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os antigène donné, il suffit de s’assurer si le sérum a reçu cet antigène. Si le problème se complique, c’est par ce fait que l’on se heurte à cette difficulté insurmontable, particulière à la syphilis, de la culture de l’agent causal {1), et par conséquent à l’impossibilité de se procurer un antigène réel, c’est-à-dire constitué par l’émulsion du microorganisme ineriminé. Il fallut donc user de subterfuge et recourir à une préparation capable au moins de fournir un maximum de tréponèmes. On s’adressa au foie d'enfant hérédosyphilitique, qui, farci de spirochètes, donna desséché puis émulsionné dans l’eau physiologique ou l’alcoo!l

absolu, un antigène très satisfaisant. Cette première difficulté ainsi vaincue, restait à trouver le moyen de

déceler au sein du mélange : antigène, sensibilisatrice, complément, la fixation ou la liberté de ce dernier. C’est alors que l’on pensa à superposer à la

première réaction invisible (déviation ou non dévia-

tion du complément sur le tréponème ou ses toxines)

une seconde réaction visible, fournie par l'hémolyse ou l’absence d’hémolyse d’une espèce quelconque

de globules rouges.

1. Depuis la découverte du tréponème Scherschewsky, Müdhlens, Sowada, etc. avaient cultivé des spirochètes dont ils n'avaient pu, par des inoculations aux animaux, démontrer la spécificité. Cependant en 1911 Noguchi a pu obtenir des cultures pures d’un tréponème capable de reproduire une orchite spécifique chez le lapin. Pour cela, il sème des produits prélevés sur des orchites syphilitiques de lapin dans un mélange d’eau physiologique ou de liquide ascite-agar et de tissu frais stérile (reins ou testicules de préférence) recouvert d’une couche d'huile de parafine stérilisée et place le tout pendant deux semaines dans un appareil à cultures anaérobies à 37°. Hoffmann à également pu réaliser la culture du parasite sur du sérum de cheval-agar.

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En effet : si dans le premier mélange il y avait une sensibilisatrice, le complément ayant pu se fixer par elle, on pourrait ajouter des globules rouges et une sensibilisatrice pour ces globules : faute de complément cette dernière resterait sans action et l’hémolyse ne se produirait pas ; si au contraire l’absence de sensibilisatrice dans le premier mélange laissait libre le complément: celui-ci, dans le second, en trouverait une qui lui permettrait de se fixer sur les globules et de les détruire.

Dans le premier cas la réaction serait positive,on pourrait conclure : syphilis; dans le second elle serait négative,on devrait dire : pas de syphilis. Ce fut cette théorie qui permit de réaliser l'expérience de laboratoire connue sous le nom de réaction de Wassermann.

TECHNIQUE DE LA RÉACTION. — Voyons comment en fut réalisée la technique. Cinq éléments doivent entrer en jeu.

L’ANTIGÈNE SYPHILITIQUE, le SÉRUM DU MALADE (fournissant ou non la sensibilisatrice anti-syphilitique), LE COMPLÉMENT.

L’ANTIGÈNE GLOBULE, la SENSIBILISATRICE ANTI-GLO- BULE.

Antigène syphilitique.— Nous avons déjà dit qu’il était fourni par le foie d'enfant hérédo-syphilitique. Primitivement on se contentait de l’extrait aqueux, l'expérience a montré qu’il était préférable d'employer l’extrait alcoolique ; après avoir broyé l'organe, l'avoir desséché vingt-quatre heures dans le vide afin de pouvoir le réduire en poudre, on le met en contact avec l'alcool absolu dans la proportion de { gramme

de poudre impalpable pour 30 d’alcool.

rose

Sérum du malade. — On l’obtient par la ponction veineuse au pli du coude, mais, comme il possède un complément, il y a lieu (dans le Wassermann classique du moins) de le chauffer une demi-heure à 56° dans l’étuve ou le bain-marie.

Complément. — Il est fourni par le sérum de cobaye, dilué au 1/2 dans l’eau physiologique à 8 gr. ÿ de NaCI «/, d’eau distillée.

Antigène globule. — Le plus généralement on se sert de globules de mouton. Pour se les procurer, il suffit de recueillir, le plus aseptiquement possible, le sang dans un ballon solide contenant des perles de verre, on agite pour défibriner et l’on décante sérum ét globules surnageant, on lave plusieurs fois par centrifugation jusqu’à ce que la dernière eau physiologique ajoutée reste absolument claire.

Sensibilisatrice anti-mouton ou sérum-hémolytique. — On l’obtient er préparant des lapins contre les globules rouges : pour cela on leur injecte à cinq ou six reprises différentes des quantités variant entre 1/2 et 5 cmc. de globules de mouton soigneusement lavés du sérum pour éviter l’anaphylaxie, on espace les injections de 5 à 8 jours ; quelques jours après la dernière le sérum de lapin est hémolytique pour le

mouton.

Lorsque l’on possède tous les éléments de la réac-

tion, la principale difficulté n’est pas vaincue; car certains de ces produits exigent un dosage rigoureux. DosaG£ DES ÉLÉMENTS. — D'abord l’ambocepteur anti-mouton, car c’est par lui que nous doserons l’antigène ; dans des tubes à hémolyse on mélange :

1°) 4 mc. des globules de mouton dilués dans une

— 26 — & proportion telle que 1/10 de eme. de la dilution ajoutée à 2 cmc. d’eau distillée donne une teinte rouge-groseille franche. C’est là à notre avis le meilleur procédé pour apprécier la richesse des globules en hémoglobine, richesse assez variable suivant les individus ;

2) À eme. de sérum de cobaye frais dilué au 4/2 d’eau physiologique ;

3)Q. S. d’eau physiologique pour 2 eme. ;

L°) des quantités décroissantes de sérum physiologique : obtenues en faisant une solution mère au 1/10; d’où l’on en tire d’autres de titre décroissant de 1/10 à 1/10 jusque 1/100,

On dispose ainsi une échelle décroissante où chaque tube correspond à une dilution donnée, et constitue un groupe hémolytique complet. On porte le tout à l’étuve à 37° pendant une demi-heure.

Le dernier tube qui est hémolysé est celui qui donne le taux optimum auquel fonctionne le sérum hémolytique.

TITRAGE DE L’ANTIGÈNE — L’extrait alcoolique ayant été dilué au 1/5, 1/10, 1/15, 1/20 d’eau physiologique on dispose l’expérience comme précédemment, mais, en constituant le groupe hémolytique avec la dose optima d’anti-mouton. Puis dans chaque tube on introduit une quantité croissante d’antigène en commençant par 0,05 cmc. pour finir par 0,5 eme.

Ici encore on choisit le dernier tube où l’hémolyse est totale après une demi-heure, en prenant toutefois comme point de départ le taux le plus faible. Le titre de l’antigène est extrèmement vatiable (comme celui de l’ambocepteur d'ailleurs), il est des

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antigènes excellents dont le titre optimum est 0,1cmc. en dilution au 1/20, d’autres ne donnent de bons résultats qu’au 1/5.

Reste enfin à éprouver l’antigène au point de vue de son pouvoir antigénique, c’est-à-dire de la plus ou moins grande puissance qu’il a de fixer le complément en présence de sérums spécifiques. Pour cela, il faudra pratiquer des réactions en séries, suivant la technique que nous allons indiquer, avec des sérums syphilitiques, soit que les malades dont ils proviennent soient sûrement syphilitiques cliniquement, soit que des réactions précédemment pratiquées avec des antigènes éprouvés aient donné des résultats positifs. Il est bon d’ailleurs d’avoir toujours plusieurs antigènes en service, l’un vérifiant l’autre, car c’est sur la valeur de l’antigène que repose celle de la réaction. |

TECHNIQUE DE LA RÉACTION. — Avec tous les constituants en bonne condition, frais ou dosés suivant le besoin, il va être possible de réaliser l’expérience : Elle comprend deux temps : un premier que nous pourrons appeler Temps d'essai de fixation, un second ou Temps de vérification.

I. Temps. — Dans la réaction type, c’est-à-dire avec les témoins dit généraux, 7, 8 ou 9 tubes sont nécessaires suivant que l’on essaie une seule ou deux ou trois doses d’antigène, ou bien un, deux ou trois antigènes différents. Quoi qu’ilen soit voilà comment se réalise l'expérience : d’abord, dans les tubes 1 à 8, 0,1 cmc. de sérum de cobaye, puis de 1 à 4, 0,2cme. de sérum de malade chauffé, puis dans les tubes 1, 2, 3 et 5, 6, 7, le ou les antigènes. Dans le 9° rien.

Dans les 9 tubes Q. S. d’eau physiologique pour 2 cmc. 8. | |

Après un séjour d’une heure à l’étuve à 37° si le sérum étudié provient d’un syphilitique, la sensibilisatrice qu'il contient doit avoir fixé le complément sur l’antigène dans les trois premiers tubes.

Dans les six autres rien ne doit s’être passé puisque tout ou partie des constituants manque pour la fixation. Si le sérum provient d’un non syphilitique le complément est libre partout.

II. Temps.— Dans les neuf tubes on ajoute 1 emc. de sérum anti-mouton et 1 cme. de globules de mouton.

Après une demi-heure à 37° et après centrifugation, s'il y a syphilis L'HÉMOLYSE est NULLE dans les trois premiers tubes, totale dans les cinq suivants, nulle dans le dernier tube. S'il n’y a pas syphilis L’HÉMo- LYSE EST TOTALE dans les huit premiers.

En effet, dans le premier cas, le complément, fixé par la sensibilisatrice sur l’antigène, n’est plus libre et ne peut permettre l’hémolyse au cours du deuxième temps; au contraire resté libre il agira dans le second cas.

Pour les témoins, l’antigène seul n’a pas empêché l’hémolyse dans les tubes 5, 6 et 7 dans le tube 4 le sérum du malade seul non plus, dans le tube 8 le groupe hémolytique est complet, l’hémolyse est totale, dans le dernier le sérum hémolytique seul n’a pas agi sur les globules.

Il va sans dire que les témoins généraux sont dosés une fois pour toute : dès qu'il est prouvé que

l’antigène n’a pas d'action auti-complémentaire et que

le sérum anti-mouton est bien inactivé, cela suffit. Seul le tube 4, témoin du sérum de malade, est indispensable à chaque réaction, le tube 8 témoin du sérum de cobaye est indiqué pour chaque série de réactions.

TECHNIQUES s1MPLIFIÉES. — La technique telle que nous venons de l’exposer est celle de Wassermann, elle est dite classique et a subi depuis son origine, de nombreuses et plus ou moins heureuses modifications et simplifications.

Celles qui procèdent directement de la méthode initiale reposent toutes sur ces faits :

1° Que le sérum humain possède une hémolysine naturelle pour les globules de mouton et un complément ;

2° Que l’antigène foie hérédo-syphilitique n’agit pas en réalité par les tréponèmes qu’il renferme mais par ses lipoïdes et qu’il peut être remplacé par tous les organes qui en sont comme lui constitués: nous dirons tout à l’heure quelques mots sur cette intéressante question.

Nous ne ferons que signaler les réactions précipitantes qui s’éloignent trop de la réaction de fixation et dont la valeur pratique est d’ailleurs très discutable.

Quoi qu’il en soit, il existe toute une série de procédés tendant à simplifier la technique classique et auxquels il y a lieu d’accorder un intérêt inégal.

A toutes, on peut opposer le reproche d’avoir recours à des éléments d’une valeur trop variable et dont le dosage est impossible : La teneur en complément varie pour le sérum humain dans la proportion

de 15 à 45, celle de l’hémolysine naturelle est elle

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aussi, extrémement inconstante; ce sont là les objections que l’on fait aux méthodes de Bauer, Hacht, Foix, etc.

Seule la méthode de Noguchi, tout en conservant les mêmes garanties que le Wassermann, apporte une simplification appréciable : cet auteur emploie au lieu d’anti-mouton un sérum anti-humain.

D'autre part, il à eu l’ingénieuse idée de simplifier la technique en préparant des papiers imbibés d’antigène (extrait alcoolique de foie de fœtus hérédosyphilitique) et de sensibilisatrice (sérum de lapin anti-humain décomplémenté) et titrés par surfaces déterminées. Le complément est fourni par le sérum frais de cobaye. Les hématies humaines, antigène du système hémolytique lapin-homme peuvent-être fournies par le malade lui-même. Enfin Noguchi à démontré que si l’on n’emploie que de petites doses du sérum suspect, on peut négliger de l’inactiver par la chaleur, la quantité de complément qu’il contient étant négligeable.

Cette méthode, dont nous ne pouvons exposer en ‘détail la technique, serait d’après Joltrain et Gastou plus sensible que la réaction de Wassermann : mais, si les papiers titrés simplifient les manipulations préalables, la technique n’en est pas moins un peu délicate pour la pratique courante.

D’autres procédés fondés sur le même principe que celui de Noguchi (présence dans le sérum humain d’hémolysines pour les globules rouges de mouton) constituent d’utiles simplifications de la réaction de Wassermann (1).