PREMIERE METHODE

Principe:

Nous réalisons une culture à 37° de B. subtilis sur un milieu spécial gélosé. Le B. subtilis en plein développement à la surface du milieu coulé en culot dans les tubes à hémolyse est recouvert par la solution de l’Antibiotique en expérience et mis à l’étuve à 37° pendant 6 heures. En présence de substances actives, le développement du B. subtilis est plus ou moins entravé, ou inhibé, tandis que des solutions inefficaces permettent la croissance normale de l’organisme.

Pour contrôler ce développement, ou la bactériostase, on emploie du Chlorure de 2, 3, 5, triphényltétrazole (25) colorant incolore qui, en présence de cellules en prolifération, est réduit en Triphénylformazane de teinte rouge foncé.

Choix de la Bactérie-test:

La bactérie-test que nous employons de préférence dans nos essais est le Bacillus subtilis. Comme nous l’avons dit, cette bactérie a déjà été employé par AHERWOOD, FALCO et DE BEER dans leur méthode de diffusion et par FOSTER et WoopRuUFF dans un procédé s'adressant aux tubes en verre de HEATLEY.

Le B. subtilis présente l’avantage de ne pas être pathogène et le manipulateur inexpérimenté ou maladroit se trouve naturellement à l’abri de toute infection.

RTE

D'autre part certaines souches de cette Bactérie sont sensibles aux différents Antibiotiques que l’on trouve actuellement dans le commerce, tels que la Pénicilline, la Terramycine, l’Auréomycine, la Chloromycétine, la Streptomycine, la Tyrothrycine.

Un autre avantage que présente cette Bactérie est de pousser très facilement sur les différents milieux usuels. De plus il est facile de l’isoler à partir d’une macération de foin de 24 heures.

Le B. subtilis est Gram +.

Il présente dans les cultures Âgées des spores centrales ou subterminales. Par ces spores il est capable de résister pendant 10 minutes à la température de 100° et on peut ainsi éliminer toutes les autres bactéries asporulées de surinfection pullulant dans l’air et dans le matériel de laboratoire.

Le B. subtilis, bactérie très résistante, non pathogène, facilement cultivable, est donc très indiqué pour être utilisé comme bactérie-test. (

Cependant, nous avons également fait différents essais de dosage en employant une souche de Staphylocoque doré pénicillino-sensible et nous nous sommes rendu compte que ce dernier pouvait tout aussi bien être utilisé comme bactérie-test dans la méthode que nous nous proposons de décrire.

Choix du milieu de culture:

Quoique la Bactérie envisagée pousse bien sur les différents milieux usuels, nous nous sommes efforcé de choisir un milieu donnant une culture particulièrement luxuriante, afin de réduire le plus possible le temps de l'expérience et d'obtenir des résultats aussi satisfaisants que possible.

Le milieu gélosé ordinaire n’a pas paru devoir retenir notre attention. Le B. subtilis s’y développe pourtant abondamment. Nous avons préféré utiliser des milieux enrichis afin d’obtenir l’optimum cultural au point de vue vitesse de croissance et poids de récolte.

Nous avons tout d’abord employé le milieu suivant:

COlOSE RAT RE sure a due te ee 9 gr.

NRC EEE PEN CENTS RER ere 2 gr.

Bxtraltidemviandente he. Leur 2 gr.

BeD ODA RARES CEE Se, 9 gr.

GiuCOsSER TL RER LENS ne os lSgr.

PAUSE RE CIO -Hasidpu:s 1000 cc.

Ajuster à pH 7.

Nous nous sommes aperçu au cours de nos recherches qu’un milieu contenant de lAutolysat de levure était particulièrement favorable à la culture de la Bactérie envisagée.