titrera 0,8 unité antitoxique.

Une remarque s'impose d'emblée : de nombreux sérums hémolysent les globules rouges de lapin. C’est ainsi que 50 %

(1) La dose test-hémolytique est la plus petite quantité de toxine qui, ajoutée à 1 unité antitoxique, est encore capable d’hémolyser 1 goutte de globules rouges de lapin.

des sérums de cheval et de porc, purs ou dilués au 1/2, possèdent la propriété d’hémolyser ces globules.

Cette propriété est encore plus marquée pour les sérums de bœuf, de mouton et de chien dont les dilutions au 1/4 et au 1/5 sont encore hémolytiques.

Lorsque l’on cherche l’antitoxine dans le sérum de ces animaux par la méthode hémolytique, il faut être averti de ce fait ; en effet, les hémolysines naturelles des sérums peuvent masquer la présence de l’antitoxine antihémolytique.

D'ailleurs le chauffage des sérums à 55° pendant vingl minutes suffit à faire disparaître les hémolysines anti-lapin, sans altérer l’antitoxine staphylococcique.

La détermination du titre antitoxique des sérums par la méthode hémolytique est simple, facile et exacte ; donnant des résultats immédiats et rapides, elle doit précéder la méthode intra-cutanée qui lui servira de contrôle. Elle permet ainsi d'éviter les nombreuses injections que nécessiterait le titrage, par la méthode intradermique, d’un sérum inconnu, en donnant une base pour l'établissement des dilutions de

ce sérum.