PROCÉDÉ D'INOCULATION AU COBAYE
Nous avons déjà signalé le défaut capital des mé: thodes employées jusqu'à l'heure actuelle : c’est l’inoculation d’une quantité de sang trop faible pour avoir des résultats de valeur absolue,
Ne pouvant injecter aux cobayes plus de 8 à 10 centimètres cubes de sang au maximum sous peine de faire périr les animaux en expérience, nous avons employé des moyens détournés pour réaliser l'examen d’une plus grande quantité de sang.
Dans une première série d'expériences, nous avons hémolysé le sang avec le liquide qui nous a servi pour la recherche des bacilles par examen direct : | x
Alcool à 4o degrés... .... RER 100 Gitrate de soude... rex 0,25
puis nous avons inoculé le culot de centrifugation.
Nous avons inoculé de cette façon une série de 20 cobayes avec le culot de centrifugation de 60 et même de 80 centimètres cubes de sang. Nous n'avons obtenu que des résultats très inconstants. Mais il est évident que le contact prolongé (la centrifugation avec un seul appareil, de la quantité de liquide né-
cessaire pour hémolyser 60 centimètres cubes de sang
demande au moins deux heures) de. bacilles du sang avec l'alcool à 4o degrés peut altérer la vitalité de ces bacilles. Les inoculations n’ont par suite aucune valeur en cas de résultats négatifs.
Nous avons alors employé le procédé suivant que nous croyons exempt de tonte cause d’erreur :
On prélève le sang du malade par ponction veineuse au pli du coude avec une seringue de 10 centimètres cubes.
Pour éviterla coagulation du sang dansla seringue, nous la garnissons au préalable de 1 centimètre cube de solution à 1 0/0 de citrate de soude stérilisée el conservée en ampoules scellées. On aspire 7 à 8 centimètres cubes de sang qu'on injecte immédiatement dans le péritoine d’un cobaye.
On isole celui-ci et on le laisse reposer quarantehuit heures.
À ce moment le péritoine du cobaye a abe la blue grande partie du sang de la première inoculation, el on peut recommencer L opération sans inconvénients. | À de
On peut ainsi faire de deux en deux jours 4 inoculations el injecter de 25 à 32 centimètres cubes de sang du même malade au même cobaye, sans danger pour l'animal.
- Les inoculations étant pue en huit jours, il n’y a pas à craindre d’accidents sériques ni de phénomènes d’ allergie.
. Nous n'avons pas osé dépasser la de de 32 centimètres cubes de sang injectée. en quatre fois, car
un de nos cobayes qui avait reçu 35 centimètres cubes de sang est mort quelques heures après la dernière inoculation. Tous les autres animaux ayant reçu au maximum 32 centimètres cubes de sang ont
survécu à l’inoculation,
Observations et résultats
Avec la technique que nous venons de décrire, nous avons inoculé à 17 cobayes le sang de 15 malades tuberculeux présentant des lésions très va-
riées.
Nous en donnons ci-dessous les observations dans. leurs traits essentiels.
Obs. 1. — Mile L. LL 1a8 ans, malade depuis trois ans. Tu-berculose pulmonaire chronique entrecoupée de poussées: évolutives.
Au moment des prises de sang, elle présente des râles humides assez denses dans le tiers supérieur du poumon droit ; à gauche de la rudesse respiratoire et quelques craquements à la toux sous la clavicule. Pas de signes généraux d’évolution. La température vespérale qui ne dépasse pas 3704, est fixe depuis plus de trois mois. Bon état général. Expectoration peu abondante renfermant des bacilles de Koch.
On fait de deux en deux jours 4 prises de sang qu'on inocule immédiatement à un cobaye. Celui-ci reçoit de cette façon 25 centimètres cubes de sang dans son péritoine.
Autopsie du cobaye quatre-vingt-six jours après la pre-
mière inoculation de sang.
La rate est hypertrophiée, presque doublée de volume, mais sans lésions apparentes.
Le (oie présente dans un de ses lobes 4 ou 5 granulations
miliaires encore très petites et non caséeuses.
On observe à la base du poumon gauche quelques granufations miliaires analogues à celles du foie, et une plus grosse dont le centre commence à se caséifier.
Tous les ganglions sont hypertrophiés, mais surtout les ganglions lombaires, trachéo-bronchiques et rétro-sternaux. Un de ceux-ci, dont le volume dépasse celui d’un gros grain
de maïs est caséeux dans sa moitié supérieure.
. Obs. 2. — Mlle B.., 22 ans. Tuberculose pulmonaire chronique avec plusieurs poussées congestives accompagnées de fièvre et d'hémoptysies. Au moment des prises de sang : râles humides fixes qui s'entendent au niveau du sein gauche, dans l’aisselle et la fosse sous-épineuse. Au sommet droit, rudesse respiratoire et craquements à la toux. Expectoration peu abondante renfermant des bacilles tuberculeux. Bon état général. Pas de fièvre ni d'hémoptysié depuis plu. sieurs mois, 28 centimètres cubes de sang sont inoculés au cobaye en quatre fois.
Autopsie du cobaye soixante-huit jours après la première inoculation.
: Rate hypertrophiée sans lésions. Dans le foie, 2 ou 3 granulations miliaires très petites, non caséifiées. Poumons sains. Hypertrophie de tous les ganglions, surtout des ganglions lombaires dont le volume dépasse celui d'un grain de
maïs, des ganglions mésentériques, des gangl'ons trashéo-
bronchiques et rétro-sternaux. En l'absence de lésions …
caséeuses, nous concluons seulement : tuberculose probable.
Obs. 3. — M. A..,38 ans. Première manifestation de
tuberculose avec fièvre et hémoptysies il y a dix ans. Guéri- .
son. Mobilisé pendant la guerre durant dix-huit mois, dont six mois comme infirmier dans un service de tuberculeux. À ce moment, poussée aiguë de tuberculose avec fièvre et plusieurs hémoptysies abondantes. Depuis, évolution torpide.
Au moment de l’inoculation du sang au cobaye :
Lésions cavitaires du sommet gauche, avec souffle et gar-
gouillement au-dessus et au-dessous de la clavicule.
A droite, foyer limité de râles fixes sous la clavicule.
Bon état général; pas de fièvre, ni d'hémoptysie depuis au moins un an. Crachats nummulaires peu abondants renfermant de nombreux bacilles de Koch.
29 centimètres cubes de sang sont inoculés au cobaye en quatre fois Autopsie du cobaye quatre- YHERARE huit j jours. après la premièré inoculation du sang :
On trouve dans le foie 5 ou 6 granulations miliaires de la grosseur d'une tête d’épingle, et non caséifiées.
Un des poumons présente une lésion de la grosseur d'un grain de blé paraissant due à la conglomération de plusieurs tollicules tuberculeux, et cascifiée au centre. Dans le même poumon et dans le poumon opposé on trouve aussi plusieurs granulations analogues à celles du foie et non encore caséifiees. La rate est doublée de volume mais sans lésions. Tous les ganglions sont hypertrophiés. Un des ganglions lom-
baires, très gros, à son centre caséeux. Une partie de la
avec décoloration à l'acide nitrique au tiers et à l'alcool
absolu. Après une recherche assez : longue, on trouve plu
sieurs bacilles de. Koch. typiques. »
Obs. A Mlle Le G..., or ans. Malade depuis deux ans.
Tuberculose pulmonaire à à évolution rapide ayant abouti à la
formation d une caverne du sommet droit. Un pneumothorax
artificiel est créé. Au moment des prises de tue le Lindon
ons date de huit mois.
Bon état général. Température Nespprele { ‘noa. La. malade ne crache plus. Pas de signes généraux d évolution. à On inocule au cobaye 28 centimètres cubes de sang en
quatre fois. Le cobaye est autopsié quatre-vingt: douze jours
après la première inoculation.
On note quelques granulations miliaires très pu dans
le foie et dans l'un des poumons.
La lésion la plus importante siège dans la capsule surré-
nale droite, dont le centre commence à se caséifier.
k Rate hypertrophiée sans lésions. Tous les ganglions sont
très hypertrophiés, les ganglions lombaires, sous-hépatique,
‘et trachéo- bronchiques surtout, mais sans s lésions caséeuses.
# Obs..5. — M. T.., 25 ans. Malade depuis deux ans.
Tuberculose pulmonaire chronique avec foyers de râles
fixes au sommet et à la base Lobans. et quelques craque=
ments sous la clavicule droite.
Au moment des prises de sang, pas de fièvre, bon état général. |
: Expectoration peu abondante renfermant des bacilles tobee
- culeux. -
matière caséeuse est étalée sur lames et LolbEses au Ziebl,.
Pas de signés généraux d'évolution.
Un cobaye est inoculé en quatre fois avec 29 centimètres cubes de sang. :
Autopsie du cobaye quatre-vingt-dix-huit jours après la première inoculation. ;
On trouve dans la rate RE petits tubercules non. encore ramollis. Le foie est indemne, Les poumons contiennent plusieurs granulations miliaires très petites et non caséeuses.
Tous les ganglions sont hypertrophiés, Buriout les ganglions lombaires dont l’un est caséeux. Un des ganglions rétro-sternaux est également caséifié ; une parcelle de matière caséeuse, colorée au Ziehl contient de rares bacilles tuberculeux.
Obs. 6. — M. C...,43 ans. Interné en Suisse pendant la guerre et soigné à Leysin pour tuberculose pulmonaire. En 1919, pleurésie purulente avec liquide renfermant de nombreux bacilles de Koch; 7 à 8 litres de liquide sont évacuésen plusieurs ponctions successives et remplacés par de l’azote. Un examen du sang par notre méthode d'examen direct. montre la présence de bacilles dans le sang : ‘une quinzaine de bacilles bien nets pour 20 centimètres cubes de sang examinés).
Au moment de l'inoculation au cobaye, le malade est très amélioré : pas de fièvre; bon état général. Il reste dans les sinus diaphragmatiques un peu dé liquide qui n’a pas tendance à se reproduire.
Le cobaye qui a reçu 30 centimètres cubes de sang est
autopsié huit mois après l’inoculation. A l’autopsie : tuber-.
culose généralisée. Nombreux tubercules disséminés dans le foie, la rate, les poumons. Plusieurs ganglions commencent à se caséifier. Une parcelle de matière caséeuse colorée au
Ziehl contient des bacilles de Koch:
Obs. 7. — M. L..., 29 ans. Tuberculose pulmonaire évoluant rapidement depuis un an. Au moment des prises de | sang, lésions cavitaires étendues des deux poumons; température irrégulière à grandes oscillations journalières. Malade cachectique. Une cuti-réaction faite le jour d’une des prises de sang reste négative. Décès du malade trois semaines après la dernière inoculation au cobaye.
A l’autopsie, faite quatre-vingt douze jours après la pre mière inoculation, le cobaye, qui a reçu 27 centimètres cubes de sang, estcomplètement indemne de tuberculose. On note seulement une légère hypertrophie d’un des ganglions lom-
baires, qui atteint le volume d'un grain de blé.
Obs. 8. — M. Q..., 29 ans. Malade depuis sept ans; petite caverne du sommet droit à évolution torpide. Pas de fièvre, bon état général. Expectoration peu abondante renfermant des bacilles de Koch. Pas de signes généraux d’évo lution.
Un cobaye est inoculé en quatre fois avec 31 centimètres cubes de sang etautopsié quatre-vingt treize jours après la première inoculation.
On trouve plusieurs tubercules dans le foie et dans la rate, les plus gros commençant à se ramollir au centre. Quelques rares granulations miliaires existent dans le poumon.
Hypertrophie de tous les ganglions. Les ganglions lom-
baires, et l’un des ganglions rétro-sternaux sont caséeux.
Obs. 9. — Mlle V..., 32 ans. Malade depuis deux ans. Est entrée au sanatorium avec des lésions d'induration du som-
met gauche, et a fait depuis une poussée cortico-pleurale de
la base gauche. É Au moment de l’inoculation au cobaye. il reste de Ja
rudesse respiratoire du sommet gauche, et quelques frotte-
ments pleuraux à la base. La température vespérale atteint
37°5 au maximum.
Bon état général. La malade ne crache pas, mais on a pu
trouver des bacilles dans un crachat obtenu après absorption d'iodure de potassium.
Deux analyses de sang faites antérieurement par notre
méthode d'examen direct ont été positives.
Un cobaye est ‘inoculé avec 32 centimètres de sang, et autopsié quatre-vingt-dix joursaprès l’inoculation. On trouve dans le foie, plusieurs tubercules dont les plus gros com-
mencent à se caséifier. La rateest hypertrophiée, mais sans
lésions apparentes. Les poumons renferment quelques
tubercules encoré très petits et non caséifiés. Tous les gan-
glions sont hypertrophiés, en particulier les ganglions lombaires qui sont caséeux. Un des ganglions rétro-sternaux est
également caséeux.
: Obs. 10.— M, C.., 35 ans. Malade depuis quatre ans.
Tuberculose pulmonaire chronique entrecoupée de poussées
congestives avec fièvre ethémoptysies. Au moment de l’ino-
culation au cobaye : rudesse respiratoire du sommet droit, avec foyer très limité de craquements à la toux dans la fosse sus-claviculaire. À gauche, respiration faible sans
signes adventices. Bon état général ; pas de fièvre. Expecto-
Me
ration très peu abondante renfermant par intermittences de
rares bacilles de Koch.
d ‘Un cobaye est inoculé avec 29 centimètres cubes de sang.
A PAntopete faite quatre-vingt-treize jours après l'inocula- i
“on, on trouve quelques tubercules dans le foieet la rate, et “de rares granulations miliaires très petites dans le poumon. Le péricarde renferme un peu de liquide, et on trouve deux tubercules très nets sur la face cardiaque du péricarde. Tous les ganglions sont très hypertrophiés, mais aucun n'a de
lésions caséeuses .
Obs. 44.— Mlle D ans. Première atteinte de tuber-
culose il y a onze ans. Guérison. Rechute il y a quatre ans.
Lésions cortico-pleurales du poumon gauche à évolution très
lente.
- Au moment.de l’inoculation au cobaye, il reste de la faiblesse respiratoire à la base gauche avec quelques craquements secs superficiels et quelques froitements pleuraux. Bon état générai ; pas de fièvre, pas d'expectoration.
Une analyse de sang faite avec notre procédé d'examen
direct montre la présence de bacilles de Koch. À FE mn Ve *
Un cobaye est inoculé et reçoit 30 centimètres cubes «4e sang dans son péritoine. Autopsie du cobaye een: ‘oixante jours après linoculation. On trouve quelques rares tubercules très petits dans le foie et dans les poumons. La rate est légèrement hypertrophiée sans lésions. Tous les ganglions sont hypertrophiés, mais sans lésions caséeuses. Des préparations histologiques sont faites avec les lésions du’ foie et
du poumon, et montrent la structure folliculaire nette avec
— cellules géantes, ce qui permet d'affirmer la tuberculisa-
tion du cobaye.
Obs. 12. — Mlle Br..., 27 ans. Malade depuis deux ans. Tuberculose pulmonaire chronique entrecoupée de poussées évolutives. Au moment des prises de sang: râles humides disséminés dans la moitié supérieure du poumon droit. A gauche, respiration rude et petit foyer de râles fixes au niveau du sein. Bon état général. Pas de fièvre. Expectoration peu abondante renfermant des bacilles de Koch.
Un cobaye est inoculé avec 28 centimètres cubes de sang et autopsié quatre-vingt seize jours après la première inoculation.
On trouve plusieurs tubercules dans le foie, dont deux ou trois commencent à se caséifier, et quelques petits tubercules dans les poumons.
Rate hypertrophiée sans lésions. Tous les ganglions sont
très hypertrophiés, mais sans lésions caséeuses.
Obs. 13. — Mlle G..., 22 ans. Malade depuis cinq ans. Lésions cortico-pleurales de la base gauche à évolution lente, et très améliorées au moment de l’inoculation au cobaye. La malade a repris son travail depuis plusieurs mois, et travaille plusieurs heures par jour sans aucune fatigue ni fièvre. Très bon état général. Pas d’expectoration. La malade serait considérée comme guérie sans la persistance d’un foyer limité de craquements secs à la base gauche.
Trois analyses de sang faites en l'espace d’un an avec notre méthode d'examen direct ont été positives.
Un cobaye est inoculé avec 31 centimètres cubes de sang
et autopsié cent deux jours après l’inoculation. On trouve plusieurs tubercules dont certains commencent à se caséifier dans le foie et la rate ; et quelques rares tubercules très petits dans les poumons. ee
Tous les ganglions sont très hypertrophiés, en tte les ganglions lombaires qui sont caséeux. Un ganglion
mésentérique est également caséifié en partie.
Obs. 1%. — M. S.., 28 ans. Malade depuis cinq ans. Tuberculose pulmonaire unilatérale à évolution lentement progressive pour laquelle un pneumothorax artificiel a été créé trois mois avant l’inoculation du sang au cobaye.
Pas de fièvre. Bon état général. Expectoration très peu abondante renfermant des bacilles de Koch. -
Un cobaye est inoculé avec 29 centimètres cubes de sang et autopsié soixante-deux jours après l'inoculation. Hypertrophie très marquée de tous les ganglions, en particulier des ganglions lombaires, trachéo-bronchiques et rétrosternaux, mais sans lésions caséeuses. La tuberculisation du cobaye
est seulement probable.
Obs. 15.—M. B..., 44 ans. Malade depuis un an. Tuberculose pulmonaire chronique et laryngite tuberculeuse.
Au moment des prises de sang, on note de la rudesse respiratoire au sommet droit. À gauche, la respiration est faible, très rude, avec quelques craquements secs dans la zone d'alarme.
L'examen du larynx montre de l'infiltration des aryté-
noïdes, et une ulcération superficielle de la corde vocale
gauche.
Bon état général. Pas de fièvre. Expectoration très. Peu
abondante renfermant de rares bacilles de Koch.
‘Un cobaye inoculé avec 30 centimètres cubes de sang est
autopsié soixante-neuf jours après l’inoculation. À l’autopsie, on trouve plusieurs tubercules franchement caséeux dans la
rate, et d’autres plus petits et non encore caséifiés dans le
foie. Les poumons sont intacts. Tous les ganglions sont très
hypertrophiés, en particulier les ganglions lombaires qui
sont caséifiés.
Obs. 16. — M.R..., observation déjà citée à propos des analyses de sang par examen direct. Tumeur blanche fistuliséé du genou gauche et lésions étendues d'un poumon. Malade cachectique mort deux mois après l’inoculation du
sang. Cuti-réaction négative.
Le cobaye qui a reçu 30 centimètres cubes de sang est
autopsié quatre-vingt quinze jours après l’inoculation et est
complètement indemne de tuberculose.
Obs. 17.--MmeL L..., 26 ans. Malade depuis deux ans. Tuberculose pulmonaire évoluant rapidement depuis six. mois à la suite d’une grossesse.
Au moment de l’inoculation au cobaye : lésions cavitaires étendues des deux poumons. Température très élevée à grandes oscillations. Etat cachectique. Une cuti-réaction faite la même semaine que les prises de sang reste négative. Décès de la malade deux mois après les prises de sang. Le cobaye inoculé avec 28 centimètres cubes de sang est autopsié après quatre-vingt-onze jours et n’a aucune lésion tubercu-
leuse.
Cie der Al
sn .
En résumé, sur 17 observations, nous relevons
14 malades atteints de tuberculose chronique, et 3 malades graves, arrivés à la période uliime de la
tuberculose. Dans ces 3 cas, l'inoculation du sang
fut négative. Dans les autrés cas, nous avons obtenu
19 résultats positifs et à résultats douteux. Il est à
remarquer que dans ces > cas, les cobayes ne furent autopsiés que deux mois environ après l’inoculation.
Il est également remar suable que les “Cobayes autopsiés au bout de trois à cinq mois n’ont souvent que des lésiuns minimes compatibles avec une sur-
vie assez longue. Fréquemment on ne irouve à lau-
topsie qu’ un ou deux ganglions caséeux, et quelques
petits tubercules disséminés dans le foie, la rate ou les poumons. Dans un cas douteux, où le cobaye fut cependant autopsié cent soixante jours après l’inoculation, on ne put affirmer la tuberculisation du cobaye qu'après examen histologique des. lésions
trouvées.
Un seul cobaye, qui fut autopsié plus de huit mois
après l’inoculation avait des lésions vraiment géné-
__ ralisées.
Au cours des autopsies de nos cobayes, nous
avons remarqué un autre détail intéressant. Dans
plusieurs cas, nous avons trouvé des lésions aty-
piques chez le cobaye, par exemple, des tubercules
sur le péricarde, ou des lésions caséeuses des surré-
nales. De semblables localisations n’ont été signa-
lées que chez des cobayes inoculés avec des bacilles \ |
de virulence atténuée, ou avec de très petiles doses de bacilles.
Ce phénomène, ainsi que la lenteur d’évolution de la tuberculose chez le cobaye, démontre bien que les bacilles tuberculeux ne sont présents dans le sang
qu’en très petite quantité, et que, au cours de la tuberculose chronique, tout au moins, il ne s’agit en aucun cas de septicémie véritable,
Une autre conclusion s'impose après les remarques que nous venons de faire. Si l’on reprend nos expériences, et qu'on inocule du sang au cobaye avec une technique quelconque, il faudra laisser vivre Les animaux en expérience cinq à six mois au moins, pour être certain que l’inoculation est positive ou négative.
