Deutsch. med. Woch., ai déc. 1916, p i

4. Mdnch. med. Woch., I9ïa, no 3a, p. 1760, et Deutsche tierârztl. Woch.^ 19» a, no 39, p. 693.

5. VerÔffentlich . d, Robert Koch Stiftung, fasc. 8-9, 1913, p. 4a.

LES « ANTICORPS » TUBERCULEUX 485

dans un vase d'Erlenmeyer qu'on porte pendant 48 heures dans un appareil à agitation continue. Après quoi on centrifuge. Les graisses saponiiiables passent dans le liquide surnageant qu'on décante. Le dépôt, repris par une petite quantité d'eau salée physiologique et additionné d'un fort excès de chloroforme est reporté dans l'appareil à agitation continue pendant au moins deux heures. On centrifuge de nouveau et on enlève à la pipette le dépôt de chloroforme, contenant les lipoïdes solubles dans cette substance. Le liquide surnageant renferme les matières insolubles qui constitueront l'antigène.

On recommence une seconde fois l'extraction chloroformique avec agitation et centrifugation et, après une dernière décantation, on fait passer dans le liquide un courant d'air filtré pour enlever les dernières traces de chloroforme.

Le volume du liquide est finalement mesuré et étendu avec de l'eau physiologique, de telle sorte que lo ce. d'émulsion corresponde à I gr. des bacilles initialement employés (pesés à l'état humide, donc contenant encore 76 à 80 p. 100 d'eau).

Cette émulsion est trouble, grisâtre. Elle a l'odeur propre aux bacilles tuberculeux. On peut la dessécher dans le vide pour en conserver l'extrait sec. Elle renferme des débris de bacilles qui ont presque . entièrement perdu leur acido-résistance.

Par ce mode de traitement on élimine une quantité de lipoïdes variant de 9,78 à i3,o4 p. 100 du poids sec des bacilles d'origine humaine mis en œuvre. Les bacilles bovins fournissent sensiblement plus de lipoïdes que les bacilles humains.

Avec cet antigène on peut développer la formation d'anticorps chez les petits rongeurs de laboratoire, particulièrement chez le lapin. En injections sous-cutanées il est bien résorbé .et ne produit pas d'abcès. Pour le lapin, la dose initiale du produit sec est de 10 milligr. On la porte successivement de 5 en 5 jours environ à 20, 3o, 5o, 70 milligr.

On obtient aussi de bons résultats par injections intraveineuses de 5, 10, i5, 3oet 5o milligr.

La plus forte teneur du séi*um en anticorps s'observe de la deuxième h la troisième semaine après la dernière injection. Le sérum non chauffé dans lequel il s'agit de titrer les anticorps doit, d'après la technique adoptée par Momose, être dilué avec de l'eau physiologique de telle sorte que chaque expérience de fixation porte sur une série de tubes dont chacun contiendra une quantité décroissante du sérum, soit successivement G ce. I, 0 ce. 05, G ce. 025, G CC. 0125, G cc. gg625, o cc. go3i25, g cc. ggi5625, etc.

L'antigène TAC doit, de son côté, être dilué au ig.ggg* ou même au 2G.GGO* en partant du poids sec, — donc i centigr. dans igg ou 200 cc. d'eau salée physiologique. — On en emploiera, pour chaque réaction, g cc. 5.

L'expérience est établie de la manière suivante :

Tuh». I II m iv V VI vu

H*0 physiol .....occ-5j r n a c zl c

Sérum spéaaque ... o ce. a ; '

Antigène T. A. C. *. . o.5 o,5 o,5 o,5 o,5 o.5 o,5

(dilué à I : 10.000).

Complément o,5 o,5 o,5 o,5 o,5 o,5 o.5

(dilué à I : 10).

On porte à Tétuvei heure à 37**, puis on ajoute dans tous les tubes I ce. d'hématies de. mouton préalablement sensibilisées par une heure de contact, à la température du laboratoire, avec un excès de sérum hémolytique inactivé anti-mouton^ puis centrifugées, lavées à l'eau physiologique, recentrifugées et émulsionnées dans une quantité d'eau physio-logique correspondant au volume primitif du sang total dont elles ont été séparées.

Après une heure de contact à la température du laboratoire on lit les résultats.

Lorsqu'un lapin, après avoir été traité par une série d'injections d'antigène, est resté au repos deux à trois semaines, il suffit de G ce. oo3i25 (tube VI) de son sérum, souvent même seulement de o ce. 001 5625 (tube VIÏ), parfois moins encore, pour produire la réactîonde fixation dans les conditions ci-dessus indiquées. Les saignées ultérieures fournissent un sérum de moins en moins riche en anticorps; mais si on laisse reposer l'animal trois à quatre mois, on peut le recharger par une nouvelle série de 4 ou 5 injections et son sémm redevient très actif.

Bien entendu, pour chaque expérience, il est nécessaire de faire des témoins, vis-à-vis de la dose d'antigène adoptée, avec un sérum normal prélevé sur un animal neuf, en même temps que le sérum spécifique a été prélevé sur l'animal traité.

En règle générale, diaprés ma propre expérience, les antigènes préparés avec des bacilles privés ou non de leur enveloppe cîro-graisseuse, mais aussi peu modifiés que possible par les réactifs chimiques, sont préférables aux bacilles morts ou vivants pour les réactions de Bordet- GE?fGOi:. L'essentiel est que ces antigènes ne renferment que le moins possible de lîpoïdes libres, car il est incontestable que ceux-ci gênent ou empêchent là fixation du complément in vitro.

Au contraire, pour l'obtention des anticorps in vivo, les bacilles morts et surtout les bacilles vivants constituent de beaucoup les meilleurs antigènes.

La richesse d'une culture en substances antigènes est d'ailleurs très variable suivant l'âge de cette culture et suivant la constitution chimique

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du milieu «ur leqiiel eHe s*est dérveloppée. D'après les courbes tracées par B. M(5lleiis ^ en bouillon ylycériué ou en milieu asparaginë sans peptone, Taccroîssement est progressif jusqu'à la cinquième ou srxième semame, puis diminue ensuite notablement. Il serait, dans une certaine mesure, indépendamt du poids des corps microbiens.

J'ai oonstaîé avec L. Massol que divers sérums, principalement ceux qui proviennent d*animaux hyperimmanhés, ne décèlent leurs anticorps que lorsqu'on les met en présence d'antigènes obtenus par macération des bacilles en eau peptonée, suivant la technique que j'indiquerai tout i rheure.

La tuberculine brute de Koch, employée par certains expérimentateurs à la dose de o ce. oi à o ce. o3 pour chaque réaction, donne des résultats inconstants et imprécis : elle est, en effet, suceptible de fixer les sensibilisatrices contenues dans certains sérums normaux, — tels que cdoi de cheval, — ou pathologiques, — par exemple dans les infections typhiques ou streptococciques, comme la signalé Y. Fuxu-

Si Ton prépare la tuberculine par précipitation à l'alcool ou en séparant préalablement les bacilles du milieu de culture avant d'opérer la concentration du liquide, le produit obtenu se montre ordinairement incapable de servir d'antigène. H apparaît donc que, dans la tuberculine brute» les substances susceptibles de remplir la fonction antigène sont modifiées par la précipitation à l'alcool.

D'autre part, les extraits simplement préparés par macération au bain-marie (pendant 48 heures à 65") de 5 gr. de bacilles bien lavés, pesés à l'état sec et émulsionnés dans un litre d'eau distillée, puis filtrés et concentrés par le vide à loo ce, représentent un antigène (que nous avons appelé B^) utilisable pour déceler les anticorps de certains sérums, tandis <{ue ceux contenus dans d'autres sérums se trouvent masqués.

Par contre, si le même extrait bacillaire est préparé, non plus avec de l'eau distillée, mais par macération (48 heures au bain-m^rie à 65°) de 5 grammes de bacilles lavés, dans lOo centimètres cubes d'une solution de peptone de Witte à lo p. lOO dans l'eau distillée, suivie de fillratîon, on obtient un excellent antigène, que nous avons appelé B2, et qui décèle les moindres quantités d'anticorps contenus dans les divers sérums de sujets tuberculeux ou d'animaux hyperimmuns.

Et cependant la peptone est inactive par elle-même, car si on l'ajoute dans la proportion de lo p. loo à l'extrait aqueux simple, après la préparation de celui-ci, le liquide obtenu ne décèle pas les anticorps des sérums d'animaux hyperimmuns. C'est donc que la peptone enlève aux bacilles^ par macération prolongée à diaud, un antigène insoluble