TECHNIQUE POUR LA RÉPARATION DU VACCIN ANTI-CHOLÉRIQUE

Les procédés ordinairement suivis dans les laboratoires pour préparer des cultures pures de bacille virgule, dans du bouillon, permettent d'obtenir de suite un vaccin suffisant pour un petit nombre •d'individus ; mais dans des circonstances graves, quand le choléra fait des ravages et que les populations atteintes ont connu les bienfaits de la vaccination, alors il est urgent de disposer de centaines de litres de vaccin. Nous nous sommes trouvés bien des fois en face

Fig. 1.

Fig. 2.

d'une foule débordante qui exigeait impérieusement la vaccination : les agents de l'ordre public étaient impuissants à contenir la multitude ; par bonheur, dans des circonstances semblables, nous avons

toujours disposé de vaccin en abondance. L'application de notre méthode n'aurait pas subi d'interruption, même quand il aurait fallu de grandes quantités de vaccin, par exemple un ou deux mètres cubes, et cela grâce à la technique suivante, adoptée et appliquée dès le principe, dans notre laboratoire particulier.

Dans de grandes marmites de 1er émaillé, contenant 40 litres d'eau, on met 100 grammes d'extrait de viande de Liebig, 200 grammes de bouillon Cibils, et 100 gr^ammes de gélatine. Quand la gélatine s'est hydratée, on fait bouillir durant une heure, puis on neutralise l'acidité légère du bouillon avec une solution de carbonate de soude, en quantité suffisante pour lui communiquer une réaction faiblement alcaline. On fait alors bouillir de nouveau, durant 30 minutes, après quoi on refroidit brusquement le bouillon, en plaçant les marmites dans un vase d'eau froide constamment renouvelée.

Cette ébullition, après addition de carbonate sodique, amène un précipité dense qui gagne rapidement le fond ; la masse du bouillon devient alors aussi diaphane que si elle avait été passée à travers le meilleur filtre. Avec tout le soin voulu pour éviter le remuement du précipité, on transvase ce bouillon, avec une casse de fer émaillé (préalablement stérilisée), dans des matras représentés par la figure 1. Ces matras ont une capacité de 700 centimètres cubes; on les stérilise auparavant dans l'étuve Pasteur, en les bouchant simplement avec du coton. Chacun reçoit oOO centimètres cubes de bouillon, et Ton remplace le tampon de ouate par un bouchon de caoutchouc stérilisé, portant deux ouvertures munies de tubes, comme le représente la figure 2.

On achève la stérilisation du bouillon dans ces matras, parle procédé d'ébullition discontinue de Tyndall ; pour cela, il faut disposer d'une batterie de 20 becs Bunsen, pourvus d'un support avec toile métallique afin d'éviter le feu direct. En quelques minutes, les '10 matras arrivent à bouillir. On répète cette opération trois fois de suite.

Dans les intervalles de l'une à l'autre ébullition, on protège le tube court de ces matras avec une petite cloche de verre (fig. 1), et après la dernière ébullition, on les ferme avec un peu de coton ioraté que l'on préserve des sédiments atmosphériques à l'aide de cette même petite cloche. Il est très rare que tous les matras ne soient pas ainsi parfaitement stérilisés, et comme, en tout cas, les cultures sont soumises à un examen microscopique très minutieux, il n'est pas nécessaire de les soumettre à l'épreuve d'une incubation prolongée. Pour ce motif, après la dernière ébullition, on les laisse se refroidir; puis l'on introduit dans chacun d'eux 4 ou 0 gouttes d'une culture pure de bacille virgule. Pour cela, un tube capillaire de Welter très long convient parfaitement : on l'introduit par le tube court qui traverse le bouchon de caoutchouc du matras, comme le représente la figure 2, ou bien on se sert d'une pipette capillaire qui remplit le même but.

Les matras ensemencés sont soumis à l'incubation, à une température comprise entre 35° et 38°. Six heures suffisent pour qu'ils

perdent leur limpidité, à cause de la prolifération rapide du bacille virgule. Après deux jours, on peut les retirer de l'étuve et les employer comme vaccin, après toutefois examen préalable pour s'assurer de leur pureté.

Si l'on abandonne ces cultures pendant quelques jours à une température comprise entre 20° et 30°, en les agitant de temps à autre, elles se densifîent extraordinairement. Si on ne les agite pas, il se forme à leur surface un mycoderme constitué par des virgules et des spirilles, et qui, au moindre mouvement, se disloque et tombe au fond. En partant toujours d'une même semence, en employant des cultures du même âge, en faisant l'incubation durant un temps égal et à une même température, on obtient un vaccin doué toujours d'une égale activité et d'une pureté parfaite. Gomme nous l'avons déjà dit, MM. Paul Gibier et Van Ermengem examinèrent tous les matras qu'ils voulurent de notre vaccin, et le trouvèrent toujours pur. M. Albarran en reçut de nos mains un échantillon, de l'examen duquel il n'est rien dit dans le rapport Brouardel.

Ges matras, placés dans des caisses à quatre compartiments, fermant à clef, étaient confiés à- des personnes compétentes et soigneuses, pour les expédier dans les localités où se pratiquaient les vaccinations. Pour tirer du matras la quantité de vaccin nécessaire, on procédait comme l'indiquent les instructions de la page 141, et avant de l'employer, on le soumettait à un nouvel examen.

Afin de subvenir aux exigences d'une vaccination sur une plus grande échelle, nous fîmes construire un autoclave de deux mètres cubes de capacité, pourvu d'un manomètre, d'une soupape de sûreté, d'un tube en spirale dans le fond, percé de trous facilitant l'aération de la culture, et d'un serpentin réfrigérant. De plus, un tube à robinet arrive au fond, et un autre, ayant aussi sa clef, traverse^ simplement le couvercle de l'autoclave; en injectant de l'air stérilisé sous pression, à travers ce dernier, on force la culture à sortirpar l'autre tube, j)Our être distribuée dans les matras déjà décrits.

Une fois le bouillon stérilisé dans ce grand autoclave, on le refroidit rapidement, en faisant passer un courant d'eau froide parle serpentin intérieur ; arrivé à la température de 38° G, on introduit deu:^ litres de culture par un des deux tubes à robinets ci-dessous. Il suffit alors d'injecter de l'air stérilisé par le tube en spirale percé de trous,, pour que la masse s'agite et s'aère, et que la semence se répartisseuniformément.

La température de cette énorme masse de liquide se maintient aux environs de 30°, pendant un temps suffisant pour que la culture soit bonne à utiliser comme vaccin: rien de plus facile alors que de la distribuer dans des tubes stérilisés, pouvant se fermer hermétiquement à la lampe, ou dans des matras choisis à cet etfet.

Le vaccin du choléra, mis en récipients hermétiquement fermés, continue à vivre quelques jours, et se convertit en vaccin chimique: dans ce cas, à dose égale, il n'est pas aussi immunisant, aussi actif que le vaccin vivant. Pour cette raison, quand on devra l'utiliser au bout de peu de jours, il sera avantageux de le distribuer dans des réci--

pients hermétiques ; en dehors de cette circonstance, il est préférable de l'expédier dans les matras dont nous avons parlé, bien que ceux-ci

aientrinconvénientd'exiij^er qu'onlesconfif^àune personne soigneuse, et qu'au moment de les employer on les soumette à ui: nouvel examen.

Si l'on ne veut pas préparer le vaccin dans l'autoclave même, on distribue le bouillon stérilisé dans des matras, où l'on fait les cultures comme nous l'avons déjà dit !

Il nous faut maintenant indiquer la manière facile de se procurer la culture-mère dans un état absolu de pureté. Quand on se trouve dans une localité' envahie par le choléra, ceci est d'une grande simplicité: on prend des déjections types, de celles qui ressemblent à une décoction de riz, qui ne sentent pas mauvais comme les selles normales ou provenant d'autres maladies intestinales, mais qui exhalent cette odeur particulière, permettant à un odorat exercé d'établir le diagnostic. On les place dans une petite tasse ou dans un verre propre, on les couvre d'une feuille de papier ou d'une carte, et on les place, à défaut d'une étuve réglée, à proximité d'une lampe allumée, de façon que la chaleur irradiée lui communique une température de So'* environ. Six ou huit heures suffisent pour que, à la sur-, face de la matière diarrhéique, se forme un très-fin mycoderme difficile à distinguer sans une incidence favorable de la lumière. En la ra-

Fig. 3

clant sur quelque point, avec un stylet stérilisé, on Taperçoit mieux, par un effet de contraste : ce mycoderme est constitué exclusivement par des virgules; les spécimens des autres bactéries y sont des plus rares. Avec un stylet légèrement coudé à son extrémité, on déchire doucement le mycoderme, sans pénétrer dans la matière diarrhéique ;

on transplante la pellicule restée adhérente au stylet, dans un petit matras d'Erlenmeyer contenant 40 centimètres cubes d'eau stérilisée, que l'on agite vigoureusement. On prend ensuite 4 ou 6 autres matras semblables, contenant du bouillon stérilisé, et au moyen d'une pipette capillaire stérilisée, on les ensemence avec une goutte de la dissolution aqueuse du mycoderme. Mis à incuber à do° G., tous ou presque tous, après 24 heures, montrent une culture pure de bacille virgule. Si, au lieu de semer la dissolution aqueuse du mycoderme dans le bouillon, nous la semons dans l'agar, et retendons sur une plaque de culture (fig. 3), nous obtiendrons des colonies qui, presque toujours, seront tout entières de bacilles virgules. N'importe lequel de ces procédés facilite l'obtention de la première levure pour préparer le vaccin contre le choléra. Aujourd'hui qu'il y a un peu partout des laboratoires de bactériculture, il devient plus expéditif d'acheter une culture pure dans l'agar, le bouillon ou la gélatine.

Il n'y a à se préoccuper nullement de l'atténuation, puisque l'expérience nous a appris que la première culture dans du bouillon, provenant de colonies dérivées des déjections, se trouve, comme nous l'avons indiqué déjà plusieurs fois, suffisamment atténuée pour pouvoir être inoculée impunément à la dose de un à quatre centimètres cubes.

Tout ce que nous venons d'indiquer suffit pour ceux qui disposent d'un laboratoire bien installé, et ont des notions de bactériculture pratique, car les connaissances générales de cet art suffisent pour pouvoir préparer d'excellent vaccin, en s'en tenant à ce que nous venons d'exposer. Nousavons décrit cette technique simplement pour les personnes moyennement initiées, pour celles que les contingences d'une épidémie pourraient obliger à faire une campagne prophylactique, dans des conditions aussi défavorables que celles qui nous entourèrent en 1!

so.

Fig. 4.