DOSAGE DE L’AZOTE

Au cours de nos recherches nous avons effectué quelques dosages de N en appliquant la méthode de Kjeldahl adaptée à des semi-microdéterminations (116).

On opère sur 2 cc. de liquide à doser et la titration finale a lieu avec des solutions d’acide sulfurique et de soude n/70. Un cc. de cette solution d’acide sulfurique correspond à 0,2 mg. de N.

DOSAGE DU GLUTATHION

Pour le dosage du glutathion nous nous sommes servis de la méthode de Binet et Weller (117) que nous avons adaptée aux dosages dans les levures.

La première opération concerne la préparation des ex-

(*) La modification apportée par Foster (115) pour le dosage du C1 dans le sang, qui consiste dans la précipitation des matières proétiques par l'acide métaphosphorique, ne nous a pas donné de bons résultats,

traits. Dans ce but on emploie l’acide trichloracétique à 10 % qui coagule les matières protéiques en même temps qu’il dissout le glutathion. La solution obtenue ne doit pas être abandonnée plus d’une heure, car il y a une légère baisse de glutathion avec le temps. Dans ces extraits acides on précipite le glutathion. A cet effet, les auteurs se sont servis du lactate de Cd qui précipite quantitativement et à peu près spécifiquement le glutathion entre pH 6,2 et 7. Mais ces limites absolument strictes sont heureusement faciles à réaliser par une neutralisation avec de la soude très étendue jusqu’à coloration bleuâtre du bleu de bromothymol. Si la limite vers l’alcalinité est dépassée, le glutathion s’oxyde instantanément et ne précipite plus. Le précipité obtenu se conserve longtemps à l’abri de la lumière. Ce n’est que le glutathion réduit qui précipite avec le lactate; il s’agit alors de réduire le glutathion oxydé avant la précipitation.

Le réducteur employé est le cyanure de Na ou de K ou bien le cyanure double de K et de Cd. Toutes ces substances présentent l’avantage de réduire intégralement en solution alcaline le disulfure en thiol et de ne pas gêner ensuite la précipitation élective du glutathion par le lactate de Cd.

La réaction serait la suivante :

GSSG + CNK + H,0 —= 2 GSH + CNOK

Mauthner (118) qui a découvert la réduction des RSSR par les cyanures explique la réaction de la manière suivante :

RSSR + CNK — RSK + RSCN Binet et Weller pensent que ces produits ne sont que

l’aboutissement lointain d’une réaction secondaire que voici: 2 GSH + CNOK = GSH + GSCN + KOH