D) — CONCLUSIONS

I. — L'examen histologique confirme l'existence d’une période de cicatrisation qui s'étend pendant les quatre premiers jours suivant l’amputation et pendant laquelle on ne trouve, sur les coupes, aucune « cellule de la régénération ».

Pendant cette phase, on observe:

a) — La fermeture de la blessure qui est complète au bout de 12 à 16 heures et résulte, d’une part, du rapprochement des bords et, d'autre part, d’un glissement des cellules de l’ancien épiderme. Les replis qui peuvent se former à ce moment, de façon mécanique, disparaissent par la suite et ne semblent avoir aucune signification pour les processus ultérieurs de la régénération.

b) La dégénérescence des muscles voisins de la blessure qui constituent des masses irrégulières entourées par de nombreux leucocytes. Dès le 4° jour, les formations musculaires ont complètement disparu de toute la zone voisine du point d’amputation, où les parties molles ne sont plus constituées que par du conjonctif làche.

c) — La formation, résultant du saignement consécutif à l’amputation, d'amas de globules rouges ainsi que de plages constituées par du plasma sanguin coagulé où je n’ai jamais observé la présence de cellules épidermiques devenues fusiformes, mais seulement de rares leucocytes qui paraissent dissoudre le plasma les entourant. On note également, dès le premier jour, la présence de « leucocytes spéciaux » de Maximow, qui disparaissent avec le début de la régénération proprement dite et dont le rôle reste mystérieux.

A léchelle histologique, les processus que l’on observe, pendant la période de cicatrisation, ne semblent pas présenter de différences essentielles avec ceux qui se produisent après amputation d’un membre chez un animal incapable de le reconstituer. Il est cependant probable qu'il existe, pendant cette phase, des phénomènes qui préparent la transformation de certains éléments en cellules de la régénération. Leur durée doit dépendre de l'état des tissus, et l’apparition beaucoup plus rapide d’un deuxième bourgeon provient sans doute du fait que les phénomènes préparatoires sont déjà effectués.

II. — Le début de /a « régénération proprement dite » se manifeste par l’arrivée d'éléments nouveaux que j'ai désignés, d’après Hellmich, sous le nom de « cellules de la régénération ». Cellesci s'introduisent entre l'extrémité de l'os sectionné et l’'épiderme qu'elles soulèvent, provoquant ainsi la formation d'un bourgeon. Cette première manifestation externe de la régénération ne présente qu'un retard très faible sur le début véritable du phénomène: en fait, je n'ai jamais trouvé, sur mes coupes, de cellules de la régénération lorsqu'un bourgeon n'était pas encore visible. Ces cellules se groupent en un blastème. Leur nombre augmente rapidement, sans qu'on observe, au début, aucune initose. Il semble donc que cet accroissement résulte d’une émigration des éléments de la base. Ce n’est que vers le 7° jour, c’est-à-dire à un moment où le rapport h/D atteint 0.25, que des divisions apparaissent simultanément dans l'épiderme et dans le blastème, tandis que l'émigration persiste. Le bourgeon augmente de hauteur et prend une forme conique, en même temps que sa densité cellulaire devient plus grande.

Pendant que le régénérat s’édifie ainsi, on observe des processus de résorption dans le cartilage qui n'avait subi aucune atteinte pendant toute la durée de la période de cicatrisation. Cette résorption commence peu après le début de la régénération proprement dite. Son étendue dépend essentiellement de la nature du cartilage intéressé par l'amputation; très faible, lorsque la section passe par le cartilage hyalin épiphysaire, elle est au contraire, très importante lorsque le cartilage hypertrophié de la diaphyse est atteint. h/D atteint 0,25 que des divisions apparaissent simultanément dans les deux cas. Ils sont certainement différents chez les larves agées, où le cartilage hvpertrophié a disparu de la région diaphysaire qui est constituée par une mince couche osseuse entourant la moelle. Je n'ai examiné en détails que les phénomènes qui se produisent lorsque la section passe à travers la diaphyse chez les larves jeunes.

Le début de la résorption semble dû à l’activité de macrophages

qui apparaissent à la fin du 4° jour et persistent jusquau 8.

Ils attaquent l'extrémité distale du cartilage amputé, mais la dissolution de la substance fondamentale semble résulter principalement de l'activité des cellules cartilagineuses elles-mêmes. On constate, en effet, que la résorption s'effectue principalement par la formation de lacunes latérales qui, au début, ne sont pas nécessairement en com-

munication avec l'extérieur et où, par suite, les macrophages n'ont pas pu pénétrer. Ces lacunes se réunissent ensuite. tandis que le car-

tilage persiste plus longtemps dans l'axe. La dissolution de la ids } DES ë

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substance fondamentale s'effectue beaucoup plus de la périphérie vers le centre que de l’extrémité vers la hanche.

Le périoste ne subit à aucun moment une résorption notable; il entoure ainsi une moelle isolée des autres tissus et grâce à laquelle j'ai pu observer, avec certitude, la persistance des chondroblastes qui, après dissolution de la substance fondamentale, s’assemblent en un réseau occupant l'axe de la moelle où ils conservent longtemps leurs caractères cytologiques particuliers. Ils se groupent ensuite à l'extrémité du fémur amputé formant ainsi un amas cellulaire auquel participent également des éléments provenant de la couche externe du périoste. Cet amas, à partir duquel se différenciera la portion distale du fémur, se montre bien distinct du reste du blastème, et il ne semble pas qu'à aucun moment, des chondroblastes libérés passent dans ce dernier.

La présence de cellules géantes est absolument constante, elles apparaissent vers le 6° jour. Rien ne permet d'indiquer quelle peut être leur origine: leur rôle demeure inconnu: elles ne manifestent aucune activité, ni phagocytaire, ni cytolysante. Elles restent dans la moelle, et j'ai pu suivre leur dégénérescence au moment où se forme le nouveau cartilage. En aucun cas, elles ne pénètrent dans le blastème ni ne participent d'une manière quelconque à la régénération.

ITI. — La différenciation débute au moment où le bourgeon s'aplatit en une palette. La portion distale du fémur se forme à partir de l’amas cellulaire qui s'est constitué à l'extrémité de la moelle. Elle tire ainsi son origine d'éléments provenant pour la plupart de l'ancien squelette et qui sont restés distincts du blastème proprement dit. C’est à partir de ce dernier, par contre, que s’édifie le squelette des segments distaux, dont la différenciation présente un retard sensible sur celle du fémur, qui est cartilagineux, alors que, dans le blastème, les éléments sont encore répartis de manière uniforme. Cette différenciation débute par le groupement des cellules suivant des axes, ébauches des diverses pièces squelettiques. Les zones intermédiaires, appauvries en cellules, donneront du conjonchf. Il semble ainsi que la destinée des éléments du blastème dépende de leurs rapports mutuels: sus se groupent, ils évoluent en cartilage, S'ils restent dispersés, en conjonctif.

Il se forme d'abord deux axes courts, ébauches du tibia et du péroné; bientot, l'axe tibial se prolonge distalement, formant ainsi l’ébauche du tarse et du doigt «1». Puis, apparaît le doigt «2»,

LA RÉGÉNÉRATION DES MEMBRES CHEZ LA SALAMANDRE. o1

qui est ensuite relié au péroné par une zone à partir de laquelle se différencieront les axes central et fibulaire du tarse. À ce moment, le tarsien «2» commence à s’'individualiser au point de jonction des axes du tarse. Enfin, les doigts « 3, 4, 5 > apparaissent successivement, mais à intervalles très rapprochés.

Toutes ces ébauches se transforment en cartilage par simple dépôt de substance fondamentale, sans modification de l’aspect des cellules, qui ne prennent que plus tard les caractères de chondroblastes typiques. Ces cartilages peuvent représenter à la fois plusieurs pièces squelettiques, qui s’individualiseront ensuite. C’est ainsi que les axes tibial et central du tarse sont constitués. au début, par un seul cartilage; par contre, dans l'axe fibulaire, les différents os du tarse apparaissent séparément.

Les doigts se chondrifient successivement suivant leur ordre de formation. Le 5° reste pendant très longtemps à l'état d’ébauche confuse, ce qui explique peut-être la présence assez fréquente de pieds à 4 doigts dans les régénérats.

11 semble résulter de cette étude que seul le squelette des segments distaux se forme à partir du blastème, la reconstitution de l'os amputé s’effectuant à partir d'éléments originaires de l’ancien squelette. Ceci explique peut-être que, dans les expériences de Bischler, lorsque la patte est amputée à travers un segment désossé, en principe, les segments distaux sont seuls régénéreés. La reconstitution, plus ou moins complète de l'os amputé, qui a lieu dans d’autres cas, correspondrait alors à des processus de régulation, sans doute, par suite d’une chondrification par contact, analogue à celle que l’on peut observer, lorsque, après désossement sans amputation, on introduit à la place de l'os enlevé un petit fragment de cartilage (même provenant d’une espèce étrangère).

IV. — J'ai laissé de côté la question de l’origine des cellules de la régénération: en effet, je n'ai jamais pu suivre leur formation. Ces cellules n'existent dans aucun tissu pendant la période de cicatrisation. Leur apparition tardive rend très invraisemblable une origine hématogène. Celle-ci peut être exclue avec certitude, grace aux expériences de transplantation effectuées par CEPertae et par Da vid, qui ont montré que le blastème se forme exclusivement à partir d'éléments originaires du territoire patte. Ces expériences permettent également de rejeter l'hypothèse d'une origine épidermique. Je n'ai du reste, jamais rien constaté qui puisse étre interprété comme le passage de cellules épidermiques dans le blas-

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tème. Par exclusion, l'origine des cellules de la régénération doit donc être recherchée parmi les tissus profonds de la patte: squelette, muscles, conjonctif.

La persistance de chondroblastes, après dissolution de la substance fondamentale, est certaine, mais ils restent groupés à l'extrémité de l'os et ne semblent pas passer dans le blastème proprement dit. D'autre part, la dissolution du cartilage, nécessaire pour que des chondroblastes puissent être libérés, débute à un moment où un blastème existe déjà. Les cellules cartilagineuses ne peuvent donc, en aucun cas, participer à la formation du premier bourgeon. De même, la formation de bourgeons sarcoplasmiques ne s’observe que relativement tard, après l'apparition d'un blastème.

Les premières cellules de la régénération qui ne proviennent donc, n1 des muscles, ni du squelette, ne peuvent être que d'origine conjonctive, et 1l semble probable que ce dernier tissu fournit la majeure partie du régénérat ‘), mais il est également certain que. dans les conditions normales, le squelette et la musculature participent à la régénération, qui n'est pas ainsi la propriété d’un tissu, mais de l'ensemble des éléments du territoire.

1) Ce qui a été confirmé expérimentalement par Gu yénot,chezle Lézard, où la transplantation du conjonctif caudal suffit à provoquer le développement d'un organe caudiforme.