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Le L'aspect Rough est beaucoup plus fréquent que la forme Smooth. La coloration de ces colonies varie Suivant l’espèce. Blanchâtres pour les catarrhalis elles acquièrent une pigmentation jaune foncé pour les

Fe __ Flavus. Nous reviendrons sur l'importance diagnostis

= que de cette coloration. 2 PS

La difficulté commence quand on veut isoler ces 4 différentes colonies en souche pure. Pour cela il faut employer exclusivement, et nous y insistons, la gélose au sang. Une grande partie de la colonie sera déposec sur la surface de ia gélose, sans trop étaler. +

Après trois passages à 2 jours de distance la sou- 146 che est déjà habituée et on pourra pratiquer un isolement en gélose ascite ou en gélose au sang pour en vérifier la pureté.

Pour conserver les souches ainsi isolées nous indiquerons plus loin des milieux particulièrement favorables.

Pour identifier une souche il faudra étudier :

1° l’aspect et la coloration des colonies; 2° l’aspect microscopique des germes et les caraclères après coloration de gram; 3° si nécessaire, les caractères de fermentation ct d’agglutination.

I. — L'aspect des colonies, à part les caractères Rough et Smooth, n’a rien de bien typique. En théorie,

parmi les Pseudoméningocoques, seuls les Flavus se colorent en jaune. Ceci n’est pas absolu et nous avons vu des catarrhalis typiques et des Crassus acquérir une pigmentation jaune cérumen, surtout dans les

milieux au sang. ,

II. — L'aspect microscopique donne des indications utiles. Seul, le crassus est très caractéristique et se reconnaît facilement par sa coloration partielle par la méthode de Gram.

III. — Les caractères de fermentation sont surtout utiles à rechercher. Il est exceptionnel qu'on soit obligé de recourir à l’agglutination.

Pour simplifier nous allons résumer la marche à suivre pour l'identification d’un pseudoméningocoque.

Il est inutile de dire que cette identification doit être faite exclusivement sur des souches pures.

Deux pseudoméningocoques sont très faciles à reconnaître : le Crassus et le Siccus. Le premier par sa coloration par la méthode de Gram, le deuxième par ses caractères de culture. Nous n’y insisterons pas.

Pour les autres, le diagnostic est plus délicat et ül est indispensable de recourir aux caractères de fermentation.

La coloration jaune des colonies, nous l'avons dit, n'est pas absolument caractéristique des Flavus, car d'autres pseudoméningocoques peuvent l’acquérir. Mais les Flavus fermentent facilement certains sucres ce qui les différencie des catarrhalis.

On peut se limiter à trois sucres principaux : le glucose, le levulose et le maltose. Nous donnons nour cette recherche la préférence aux milieux liquides.

Si le microbe à identifier ne fermente aucun sucre, il s’agit d’un Catarrhalis ou d’un Cinereus. La distinction entre ces deux germes est assez subtile.

La —

nor MA SEE ei dant ‘æ

Si enfin, le germe ne féonte que le maltose etle

glucose, le diagnostic hésite entre le Flavus JIT et le méningocoque. L’agglutination par les sérums antimé-

: ningocciques pourra parfois permettre |’ identification. ce

. En résumé, l'isolement et l'identification des Pseudoméningocoques n'est généralement pas GRIS SI l’on prend certaines précautions.

Si l’on veut conserver les souches on peut se servir de la gélose au sang ou des milieux à l’amidon.

Ces derniers sont particulièrement favorables: on

peut facilement garder les souches pendant un mois sans les repiquer. :

Milieu de Sedallian et Naussac

Peptone Martin 750 on.

Macération de viande de bœuf 750 cm.

(Laisser macérer la viande pendant 12 heures, puis

chauffer une heure à 45° et quelques minutes à 100°.

Filtrer sur papier et ramener au volume primitif.) Ajuster le pH à 7.

Ajouter 1 g. de gélose, 1 g. de gélatine fondues et 10 g. d’amidon.

Chauffer au bain-marie, Ajouter 1 g. de Phosphate Monopotassique et 1 g. de Citrate de Soude. Stériliser 120° pendant 30 minutes. Filtrer. Ajouter 0 g. 50 de Tyrosine et 0 g. 50 d’Asparagine. Repartir. Stériliser à 115° pendant 15 minutes.

Il est à noter que ce milieu filtre très difficilement à cause de l’amidon qu’il contient. Si l’on désire obtenir un milieu absolument limpide, il est préférable de ne pas le filtrer et de le laisser déposer pendant plu-

Si té non fermente tous les sucres, il s 'agit d’ ‘un

quement.…

+ s ae:

Milieu de Elaizot (milieu de choix), modifié S

Macération de viande de bœuf 500 em’.

Peptone Martin 500 cm’.

Amidon MN ES

Gélose 26. 0

Chlorure de Sodium Den:

pH 7,2.

Laisser fondre la gélose dans un peu de bouillon. Transformer l’amidon en empois. Mélanger dans la peptone et le bouillon et distribuer dans des tubes sur une hauteur de 4 iravers de doigt. Stériliser à 115 pendant 15 minutes.

Voici donc résumés les principaux caractères des Pseudoméningocoques, que nous avons isolés dans l’expectoration des asthmatiques et des bronchitiques chroniques. Comme pour les Streptocoques, le fait prédominant est la fragilité de ces germes et la difficulté de les adapter aux milieux artificiels de culture.

Ces difficultés peuvent être facilement vaincues si l’on suit une technique précise telle que nous venons ae l'indiquer.