RECHERCHES PERSONNELLES

Pour éviter autant que possible les reproches formulés aux méthodes précédentes, nous avons mis au point un procédé personnel de recherche du bacille dans le sang d’après les deux directives suivantes : augmenter la sensibilité de la méthode ; éviter les causes d'erreur pouvant fausser les résultats. Nos premières recherches ont été failes à l’aide de celte méthode d’examen direct que nous allons décrire. Fa |

Par la suite, pour contrôler la valeur des résultals oblenus, nous avons employé l’inoculationau cobaye en suivant une technique établie d’après les mêmes directives.

Procédé d'examen direct

Il comprend trois opérations principales : hémolyse des globules rouges, homogénéisation des globules blancs, et coloration du culot de centrifugation.

1° Après lavage soigneux de la peau à l’éther, le sang est prélevé par ponction veineuse au pli du’ coude. On recueille 20 centimètres cubes de sang

dans un ballon stérile contenant 60 centimètres Re

cubes du liquide suivant :

had à HO act sr 2e 06 cc. ; Gitrate de soude. .... ra 00 : 5.

HPSRIADEMENENE sur bougie Chamberland. 4

‘ Le sang ne se coagule pas,etil suffit d’agiter pour que l’hémolyse soit complète et immédiate.

Le mélange est alors centrifugé pendant une demiheure à grande vitesse (6000 tours). LU

On obtient ainsi un culot. contenant de rares

débris d’hématies, les globules blancs assez “bien

Lies:

; conservés, et les bacilles.

Déjà à ce moment, il est intéressant de sé une partie du culot, de l’étaler sur lame, et de la colorer par la méthode de Ziebl. Avec de la chance

et de la patience, on peut ainsi trouver parfois des

bacilles ; la chose en vaut la peine, car, détail

important, nous avons pu trouver plusieurs fois de

cetle façon des bacilles intra- cellulaires @ l'intérieur

de polynucléairés).

2° Recueillir le culot dans une capsule de porce-

laine stérilisée et ajouter 60 centimètres cubes d’eau

distillée filtrée sur bougie Chamberland, et vingt gouttes de lessive de soude à 30 0/0. Porter à l’ébul lition en agitant constamment et. laisser bouillir

quelqu es minutes.

Dans ces conditions, on peut constater que le liquide devient d’abord extrèémement visqueux. Mais, l'orsqu' on, approche de l'ébullition, a devient de

| garde sa valeur.

plus en Dis fluide, et dissolution des leucocytes est bientôt complète.

Cette phase de viscosité est due à ce fait, ‘que

dans l'hydrolyse par la soude, le globule blanc com-

mence par se gonfler énormément avant de se ds

soudre.

*F faut Rions, avani de centrifuger de nouveau,

‘ajouter au liquide clair jun demi-volume d’ alcool à 60 degrés, filtré sur bougie ‘Chämberland, pour

abaisser la densité du liquide. On répartit cette solution entre deux tubes à centrifuger ? à fond rétréci,

“etoncentrifuge den nouveau une demi- heüre : à grande

vitesse. s On obtient dans chaque tube un culot exlrême-

ment réduit qu'on étale sur lame neuve et id Où

volore. ee Nous avons toujours employéla méthode de Zicht: coloration dix minutes à chaud, décoloration par

. l'acide nitrique au tiers, puis par lalcool Fate recoloration au bleu de méthylène.

Nous insistons sur les précautions minultieuses

: qu ilest nécessaire de prendre pour que la Rio

Toutes les solutions, sans excéprion,. ont été fil- Fées sur bougie de porcelaine el conservées en flacons stériles. À vant de les employer, nous en avons centrifugé une certaine quantité pour être certain qu’elles ne donnaient aucun culot et ne contenaient aucun élément figuré.

De plus, tous les objets, toute la verrerie servant

moe

aux manipulations, ont séjourné entre chaque analyse dans l'acide sulfurique concentré ou l'acide nitrique fumant pendant vingt-quatre heures au moins. Ils ont été ensuite lavés et rincés à l’eau distillée filtrée sur bougie.

Mis en œuvre de la façon que nous venons de décrire, notre procédé est extrémement sensible, caril réunit en un culot juste suffisant pour faire deux lames, la presque totalité des bacilles contenus dans 20 centimètres cubes de sang.

Malgré cela, la recherche est toujours longue et pénible. Il faut examiner les lames complètement et méthodiquement, en commençant par un bout et en finissant par l’autre, si l’on ne veut pas laisser passer inaperçus les quelques rares bacilles qu'elles renferment, et la recherche dure parfois plusieurs heures.

Nous ajouterons que les bacilles trouvés ont été très fréquemment contrôlés par deux, et souvent trois observateurs différents, habitués par de nombreuses analyses de crachats à bien connaitre la morphologie du bacille de Koch. Nous nous sommes astreints à cette précaution pour éviter de confondre avec des bacilles tuberculeux les débris cellulaires … qui restent parfois colorés sur les lames.

Ne

: 0 ie Re

Résultats

À l'heure actuelle, nous avons fait ‘avec notre procédé 76 analyses de sang. Quatre de ces analyses

ont été faites chez des personnes saines, cliniquement indemnes de tout symptôme 1e tuberculose,

et ont été négatives.

Les 72 autres analyses ont été faites avec te sang

de 62 malades tuberculeux. Quatre malades ont eu 2 analyses, et 3 malades 3 us à tee d’un mois d'intervalle.

Soizante-sept de ces analyses ont été positives. Elles ont toutes été faites chez des malades atteints de tuberculoses chroniques sans fièvre, et avec bon état général.

ou

Un de ces malades était aiteint de tuberculose

péritonéale et ganglionnaire très améliorée par l’héliothérapie.

Un autre avait eu quelques mois auparavant une pleurésie purulente avec liquide pleural renfermant

des bacilles de Kock. Très amélioré par l’évacualion du liquide et l’héliothérepie, ilavait au moment de l’analyse on excellent état général et une tempé-

rature normale.

Tous les autres cas positifs étaient des cas de

tuberculose pulmonaire chronique, avec lésions

très variées «L plus ou moins étendues, mais toujours sans fièvre el sans signes généraux d'évolution au

moment de la prise de sang.

Parmi ces malades, 39 avaient des bacilles dans leurs crachats au moment de l'analyse; 18 n’en avaient pas; mais en avaient eu. ARE VARE ou en eurent par la suite.

Huit seulement, atteints de jésiens. d'induration. limitées et envoie d'amélioration, ou de. tubereu-. loses fibreuses, n'en eurent jamais, tout au moins pendant leur séjour au sanatorium.

Cinq analyses seulement sur 72 ontété négatives.

. Parmi celles-ci, 3 l'ont été complètement, et nous considérons comme négatives deux autres analyses où malgré l'examen complet des lames, on ne put trouver que quelques rares granulations acido-résis- . tantes, sans aucun bacille net et typique.

Ces 5 analyses négatives ont été faites avec le: sang de malades très gravement atteints, et chez qui, . détail important, une cuti-réaction faite le jour de la prise de sang fut complètement négative. Nous donnons ci-dessous les observations résumés de ces 5 cas : ar

Obs, 1 — Mme L.. . Caverne assez volumineuse de sommet droit. A gauche. loyer de râles humides dans les fosses susetsous-claviculaires. Expectoration muco-purulente abon- ; dante renfermant de nombreux bacilles de Koch ; : évolution chronique malgré l'étendue des lésions. Température vespérale : 37,8 environ. Assez bon état général. Assez brusquement, la malade commence une poussée évolutive aiguë avec fièvre très élevée devant se terminer par la mort trois mois

plus tard. L'analyse du sang est faite deux jours après le

“pee dus sang négative.

début de la poussée aigüe. A ce > moment la température

ps % degrés, Une cuti- réaction faite le même; sign avec

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