CULTURES
cériné ordinaire, de pH = 7,2, la semence de cette cnlture se développe en reprenant l'aspect des cultures normales de tuberculose : masses cérébroïdes granuleuses, bîanc jaunâtre ou grisâtre, légèrement humides et fragmentées.
Sur le milieu synthétique de Saut on (qu'il faut toujours ensemencer avec une pellicule de culture sur pomme de terre + bouillon glycérine, car la semence provenant d'une culture sur pomme de terre + bile se montre incapable de flotter en surface et de pousser en voile), l'aspect est à peu près identique à celui des cultures de bacille tuberculeux bovin sur bouillon glycérine ordinaire. La couche grumeleuse est cependant plus abondante, plus blanche, plus épaisse, plus étalée en hauteur sur les parois du vase. Le développement est plus rapide aussi. Il est à son maximum aux environs du vingt-cinquième jour.
Les cultures de BCG doivent être réensemencées tous les vingt ou, au plus, tous les vingt-cinq jours. Les tubes de pommes de terre seront placés, inclinés à angle de 10 à 15°, sur les portoirs, de telle sorte que l'extrémité inférieure de la pomme de terre reste seule au contact du bouillon.
Ballons ou tubes seront maintenus dans une étuve très exactement réglée à 38° C.
Pour la préparation des pommes de terre, il est recommandable d'en immerger pendant quelques heures les fragments (taillés à remporte-pièce) dans de l'eau contenant 10 grammes par litre de carbonate de soude. On les essore dans un linge et on les introduit dans des tubes étranglés de Roux (1), dont on remplit toute la partie inférieure, jusqu'à l'étranglement, avec le bouillon de veau glycérine à 5 %, dont on a ajusté le pH à 7,2.
On stérilise à 120° pendant trente minutes et on conserve les tubes, soigneusement capuchonnés, pendant trois jours à l 'étuve pour s'assurer de leur pureté.
(1) On peut se procurer ces tubes étranglés de Roux chez Leune, 28 bis, rue du Cardinal-Lemoine, à Paris (Ve).
134 LE « BCG »
Si l'on veut faire les cultures sur pommes de terre biliées, on prépare celles-ci de la manière suivante :
On réunit dans un ballon le contenu de plusieurs vésicules biliaires aussi fraîches que possible. On stérilise à 120° pendant trente minutes, et on conserve le ballon au repos pendant environ trois semaines à la température du laboratoire. Il s'y forme un abondant dépôt de pigments de couleur rouge brique qu'on sépare ensuite par tiltration sur papier au moment de l'usage.
Des fragments de pommes de terre, découpés à l'emporte-pièce, sont immergés complètement- dans cette bile, à laquelle on ajoute 5 % de glycérine. On porte le tout au bain-marie à 75° pendant trois heures. Les pommes de terre sont ensuite égouttées et réparties en tubes étranglés de Roux qu'on remplit jusqu'à l'étranglement avec de la bile pure glycérinée à 5 %. On stérilise trente minutes à 120°. Le pH est alors d'environ 8,7.
Le milieu synthétique liquide de Sauton, qui convient parfaitement au BCG, — beaucoup mieux, du moins, que tous les autres milieux synthétiques que nous avons étudiés, — a la composition suivante :
En grammes
Asparagïne 4
Glycérine pure 60
Acide citrique 2
Phosphate bipotassique 0,5
Sulfate de magnésium 0,0
Citrate de fer ammoniacal 0,05
Eau 940
Après la dissolution totale de l'asparagine et des sels, le liquide est ajusté, avec de l'ammoniaque pure, au pH = 7,2, puis réparti par fractions de 150 centimètres cubes dans des fioles cylindriques à fond plat de Fourneau, ou dans des ballons de 250 centimètres cubes, et stérilisé à l 'autoclave.
