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sur de l’eau de cale, c’est entendu, mais sur de l’eau de cale stérilisée. Et si cela confirme bien une bonne aptitude de milieu de culture, il ne s'ensuit pas nécessairement que dans les conditions ordinaires, l’eau de cale constitue pour ces germes un milieu où ils puissent se développer.

Cependant, sur ce point, les expériences d’autres auteurs viennent nous éclairer :

L'Europe fut atteinte presque entièrement par le choléra durant l’année 1892 et Lubarsh trouva le vibrion cholérique dans les eaux de la sentine d’un remorqueur de l’Elbe (1).

La même année, Ringeling, montre par des expériences très sérieuses, qu'il existe des microbes pathogènes dans l’eau de la cale non stérilisée, c’est-à-dire dans les anguillers d’un navire (2): Il recueillit dans des flacons stérilisés l’eau provenant des anguillers d’un steamer qui revenait des Indes. Il en fit l’inoculation sous-cutanée à une souris qui succomba dans les 4 jours. Fort du résultat de cette première expérience, il pensa que l’eau de la cale, semblable à celle des égouts par sa richesse en matières organiques devait renfermer les microbes pathogènes que l’on rencontre fréquemment dans les liquides contenant des substances en décomposition et en putréfaction. Il fut ainsi amené par des cultures anaérobies et par des inoculations sous-cutanées aux souris effectuées à diverses reprises à déterminer, dans l'eau de la cale, la présence du vibrion septique et du bacille de Nicolaïer.

Ces résultats positifs de Lubarsh et de Ringeling tendraient donc à prouver que l’eau des sentines contient des microbes dangereux ; mais la présence de ceux-ci est-elle constante ? Ou bien, dès qu'ils apparaissent dans ces eaux, le «struggle for life » règle-t-il leur sort en quelques heures ? Et ces expériences positives ne sont-elles dues, en somme,

(1) Belli. — Jgiene Navale. (citato da Dunbar. Versuche zum nachweiss von cholera vibrionen, in Flusswasser. Arbeiten à. D. Kais Ges. amts 1894). Page 418.

(2) Ringeling. — Loc. cit. (Arch. de Méd. Exp. 1895 n° 3).

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qu'à un prélèvement d’eau opportun, coïncidant avec une contamination toute récente ?

Un peu plus tard, Belli a fait aussi des recherches bacté-

riologiques sur l’eau de la sentine de quelques navires de

guerre (1) et de commerce. Il apporte les conclusions suivantes :

« Tandis que le contenu numérique des microbes de la sentine n’a jamais été rapporté, pour ma part j'ai trouvé que le nombre des micro-organismes varie de quelques milliers à de nombreux millions des sentines d’un bâtiment à l’autre; ce nombre oscille entre les limites restreintes dans les sentines d’un même navire.

« Quant aux espèces microorganiques, il y a une certaine ressemblance entre l’eau des sentines de la machine et celle des sentines des chaufferies sur un même navire; mais il y a une grande différence entre celle-ci et celle des sentines de la cambuse et de la cale. Dans les sentines de la machine et des chaufferies, les espèces prédominan-

tes sont en général les mêmes que celles de l’eau de mer ; dans les sentines de la cambuse, les espèces prédomiuantes sont représentées par des Blastomycètes puis ensuite par des Hyphomycètes ; les Schizomycètes sont assez rares. Enfin dans l’eau des sentines de la cale, la flore microorganique se rapproche de celle de l’eau putride. La prépondérance de l’une ou de l’autre espèce dépend principalement de la réaction de l’eau et de la présence de certains composants tels que les graines pour les Hyphomycètes et les Blastomycètes, l'alcool pour les germes de la fermentation acétique, etc...

« Mais le fait le plus intéressant, mis en lumière par l’observation bactériologique, c’est que, dans l’eau des sentines de la machine, des chaufferies et de la cambuse, sentines qui seules existent sur les navires de guerre, il n’y à pas de microbes ou ils sont assez rares ; tandis qu’ils abondent

(r) Belli. — La acqua di sentina delle navi de querra (Annali di medi-

cina navale 1902).

Noyer

«et qu'ils sont prépondérants sur les autres germes dans « l’eau des sentines de la cale » (1).

En outre, Belli, expérimentant sur l’eau de cale a trouvé que l’ensemencement de germes pathogènes était quelquefois mais rarement suivi de succès ; cela venait à l’appui des expérimentations positives déjà rapportées de Forster et de Ringeling. Au contraire, toutes les tentatives de Nicati et de Rietsch pour cultiver le vibrion cholérique dans l’eau de la sentine avaient échoué (>).

De tout cela, Belli donnait à peu près les conclusions suivantes : On ne peut nier de façon absolue que les eaux de la sentine puissent éventuellement devenir les véhicules de microbes infectieux, mais, de toute façon, le péril ne serait pas de longue durée, car leur vitalité s'éteint ordinairement au bout de cinq à six jours. Le résultat, constamment négatif de ses inoculations aux animaux affirme que, dans les conditions ordinaires, les eaux ne contiennent pas de microbes pathogènes et, tout en n’excluant pas la possibilité pour les sentines de véhiculer des germes infectieux, on doit admettre que ce danger est moins redoutable que ce qui se lit dans les anciens traités d'hygiène navale. Nos conclusions, nous le vérrons plus loin : concordent sur ce point avec celles de l’auteur italien.

2° Recherches personnelles.

Nos recherches ont porté sur les eaux des cales de deux paquebots mixtes, à un mois et demi d'intervalle :

L'un, le « Volubilis », faisant la traversée entre Bordeaux et Casablanca, arrivait en Gironde fin janvier 1922 avec un chargement varié :

L'autre, |” « Asie », long-courrier de la côte Occidentale d'Afrique, arrivait de Matadi au mois de mars avec un chargement de bois et de cacao. Ces deux bâtiments sont en fer,

(1) Belli. — Jgiene Navale, (traduction intégrale) pages 241 et 242.

(2) Nicati et Rietsch. — Loc. cit. (Revue d'Hygiène, 1885).

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du type à water-ballast que nous avons précédemment décrit.

Nous suivimes, pour ces deux recherches, une technique à peu près identique. Nous allons donc, pour rendre moins long cet exposé donner d’abord le mode d'expérience que nous avons suivi ; puis nous exposerons les résultats obtenus pour chacune d'elles.

A. — Technique suivie. — Les prélèvements furent faits à fond de cale, par nous-même, d'une manière aseptique. Nous nous sommes servis du matériel à analyse d’eau du laboratoire de Parasitologie. Nous puisämes l’eau, à même l'égout nautique, dans trois cales différentes chaque fois, à l’aide de flacons de 60 à go cc. bouchés à l’émeri et stérilisés, et de pipettes à vide. Le transport de ces échantillons d’eau au laboratoire se fit dans une boîte à analyses d’eau dûment protégée par plusieurs parois en zinc et par un mélange de sciure de bois et de glace.

Nos expériences furent mises en train aussitôt et peuvent se décomposer en six temps principaux :

a) Analyse quantitative. — Nous avons fait comme pour une analyse d'eau ordinaire. Nous avons effectué notre examen microbien en comptant le nombre de colonies microbiennes que donne sur un milieu nutritif solide, un volume déterminé d’eau. Nous avons utilisé le procédé de dilution de Roux (1) mais en augmentant beaucoup plus nos dilutions que dans le procédé original : dans notre première expérience, nous avons utilisé des dilutions de nos trois échantillons d’eau à 1/10 000, 1/100 000, et 1/1 000 000 ; et comme même ces très faibles dilutions ne nous avaient pas paru suffisantes, nous nous sommes servis dans notre seconde expérience, de dilutions à 1/ dix millionnièmes, 1/ cent millionnième et 1} mille millionnième (2).

(1) Roux. Précis d'analyse microbiologique des eaux. 1892.

(2) Nous devons encore faire des réserves, car les eaux de la cale étant

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Nous avons ensemencé 1/4 cc. de chacune de nos dilutions en gélatine et en gélose (boîtes de Pétri), pour avoir des résultats plus proches de la vérité.

Nous avons fait la numération au jour le jour des colonies qui apparaissaient et sur les boîtes de gélose mises à l'étuve à 37°, et sur les boîtes de gélatine restées à la température du laboratoire.

b) Recherche du Coli-Bacille. — En même temps, nous avons ensemencé 1/2 cc. de chaque échantillon dans trois tubes de bouillon phéniqué (V goultes d’eau phéniquée à 5 °/, dans 10 cc. de bouillon environ). Après deux nouveaux passages en bouillon phéniqué à deux jours d'intervalle, nous avons ensemencé notre dernière culture sur lait tournesolé et en milieu peptoné (eau peptonée), pour faire dans ce dernier milieu la réaction de l’indol; nous avons contrôlé par la réaction de Legal qui serait d'une sensibilité plus grande (1) et par l'examen microscopique de frottis.

c) Recherche des Anaérobies. — Nous avons essayé de faire des cultures en milieu anaérobie suivant la méthode de Veillon : pour cela nous avons pris des tubes de gélose sucrée, remplis sur une hauteur de 15 à 20 cm. ; nous les avons fait fondre en les maintenant 3/4 d'heure dans l’eau bouillante. Nous avons ensemencé sans dilution chacun de nos échantillons (environ 1/10 de cc. d’eau) à l’aide de pipettes stériles plongées d’un seul coup et le plus profondément possible dans la gélose refroidie aux environs de 43° à 44°. En immergeant immédiatement après nos tubes dans de l’eau froide, en les agitant, la gélose se prenait en bloc et nous obtenions pratiquement des milieux privés

des eaux assez riches en chlorure de sodium, il aurait fallu faire nos dilutions dans des solutions salines isoténiques à celles-ci ; les microbes étant plus ou moins chlorurophiles, la flore bactérienne varierait en effet suivant la teneur en sel de ces eaux — mais cela nous eut entraîné trop loin et nous nous sommes contentés de faire nos dilutions en eau distillée,

(1) Girard. — Le Papier monnaie, porteur de germes. — Thèse Bordeaux 1921 (Pharmacie) page 23.

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d’air et d'oxygène. Ges tubes de gélose, soigneusement bouchés et recouverts d’un capuchon de caoutchouc furent mis à l'étuve à 37°. Nous avons ensemencé de même et sans recharger notre pipette un second et un troisième tube pour avoir des dilutions plus faibles.

Nous avons utilisé pour le repiquage de nos colonies anaérobies le même procédé : nous avons, à l’aide d’une longue pipette, insufflé de l’air dans le fond de nos tubes ; la pression, en décollant la colonne de gélose, nous permit de la recueillir dans une boîte de Pétri stérile. Dès ce moment, nos tubes de gélose ayant été préparés, nous avons repiqué les colonies que nous avons facilement atteintes en dissociant la gélose: ces tubes encapuchünnés ont été mis à

l’étuve à 37°.

Pour étudier le pouvoir pathogène de ces colonies nous avons fait ensuite quelques inoculations à-## cobaye.

d) Recherche des moisissures. à À

Nous avons pratiqué des ensemencements sur milieu de Raulin pour mettre en évidence la présence des moisissures des eaux de cale.

Une goutte d’eau de chacun de nos échantillons fut mélangée à quelques cc. de liquide de Raulin dans de petits ballons (1).

e) Recherches qualitatives. Caractérisation de colonies.

Nous nous sommes servis pour nos caractérisations d’espèces, des colonies poussées sur gélose et sur gélatine au cours de nos recherches quantitatives, en les repiquant en stries sur gélose inclinée. Au cours de l'expérience [| nous avons recherché la présence de bactéries charbonneuses

(1) Le liquide de Rawlin est un milieu minéral dont nous rappelons la formule :

HAUT rx ME 2900 Carbonate de Magnésie 0.40 SHCREECANE NU 70 Sulfate d’AzH3 . OPAD Acide tartrique . 4 Sulfate de zinc . 0.07 Nitrate d'AzH3 A Sulfate de fer 0.07 Phosphate d’AzZH3 . . 0.60 Silicate de potasse . 0.07 Carbonate de Potasse . a.6o

dans l’eau de la cale 3 du « Volubilis » ayant transporté des peaux de mouton. Nous avons employé la technique imaginée par Pasteur (1) : nous avons laissé reposer les matières les plus lourdes .de notre échantillon d'eau ; nous avons pris les dépôts les plus fins que nous avons scellés dans des pipettes stériles. Pour éliminer les microbes non sporulés, nous avons chauffé ces pipettes au bain marie à 85° pendant 0 minutes. Puis nous avons ensemencé en boîtes de Pétri aérobies où nous avons préalablement coulé de la gélatine (colonies caractéristiques) et en tubes de gélatine en piqüre (cultures caractéristiques du charbon).

/) Gomme nous le dirons plus loin, au cours de chaque expérience nous àvons fait des préparations microbiologiques des culots de centrifugation de nos échantillons que nous avons coloré au Fontana-Tribondeau ou au Lugol, pour rechercher la présence possible de protozoaires, spirilles ou flagellés. C'était là le sixième temps de nos recherches.

B. — Première expérience. « Volubilis ». — Dans la première expérience nous avons recueilli trois échantillons d’eau :

a) Dans la cale 1, chargée de ballots de laine et divers, une eau jaune sale, très souillée de poussières et à réaction faiblement acide,

b} Dans la cale », chargée de graines de coriandre, une eau moins souillée, laiteuse, opalescente, à réaction presque neutre,

c) Dans la cale 3, chargée de peaux de mouton, une eau très souillée, noirâtre, à réaction faiblement acide.

Etant parti sur l’idée que nous avions affaire à des eaux très souillées nous avons opéré, quantitativement, avec des dilutions au 1/10 000, 1/100 000, 1/1.000 000. Nous avons été au-dessous de la vérité puisque dès le troisième jour, nous ne pouvions plus dénombrer nos colonies qui peuvent

(1) Dopter et Sacquepée, Précis de Bactériologie, » éd. 1921, p. 406.

donc être évaluées à piusieurs centaines de millions. Mais nous avons pu remarquer que ces eaux des cales d’un même navire qui semblent si différentes d'aspect sont, au point de vue de leur teneur en microbes, à peu près identiques entre elles puisque nous avons pu faire les mêmes constatations pour toutes.

Les réactions ayant trait à la mise en évidence du colibacille se sont montrées positives pour les trois échantillons : la coloration bleue du lait tournesolé était réduite en 24 heures ; la coagulation était faite en 36 heures et le milieu devenait rouge le troisième jour ; l'examen des frottis après coloration, montrait de courts bâtonnets de 2 4 à 3 se décolorant par la méthode de Gram ; ceux-ci se montraient parfois groupés en amas peu denses ; la mise en évidence de l’indol dans le milieu peptoné était nettement positive surtout par la réaction de Legal.

La recherche des colonies anaérobies donna pour les trois échantillons une fragmentation du milieu au bout de quelques jours ; mais les colonies n’apparurent nettement que dans le tube ensemencé avec l’eau de la cale 2. Au repiquage ces colonies dégageaient une odeur rappelant de loin l'odeur de corne brülée. Un frottis et un examen microscopique d’une colonie repiquée nous montra des bâtonnets à Gram positif et à spores terminales.

Afin de nous assurer sice microbe avait un pouvoir pathogène et pouvait être assimilé au bacille du tétanos ou au vibrion septique nous avons fait une émulsion de cette colonie dans 5 cc. d’eau dont nous avons fait au cobaye une injection sous-cutanée de > cc. L'animal, somnolant pendant deux jours et après avoir refusé pendant 24 heures toule nourriture, ne présenta par la suite aucun autre trouble, et reprit au bout de quelques jours une vie tout à fait normale.

Les ensemencements sur milieu de Raulin furent négatifs sauf en ce qui concerne l'échantillon de la cale 3 dans le flacon duquel s'était formée une colonie blanchütre et fila-

ter te

menteuse ; on pouvait la cataloguer microscopiquement dans le genre Mucor.

Au point de vue de l'analyse qualitative le simple examen des plaques de gélatine, les premiers jours, l'odeur répandue, suflirent à nous faire admettre la présence, en fortes proportions, de microbes putrides. Parmi les colonies développées sur gélatine en boîtes de Pétri, un très grand nombre en effet liquéfiait cette substance et dégageait une odeur forte et désagréable. Dans les caractérisations que nous avons faites il se trouvait à peu près autant de colonies à Gram positif que de celles ne le prenant pas, mais nous avons noté une prédominance très grande de bâtonnets et de vibrions sur les coccis dans la proportion de 1 pour 10 environ.

Aucun de ces microbes n’ayant attiré spécialement notre attention nous avons recherché dans l’eau de la cale 3 la présence possible du bacille du charbon mais nous n’avons pu noter aucun des caractères classiques de ses colonies sur gélatine ou de sa culture en piqure.

C. — Deuxième expérience « Asie ». — De même que précédemment nous avons prélevé dans les cales de « l'Asie » trois échantillons d’eau :

a) la cale r dont le chargement était de bois et de caoutchouc contenait dans sa sentine une eau jaune sale à réaction neutre.

b) la cale 2 chargée de cacao, de bois, et de charbon, une eau très souillée comme de l'encre tenant en suspension des poussières de charbon.

c) la cale 5 chargée de bois et de cacao, un liquide semblable à de l’huile jaunâtre et sale. ILest à noter que la sentine de cette cale communiquait avec celle des machines.

Au point de vue quantitatif nous avons fait des dilutions plus faibles que précédemment. Malgré cela nous n'avons pas pu compter nos colonies microbiennes jusqu'à la fin du douzième jour; du troisième au cinquième jour, en effet, ou les boites de gélatine étaient complètement

liquéfiées, ou elles offraient déjà un nombre de colonies incomptables ; dès le premier jour les boites de gélose chiffraient un nombre de colonies supérieur à la centaine. Cela nous permet d'évaluer à des milliards le nombre de micro-organismes par ce. d'eau. Ces observations ne se trouvent vérifiées que pour les cales 1 et >. Dans l’échantillon 3 en effet nous avons remarqué que le nombre des colonies était beaucoup plus restreint et nous pümes les compter sur gélose jusqu'au’ sixième jour: la gélatine elle, était liquéfiée le cinquième.

Le coli-bacille fut mis en évidence dans toutes les eaux de la cale de « l'Asie » parles réactions dont nous avons parlé précédemment : virage au rouge du lait tournesolé, réaction de l’indol et réaction de Legal. L'examen des frottis nous le confirma.

Avant de faire nos cultures anaérobies ainsi que dans la première expérience, et pour éliminer quantité de microbes peu intéressants, nous avons soumis les 3 échantillons d’eau à une température de 65° pendant r heure 3/4. Cela permettait aux spores résistantes du bacille du tétanos et du vibrion septique qui pouvaient s’y trouver de demeurer seules au cours des ensemencements sur gélose profonde que nous avons effectués ensuite. Nos recherches restèrent entièrement négatives.

Nous fûmes plus heureux dans la recherche des champignons filamenteux, à cause sans doute des bois divers dont étaient remplies les cales. Les deux premiers échantillons en effet nous donnèrent chacun en huit jours une dizaine d'amas filamenteux, blanchôtres et grisätres, donnant microscopiquement les apparences des Aspergillées et des Mucorées. Aucune moisissure ne poussa dans le flacon où était ensemencé le troisième échantillon.

Dans chacune des trois eaux nous pümes caractériser une dizaine d’espèces avec toujours prédominance des bacilles sur les coccis et avec une légère supériorité en faveur des colonies ne prenant pas le Gram.