HAS
8. N° 207-D. C’est la sœur du précédent; elle héberge des bacilles longs, non diphtériques. — Réaction négative.
c. Vo 2/0. p. n° 248. Ces deux sérums appartiennent à 2 petits maladesatteints d’angine diphtérique banale, près du début; ils ont été prélevés avant l'injection sérique. Réactions négatives.
c. N°2//4. Au contraire, ici le sérum a été recueilli 4 jours après l'injection d’antitoxine, et cependant la réaction de fixation est encore absente, ce qui montre le rôle effacé que peut jouer le sérum hétérogène dans la production des déviations qu’on observe dans le liquide sanguin.
Les essais ci-dessous relatés ont eu pour but de rechercher s’il y avait un rapport réel entre la constatation positive de la réaction antimicrobienne ou antitoxique dans le sang des sujets et l'existence effective de propriétés immunisantes dans le même liquide.
La méthode est éminemment simple :
Avec le même sang nous avons fait une réaction de fixation et cherché en mêmetemps à protéger un cobaye contre des doses mortelles de toxine ou (fait plus probant encore) contre la culture de bacilles virulents.
Voici quelques exemples :
1. Etude biologique des réactions sériques consécutives à une angine fruste. —Mie C..., infirmière du pavillon de la diphtérie, à l'annexe Grancher.
A bien voulu à 4 reprises selaisser prendre 20 cmc.de sang par ponction veineuse et mérite tous nos remerciements.
Dans le milieu du mois de février 1913, en pratiquant l’ensemencement de la gorge de Mie C..., qui accusait d’ailleurs une rougeur des piliers et un peu de douleur à la déglutition depuis plusieurs jours, onisole du bacille diphtérique long et granuleux.
La réaction de déviation pratiquée à cette époque est d’une netteté typique. ï
Il s’agit donc, on le voit, d’une forme fruste d’angine diphtérique.
La malade ne s’était d’ailleurs plainte que plus tard de ses symptômes d’angine.
Elle fut sur le moment, et pendant quelque temps, considérée simplement comme un porteur de germes, et à ce titre n’a pas reçu d'injection de sérum.
En essayant la virulence du bacille isolé, on constate que la culture sur bouillon tue en 24 heures un cobaye moyen.
On chercheà voir si la réaction de l’anticorps correspondrait à une réaction immunisante, et dans ce but on injecte préventivement, le 3 mars, un cobaye avec 2 cmc. de sérum C..; un 2° cobaye est injecté de la même manière.
Le lendemain, on inocule simultanément l’un des 2 cobayes précédents et un 3° cobaye témoin avec 1 cmc. de culture de 20 heures du bacille 175, isolé de la gorge du porteur. Tandis que le cobaye témoin meurten 20 heures environ avec toutes les lésions classiques de l’intoxication diphtérique aiguë, le cobaye injecté préventivement, après avoir présenté, pendant les 3 jours suivants, un peu d’œdème au lieu d’inoculation, guérit définitivement.
Le même jour où on avait inoculé ces 2 cobayes avec la culture complète du bacille 175, on inoculait au 2° cobaye injecté préventivement 1 cmc. de toxine diphtérique venant de l'institut Pasteur et dilué au 1/200. En même temps, on inocule 1 emc.seulement de la même dilution à un cobaye témoin et r cmc. d’une dilutionau 1/100 à un 3° animal.
Celui-ci meurt 28 heures après; l'animal qui avait reçu seulement 1 cmc. de la dilution au 1/200 meurt 4 jours après.
Au contraire, l’animal injecté préventivement avec une
dose contenant 1/3 de poison de plus, le lendemain même de l’inoculation non seulement ne présentait pas le moindre œdème, mais était d’une vivacité parfaite, et présentait tous les attributs de la santé. |
Donc, immunisation effective contre la culture et contre la toxine.
Le 4 mars. Nouvelle prise de sang. Réaction de fivation caractéristique dans les tubes d’antigène.
On pratique sur { animaux des recherches analogues aux premières :
r témoin est inoculé avec une toxine vieille de 13 jours, qui le tue en 36 heures, à la dilution de 1/50.
Un 2° animal reçoit préventivement 1 cme. de sérum C..., et le lendemain matin 1 emc. de la solution à 1/50 de toxine. Il ne présente pas d’œdème les jours suivants.
Un 35° animal reçoit simultanément 2 cmc. de sérum C... sous la peau du flanc droit et 1 cme. de la toxine diluée au 1/50.
Le lendemain, il présente un léger œdème, qui, les jours suivants, aboutit peu à peu à une escarre lardacée. L’animal finit par guérir.
Enfin,un 4e animal reçoitle matin 1 emc. de la dilution au 1/50 de toxine,et 8 heures après,sous la peau du flanc opposé à l’inoculation, o cmc. {4 ‘seulement (le fond du tube) de sérum GC... I meurt environ 4o heures après l’inoculation.
On voit très bien d’après l’ensemble de ces 4 expériences le rôle immunisant très net du sérum dont la réaction antiloxique était si patente. Par contre, à mesure que l’inoculation se rapproche de l’injection sérique, les phénomènes d’'immunisation deviennent moins marqués, jusqu’à disparaître quand l'injection antitoxique (trop faible) a lieu après l’inoculation.
Pour le degré de l’immunisation, ces débuts de recher-
— Al —
ches montrent qu'il n’est évidemment pas considérable.
Le 19 novembre 1913. Plus de 8 mois après, un ensemencement de la gorge montre l’absence de bacilles diphtériques.
Du sang a été recueilli par ponctions veineuses, et, pour des causes secondaires, a dû être pendant 5 jours conservé à la glacière avant d’être‘utilisé pour rechercher la réaction de fixation.
Essayé à 2 reprises, ce sérum est reconnu incapable de donner le renseignement demandé : il est complètement «empêchant ».
Le 22 novembre, on utilise ce sérum, dont l'aspect n’est pas engageant (il est recouvert d’une couche de.moisissures malodorantes) pour tenter des essais d’immunisation.
Un cobaye reçoit sous la peau du flanc gauche 3 cmc. de ce sérum.
Le lendemain, il reçoit sous la peau du flanc droit r cmc.5 de toxine datée du 17 novembre diluée au 1/150.
Tandis qu’un cobaye injecté en même temps avec une dose analogue du même poison meurt en 36 à 4o heures —,
tandis qu'un 2° cobaye témoin injecté la veille avec 3 cmc. de sérum provenant d’un sujet atteint de diphtérie au début, et dont la réaction de fixation était négative, recevait seulement 1 cmc. de toxine et mourait 36 à 4o heures après,
le cobaye immunisé par le sérum C..., en voie de putréfaction cependant, restait indemne et sans œdème.
Enfin, un 4° animal recut à la fois 2 cmc. du sérum C... d’un côté et 1 cme. 5 (1/3 de plus que le témoin) de toxine diluée au 1/150.Le lendemain, il présente un peu d'œdème, qui augmente le surlendemain, puis diminue graduellement pour disparaître définitivement.
ET
Le 5 décembre, l'animal avait dépassé son poids initial.
Les faits dans cette histoire parlent trop clairement pour qu’il soit nécessaire d’y appuyer. // y avait ausst nettement que possible concordance entre la réaction de l'anticorps el la réaction immunisante.
2. Etude biologique d'un cas d'immunisation par diphtérie antérieure. — G... R., salle Triboulet n° 9.
L'enfant est soigné dans le service pour une néphrite grave, avec oligurie intense.
Le 10 avril, sur du sang prélevé à titre thérapeutique, on constate une réaction de fixation intense, etl’on apprend seulement après que le malade a eu la diphtérie il y a 1 an, et la rougeole il y a 3 semaines.
L’ensemencement de la gorge, bien qu’il n’y ait pas trace d’angine, montre la présence de bacilles moyens et longs, granuleux. L'enfant ne reçoit pas d'injection de sérum.
On expérimente une série de 4 animaux pour voir s’il y a.corrélation entre la réaction de fixation et une réaction immunisante.
Le 12 avril, un cobaye reçoit préventivement 1 eme. 5 de sérum de l’enfant. Le lendemain on lui inocule 1 emc. d’une culture de 2/4 heures de bacille diphtérique n° 750-V. Celui-ci tue en 3/ heures le cobaye témoin. Or, l’animal, protégé par la minime injection préventive de 1 eme. 5 contre la culture redoutable, survit pendant 60 heures. Il. faut signaler ici que c'était un très petit cobaye de 320 gr. et d'aspect peu florissant. On peut cependant interpréter son cas comme celui d’une immunisation relative, si on le compare au cas de mort du témoin, qui était un gros et solide animal de 560 gr. (N'ayant pas eu sous la main d’animaux comparables, nous avions préféré, pour pouvoir juger équitablement les faits, choisir comme témoin l’animal le plus résistant et tâcher de protéger le plus fragile.)
Le 13 avril, à autres animaux sont expérimentés, de poids sensiblement égal cette fois.
L'un, pesant 560 gr., reçoit coup sur coup 1 cmc. de sérum de l'enfant et 2 cme. de toxine diphtérique diluée au 1/200. Îl reste complètement indemne, alors qu’un témoin, un cobaye de 616 gr., inoculé à la même heure avec la même dose du même poison, meurt 48 heures après avec les lésions caractéristiques de l’intoxication diphtérique.
Le 5 maï, on pratique chez le même enfantune deuxième prise de sang. La réaction, près d’un mois après le premier examen, est {out aussi franche. ;
Le 8 mai, on procède à un nouvel examen du pouvoir immunisant du sérum.
Un cobaye est injecté à cette date avec 2 cmc. de sérum 212, et reçoit le lendemain o cmc. 5 de culture mixte P 750 IT
3 autres cobayës vont servir de témoins et sont tous trois injectés le même jour avec des sérums ne possédant pas de pouvoir fixateur :
L’un reçoit la forte dose de 3 cmc. 5 de sérum n° 220, (scarlatine, pas de bacilles). Inoculé le lendemain avec O cmc. 4 de la culture si virulente, il n’est pas protégé par ses 3 cmc. 5 de sérum et meurt en 30 heures.
Le deuxième reçoit la grosse quantité de 5 cmc. de sérum 918 (granulie — réaction de fixation négative). Inoculé le lendemain, il meurt en 48 heures.
Le 3° enfin reçoit préventivement 3 cme. 5 de sérum 213 (angine diphtérique au 2° jour. Bacilles moyens et grêles. Réaction de fixation absente). Il meurt également 48 heures après l’inoculation virulente.
Quant au cobaye qui a reçu le seul sérum présentant une
belle déviation du complément, il reste sans œdème, mais perd 30 gr. en 3 jours (400 gr. au lieu de 430 gr.).
Le 13 mai, 4 jours après l’inoculation, on lui réinJecte 1 cmc. 5 du sérum 212, d'aspect et d’odeur indiquant un très fâcheux état de conservation. Pourtant, 3 jours après, l'animal pèse 450 gr., 20 gr. de plus qu’au début de l’expérience, et est plein de vie.
Ces essais nous paraissent aussi démonstratifs qu’on les peut souhaiter, puisque, {andis que $ sérums, de réaction négative, ne protégeaient pas l’animal, à la dose de 3cme.5 à 5 cme., seul le sérum qui déviait le complément, à plus faible dose, suffisait à limmuniser.
3. — Réaction de fixation nette et léger pouvoir immunisant du sérum. — N° 192-C. : Petit rougeoleux, porteur de bacilles longs. — Le sang de l’enfant présente une belle réaction de déviation.
Le 14 avril, injection préventive à un cobaye de 400 gr. de 1 eme. de sérum.
Le lendemain :’animal reçoit o cmc. 5 d’une culture toxique de 24 heures, constituée par un mélange de bacille P- 700, et de baaille 175, qui tue en 24 heures à peine le témoin inoculé en même temps.
Le cobaye est préservé pendant 4 jours et 10 heures, et meurt à ce moment avec les symptômes de l’intoxication diphtérique.
Donc protection légère, qu’on aurait sans doute rendue plus efficace avec une dose plus forte de sérum.
En même temps que le témoin inoculé avec la culiure, on avait inoculé avec la même dose de culture 2 autres cobayes, lun piqué avec 1 cmc. 75 de sérum 197 (provient d’une enfant atteinte d’angine diphtérique commune à bacilles longs à son début) dont la réaction de fixation est négative,
l’'autre,avec 1 cmce. de sérum 195 (angine pultacée cryp-
tique, avecenduit grisâtre suspect, ganglions et facies grippé) dont la réaction de déviation est négalive.
Le re" de ces deux cobayes meurt en moins de 24 heures, ce qui montre l'absence complète simultanée des deux réactions.
Le 2° a été courtement protégé : il a mis 60 heures à mourir.
Dans ce cas on doit reconnaître l’absence de parallélisme entre les à réactions. Il est bien certain d’ailleurs que la dose de 1 cmc. de sérum ne doit guère être immunisante quand il s’agit de neutraliser des toxines aussi actives que celles des bacilles que nous avions inoculés. Aussi pour apprécier des réactions d’immunité assez peu considérables, si l’on ne dispose que de peu de sérum, vaut-il mieux se servir de toxine que de cultures complètes.
4. — Absence simultanée de pouvoir fixateur et de Pouvoir immunisant sur des sérums d'un diphiérique et de porteurs de bacilles. — Le 12 avril, entre au pavillon Sevestre la petite Æ.., Gilberte, atteinte de diphtérie pharyngée typique, à bacilles longs.
On recueille avant l'injection sérique du sang de l’enfant (n° 197).
On pratique ensuite l’examen des gorges de son entourage.
Mère :n° 197 B : pas de bacilles.
Sœur : n°197 G : bacilles courts.
Frère : n° 197 D : bacilles courts.
2° frère : n° 197 E : pas de bacilles.
On récolte sur tout le monde du sang dans la veine et on adjoint à tous ces sérums deux autressérums : n°513 (pneu-. moniqué) et n° 515 (syphilitique) pour augmenter de deux témoins la série.
Sur aucun des 6 sérums expérimentés, on ne constate de
réaction de déviation, les essais étant repris à 3 jours d’intervalle.
(Noter que l’angine diphtérique est de début récent.)
Un cobaye est injecté le même jour, 18 avril, avec le sérum de chaque sujet, à des doses de r cmc. 5 à 2 cmc.s, suivant les quantités de sérum dont on dispose.
Le lendemain tous sont inoculés avec o cmc. 5 d’un mélange de cultures de 24 heures de bacilles P 750 et 175.
Tous meurent en 30 à 36 heures après l’inoculation, sauf le cobaye injecté avec le sérum 197-D, qui met 7 jours et r2 heures à mourir et a ainsi été protégé.
Dans l'ensemble, à cette exception près, les réactions ont marché de pair. Nous n’avons pas trouvé la cause de cette résistance, n'ayant pu revoir l'enfant 197-D et savoir s’il avait déjà eu la diphtérie.
5. — Résultats analogues aux précédents chez une diphtérique, deux porteurs de bacilles et un rhumatisant.
On notera ici encore au sujet de l’angine diphtérique que la réaction de fixation manque au début de la maladie (ne 208).
Pour les autres sérums (n° 516, rhumatisant — 206, rou geoleux vecteur de bacilles courts ; — 207-C, porteur de bacilles), ils n’ont à aucun degré de pouvoir fixateur, sauf une légère résistance à l’hémolyse pour le dernier.
De même tous les cobayes injectés préventivement avec ces sérums respectifs meurent 24 heures après l’inoculation tout comme le témoin. L'animal injecté avec le sérum 207-C survit seul 6o heures.
Pour tous ces examens, on peut encore constater la concordance des deux propriétés du sérum.
Rèmarques générales sur la réaction de fixation et ses applications à la diphtérie.
En partant des hautes discussions pathogéniques sur l’ubiquité du germe, la contagiosité et l’immunité dans la diphtérie, nous avons vu que l’idée de rechercher dans les humeurs la trace des réactions intimes effectuées dans l'organisme conduisaient tout naturellement à utiliser dans cé but la réaction de fixation.
Nous nous sommes surtout attachés à en établir la légitimité, et, reprenant à la base même les expériences fondamentales qui en établissent la valeur, à démontrer le droit qu'on a de l'utiliser aux fins proposées.
Si nous envisageons dans la pratique les faits qu’elle engage à confirmer ou à infirmer et les notions qu’elle permet d'étendre,
au point de vue bactériologique, elle nous engage à confondre dans la même famille les bacilles diphtériques et les pseudo-diphtériques ;
au point de vuede l’étude des liquides de l'organisme, si l’on se borne à celle du sérum sanguin, elle permet de faire des constatations d’un grand intérêt, sur lesquelles il faut maintenant faire quelques réflexions et quelques critiques.
En effet, si l’on passe en revue les documents recueillis, il est évident que, dans chaque groupe, il n'existe pas encore un nombre de faits suffisants pour dicter des conclusions définitives. Que peut-on dire dès à présent?
Dans la première partie de ces recherches, nous avons pu voir rapidement l’inexistence habituelle de produits d’origine bactérienne dans les humeurs, ou tout au moins
leur défaut de permanence en quantités telles qu’on les y puisse démasquer.
IT fallait donc y trouver l’inverse et tâcher d'y déceler des anticorps. Dans ce but, et pour être complet, il est nécessaire de recueillir des documents chez toutes sortes de sujets, d’âge différent, dans les affections les plus diverses el surtout aux différentes périodes de leurs maladies. C’est là ce qui manque encore à ce travail.
Il faut préciser et déterminer à quelle époque apparaît l’anticorps dans le sérum, quels sont ses facteurs de production, ceux qui en favorisent ou en retardent la croissance, ceux qui en établissent la fixité, ceux qui pourraient interrompre ou détruire l’immunité.
Dans ce champ aux limites lointaines, quelques jalons épars montrent surtout l'étendue qu’il reste à parcourir.
SI, pour chaque sujet examiné, nous n’avons pas pu recueillir plus de documents, permettant de suivre l’'apparition, l’augmentation ou la diminution et la disparition des substances protectrices, cela tient pour beaucoup à ce que nos malades sont presque tous des enfants, à qui il n’est pas toujours facile de’prendre beaucoup de sang, et il en faudrait en particulier des quantités assez grandes pour étudier et pour mesurer le pouvoir immunisant aux diverses phases de la maladie.
Quoi qu’il en soit de ces lacunes, si l’on veut résumer les notions du chapitre qui précède, nous dirons qu’on trouve surtout la réaction de fixation positive chez les sujets qui, tel l'enfant G. R. (sérum ne 212), ont eu la diphtérie et ont conservé du bacille dans la gorge, ou chez ceux qui, telle Mie C... (n°175), n’ont eu qu’une forme fruste de l’affection et ont ensuite gardé dans le pharynx des bacilles d’une virulence remarquable. En somme, chez de tels porteurs, l’immunité s’établit par la présence et
l'activité d'un foyer microbien déversant dans l’économie des produits immédiatement neutralisés, et bien au-delà, par des antidotes d’une sensibilité merveilleuse.
Il semble bien qu’en affinant la réaction de Bordet- Gengou on puisse parvenir à les mettre en évidence, -et il semble bien également d’après les quelques protocoles qu’on a pu lire dans la deuxième partie du chapitre précédent, qu’on puisse considérer que la réaction de déviation, telle que nous l'avons définie, et la réaction d’immunité, marchent effectivement de pair.
Et d’après le degré assez faible des immunisations enregistrées, il semble que, dès à présent, le degré de sensibilité de la réaction déviante soit au moins aussi élevé que celui du pouvoir immunisant.
Doit-on aller jusqu’à dire que c’est l’antitoxine seule ou le corps antibactérien seul qui, dans la réaction, dévie le complément ? Il n’est pas possible de répondre à cette question pour le moment.
Relativement à la date d’apparition de l’antitoxine dans le sang des diphtériques et à sa reconnaissance par la fixation du complément, il est difficile pour le moment de préciser. Nous avions craint, dans les débuts, que la présence de l’antitoxine étrangère ne gêne les constatations, et nous nous étions astreints, dans les angines diphtériques, à faire les prélèvements de sang surtout avant l’injection de sérum antitoxique.
Il semble que la présence en faible quantité du sérum antidiphtérique ne détermine pas la production de la réaction.
Mais, sur ce point, les recherches sont encore trop peu avancées pour répondre catégoriquement.
En tout cas, un fait certain est que dans l’angine diphté-
rique, au voisinage du début, nous n’avons jamais trouvé la réaction positive.
Sous la réserve des critiques que nous leur avons faites, et en leur donnant comme il convient le caractère de remarques s'appliquant à des recherches en cours,on peut admettre ces conclusions.
