ENSEMENCEMENT SUR SÉRUM

semencement, des fragments de la rate, ou du foie, ou des ganglions à peine caséeux, que l'on excise en se servant de pinces et de ciseaux flambés. Une condition indispensable pour la réussite et sur laquelle Koch insiste avec raison, est de bien broyer la matière tuberculeuse avant de la déposer à la surface du sérum gélatinisé, afm que les bacilles ne restent pas emprisonnés dans le tissu et viennent au contact de la substance nutritive. Il faut donc écraser la matière tuberculeuse entre deux scalpels ou entre deux lames de verre stérilisées, ou bien la broyer au fond d'un petit tube de verre, avec une baguette de verre stérilisée, de façon à la réduire en pulpe. Un peu de cette pulpe bien broyée est étalé soigneusement et par frictions assez fortes, à l'aide d'un fil de platine résistant, sur la surface inclinée des tubes de sérum. Il est nécessaire, pour éviter l'évaporation, de coiffer les tubes avec des doigts de caoutchouc stérilisés dans une solution de sublimé. Les tubes sont placés dans une étuve bien réglée à 37°.

Le développement des bacilles est remarquable par sa lenteur. Les premiers jours, on ne voit rien, même à l'examen le plus attentif. Si, dès ces premiers jours, on observe l'apparition de colonies blanchâtres à la surface du sérum, si l'on voit le liquide occupant le fond du tube se troubler, on peut être assuré que le tube a été contaminé.

Ce n'est qu'au bout d'une à deux semaines que l'on voit, au niveau des parcelles de tissu ensemencé, ainsi que dans leur intervalle, apparaître de petits grains arrondis, d'un blanc mat. En prélevant un de ces grains et en l'écrasant sur la lamelle de verre, on constate qu'il est sec, de consistance assez ferme et qu'il s'étale avec une certaine difficulté. A l'examen microscopique, après coloration, on s'assure qu'il s'agit de colonies exclusivement formées de bacilles de Koch.

Au bout d'une nouvelle semaine, les grains augmentent de volume, deviennent un peu saillants, avec des bords irrégulièrement arrondis ou anfractueux. Ces grains sont secs, ternes, d'aspect écailleux. Chaque écaille n'acquiert qu'un développement limité; de sorte que, dans les cultures initiales, provenant directement de l'animal, ces écailles demeurent généralement isolées. Rarement le nombre des bacilles ensemencés et arrivés à développement est assez grand pour que la culture initiale donne des colonies confluentes.