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[35], Lecoce [33], GouLanc, Ki, KNox et RoBson [25], BARNETT, BusHBY MircHiNsoN [3]. Parallèlement, de plus en plus nombreux étaient les cas d’isoniazido-résistance observés in vivo sur des souches de bacilles de Koch isolées à partir d’expectorations de tuberculeux pulmonaires traités par cet antibiotique. STEENKEN, MEADE, WOLINSKI et Coates [61], montrent que les bacilles isolés de l’expectoration de tuberculeux pulmonaires cavitaires chroniques traités par l’IHN, présentent une sensibilité nettement diminuée à l’égard de ce médicament ; chez un patient, l’apparition de la résistance se fit en 26 jours. WEISSMANN, WAN- NER et TANNER [72], BOWEN et CoLLINS [7] aboutissent aux mêmes conclusions. Récemment, enfin, des études approfondies précisent les caractères de cette isoñiazido-résistance. COLETSOS et ses collaborateurs [12], montrent que l'INH-résistance apparaît d'autant plus facilement que le malade traité était antérieurement streptomycino-résistant, et que les lésions pulmonaires sont chroniques et irréversibles. Mile LOTTE et Mme PoussiER [45], rapportant les résultats du traitement de 414 tuberculeux pulmonaires soignés dans les services de Ptisiologie de la région parisienne, insistent sur.le rôle joué par l’administration simultanée de plusieurs antibiotiques, qui retarderaient l’apparition de la résistance. GERNEZ-RIEUX et ses collaborateurs [23] définit cette résistance comme précoce et rapide et observe dans un cas la réapparition de la sensibilité de la streptomycine d’une souche antérieurement résistante à cet antibiotique. MorELLI et Dappr [51] ont étudié de près ce phénomène. Enfin, une étude récente d’Etienne BERNARD, KREIS et Mme BRUN confirme ces faits.
Nous nous sommes fixé pour but, dans ce travail, d’étudier les modalités bactériologiques et cliniques d’apparition de l’isoniazido-résistance, son influence sur le métabolisme bactérien, son incidence sur la sensibilité des germes à la streptomycine et sur la thérapeutique de la tuberculose.
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Nous avons étudié 317 malades, qui nous ont permis d’isoler 513 souches bacillaires. Ces malades étaient en traitement, soit à la Clinique de la Tuberculose de M. le Professeur À. DUFOURT, au Sanatorium Sainte-Eugénie, soit dans le service des Voies Respiratoires de M. le Professeur Agrégé J. BRuN, à l'hôpital Jules-Courmont. Les examens et les déterminations du taux de résistance ont tous été effectués au Laboratoire de la Tuberculose de l’Institut Bactériologique de Lyon, service de M. le Docteur VIALLIER. *
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TECHNIQUE UTILISEE POUR LA DETERMINATION DE LA SENSIBILITE DES GERMES A L'ISONIAZIDE
Toutes les méthodes de titrage de la sensibilité du Mycobactérium Tuberculosis vis-à-vis de la streptomycine peuvent être utilisées pour la détermination de la résistance de ce germe à l'égard de l’isoniazide. COLETSOS, BoISVERT et Mlle OrtoT [13] proposent l'emploi du milieu à l'œuf de Lœwenstein-Jensen, répartis en tubes à fond plat de Legroux, l’antibiotique étant étalé en surface après coagulation du milieu à 38°, et obtiennent entre le quinzième et le trentième jour, des résultats macroscopiques précis, en appréciant le pourcentage de colonies résistantes aux différentes concentrations d’antibiotique. Et. BERNARD, KREIS et Mme O. BRUN [5], reprenant la méthode qu’ils avaient employée pour la détermination de la résistance du bacille de Koch à la streptomycine, préconisent la culture sur lames. Maïs, ces techniques ont le gros inconvénient d’être surtout valables avec des produits richement bacillifères, qui ne sont isolés qu'avec de grandes difficultés chez des sujets recevant un traitement antibiotique. C’est pourquoi, à ces méthodes directes, nous préférons une méthode indirecté, avec obtention préalable d’une primo-culture. Nous opérons de la façon suivante :
Le produit pathologique, recueilli soit directement, soit par tubage gastrique, est traité à l’acide sulfurique à 15%, durant quatre minutes, puis lavé trois fois. L’isolement de la souche est effectué par ensemencement sur milieu solide de Lœwenstein et sur milieu liquide de Dubos. Ce dernier. nous a toujours semblé favoriser la croissance du bacille tuberculeux. Après quinze jours d’étuve à 37°, les colonies. ainsi obtenues sont réensemencées en milieu de Youmans.
SERRE ; 2
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Mais, en cas de croissance peu abondante sur milieu de Lœwenstein, il convient de prélever le plus grand nombre possible de colonies isolées, afin d’éliminer la cause d’erreur dûe à la provenance différente des bacilles.
La détermination du taux de sensibilité à l’isoniazide se fait en milieu de Youmans, correspondant à la formule suivante
Sulfate de potassium....... 0,50 A'SparaAgiNEs ses ts yes 1 gr.
Citrate de magnésium. ..... 1,50 Phosphate monopotassique.. 5 gr.
‘baudistillée. ire spr einen 1.000
Ce milieu, ayant un pH ajusté à la neutralité par quelques gouttes de lessive de soude, est activé par Padjonction de 10% de sérum de cheval. On répartit le milieu en neuf tubes, en quantité égale ; dans sept tubes, on ajoute des doses croissantes d’isoniazide de la façon suivante :
0,05 >10,01% 20,5 x: °1 +. 5 x-10 20 YMpariene
Les deux tubes restants servent de témoins. Les souches isolées en primo-culture sont ensemencées et l’ensemble est porté à l’étuve à 37° perdant quinze jours. A cette période, la culture directe, par comparaison avec les témoins, permet d’apprécier l’existence ou non d’une culture. La sensibilité du bacille de Koch à l’isoniazide se situe entre le dernier tube présentant encore quelques colonies, et le ‘premier tube resté stérile.
L'exposé de cette technique appelle quelques commentaires. Au milieu de Dubos, nous avons toujours préféré le milieu de Youmans-sérum de cheval pour la détermination de la sensibilité des germes à l’antibiotique. En Youmans en effet le bacille de Koch cultive en flocons ou en grains dont la plus ou moins grande abondance permet, par une lecture macroscopique facile, d’évaluer quantitativement la croissance. D’autre part, nombreuses furent les critiques: adressées au milieu de Dubos. Mrrcæisox [49], Kxox, Kixc et WOooDROFFE [32], insistent sur la grande instabilité de
