CULTURES

Le poids des bacilles fourni par chaque ballon à la fin de la quatrième semaine est supérieur à 5 grammes.

Le poids des bacilles fournis par un tube de pommes de terre dépasse rarement 0 gr. 600 (microbes pesés à l'état humide, essorés entre deux doubles de papier buvard stérile).

Les bacilles provenant des cultures sur milieu de Santon sont recueillis sur un entonnoir recouvert d'un capuchon de papier et garni de papier Berzélius stérile. On les essuie entre plusieurs feuilles du même papier Berzélius et, pour les peser, on les transporte aseptiquement, avec une spatule, dans une petite capsule de platine, ou de nickel pur, ou de quartz, fermée par un couvercle et stérilisée.

Chaque centigramme de culture essorée fraîche contient environ quatre cents millions de bacilles et forme l'une des trois doses qui sont employées pour la vaccination des enfants nouveau-nés par voie buccale.

Pour la vaccination des jeunes veaux, la dose (unique) est de 5 centigrammes, soit deux milliards de bacilles, et cette dose doit être injectée dans le tissu cellulaire souscutané, en plein fanon (pli de la peau qui pend à la partie antéro-inférieure du cou).

B. — PRÉPARATIOX ET COXSERVATION DES ÉMULSIONS VACCINALES

Les bacilles recueillis, essorés et pesés comme il a été dit ci-dessus, sont déposés dans un flacon stérile plat, en verre vert épais, contenant des billes de verre stérilisées de 5 millimètres de diamètre (1). Ce ballon, dans lequel on introduit au préalable quelques gouttes du liquide conservateur,

(1) Ces flacons, dont il existe plusieurs dimensions, de 10, 15 ou 20 eenti-

136 LE « BCG »

est agité mécaniquement pendant dix à quinze minutes pour dissocier les amas bacillaires, puis on complète en ajoutant la quantité de liquide nécessaire à la dilution jusqu'à 2 centimètres cubes par centigramme de bacilles. Lorsque Pémulsion est bien homogène, sans grumeaux apparents, on la transvase, au moyen d'un siphon stérile, dans un récipient répartiteur qui permet de la distribuer aseptiquement par dose de 1 centigramme (2 cent, cubes) pour les enfants, de 5 centigrammes (5 cent, cubes) pour les veaux, dans des tubes qu'on scelle aussitôt à la lampe (1).

Il est indispensable que les émulsions vaccinales soient très homogènes et sans grumeaux. Celles qui sont destinées à être injectées, surtout par voie intraveineuse, aux animaux d'expérience, doivent être soigneusement préparées et débarrassées de tout floculat.

Le liquide employé pour la dilution a la composition suivante par litre :

Glycérine pure, en grammes 40

Glucose pur, en grammes 10

Eau distillée, en centimètres cubes 1000

Ce liquide est stérilisé à l'autoclave.

Mais on peut aussi bien utiliser le milieu de Sauton, dilué au quart, stérile. L'un et l'autre de ces liquides conservent bien la vitalité des bacilles.

Nous avons mesuré cette conservation par l'ensemencement, sur pomme de terre glycérinée, d'une même quantité d'émulsion maintenue pendant des temps variables, en tubes scellés, à la température du laboratoire et à l'abri de la lumière, ou en glacière aux environs de + 5°.

Les résultats de ces expériences ont montré qu'après

mètres de diamètre, ainsi que les billes, sont fournis par la maison Leune, 28 bis, rue du Cardinal-Lemoine, à Paris (Ve).

(1) Les flacons à col effilé utilisés par l'Institut Pasteur sont fabriqués par E. Saint-Omer, 42, rue du Fer-à-Moulin, Paris (Ve). Nous avons fait construire une machine spéciale pour agiter mécaniquement les émulsions de BCG. Cette machine, mue par l'électricité, est fabriquée par C. Grundrich, 23, rue Armand - Barbes, à Lille.

ÉMULS10NS VACCINALES 137

dix jours, soit à la température du laboratoire, soit à la glacière, la culture est déjà apparente le cinquième jour.

L'émulsion préparée depuis vingt jours ne commence à donner des colonies que le neuvième jour ; l'émulsion d'un mois le treizième jour seulement.

Les mêmes ensemencements faits sur milieu de Petrofï' (quatre gouttes par tube = 1 milligramme de BCG) permettent de compter les colonies. On constate alors qu'après dix jours de conservation à la température du laboratoire il s'est développé soixante-treize colonies, contre deux cent dix-huit pour le BCG conservé à la glacière.

Après vingt jours, le nombre des colonies a été :

Pour le BCG conservé à la température du laboratoire. 2 Pour le BCG conservé à la glacière 14

Après trente jours :

Pour le BCG conservé à la température du laboratoire. 2 Pour le BCG conservé à la glacière L2

Il est donc indiqué de n'utiliser, pour la vaccination, qu< des émulsions préparées depuis moins de dix jours. Si cette condition n'était pas remplie, on s'exposerait à ne faire absorber aux nouveau-nés, ou à n'injecter dans le fanon des jeunes veaux, que des cultures contenant un trop petit nombre de germes vivants et un trop grand nombre de bacilles morts. Or, nous savons que les premiers seuls peuvent conférer une résistance durable à l'égard des réinfections.

Voilà pourquoi, dans les instructions qui accompagnent les doses de BCG, il est indiqué qu'elles doivent être employées dans les dix jours qui suivent leur expédition.