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gélosé préparé à froid. À une partie de gélose concentrée (gélose, 50 gr. et eau, 1.000 gr.) nous ajoutions, avant qu’elle fût prise, deux parties de bouillon sérum. Sur ce milieu solide, nous avions obtenu les premières colonies de péripneumonie; mais les résultats étaient inconstants et dépendaient du mélange plus ou moins homogène du bouillon sérum et de la gélose.

De plus, ce milieu était trouble, et il était difficile d’apercevoir, à travers cette gelée non translucide les très fines colonies qu'y donnait la sérosité ensemencée.

Mais, au cours de notre étude à ce sujet, nous avons reconnu que le bouillon peptonisé, préparé suivant la méthode du docteur L. Martin, pouvait être chauffé à 115°, sans perdre de sa valeur nutritive pour le microbe de la péripneumonie.

Voici la préparation du milieu gélosé qui nous a donné les meilleurs résultats pour la culture de ce microbe :

Le bouillon peptonisé esl additionné de 15 grammes de gélose par litre, chauffé à l’autoclave à 115°, filtré, réparti en tubes et incliné; c'est le procédé employé dans les laboratoires pour faire la gélose nutrilive.

Lorsque la gélose est bien adhérente au verre, on retire, au moyen d’une pipelte, l'eau de condensation rassemblée dans le fond du tube, et on la remplace par 1/2 ec. environ de serum normal filtré.

Les tubes sont ensuite inclinés pendant vingt-quatre heures, afin que le sérum s'étale à la surface du milieu solide et imbibe la gélose.

Éprouvés à l'étuve, ils sont prêts à être ensemencés. Cette gélose nutritive est aussi transparente que de la gélatine, et permet d'observer à la loupe et aux faibles grossissements du microscope les colonies qui s’y sont développées.

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Caractères de la culture en bouillon sérum. — Pour obtenir une culture primitive de péripneumonie, il n’est pas besoin de se servir d’un passage en sac de collodion; il suffit d’ensemencer, avec une trace de sérosité recueillie purement un tube de bouillon sérum.

A près un séjour de deux à trois jours dans l’étuve à + 37°, on remarque que le bouillon, limpide au début, est devenu légèrement opalin. Cette opalescence peut même passer inaperçue, si l’on n’a pas pris le soin de placer à l’étuve un tube de bouillon-sérum témoin.

Pour déterminer le début et les progrès de l’opalescence, qui ést la seule preuve de la présence du microbe dans le milieu liquide, il est nécessaire d’user d’un procédé permettant de déceler de bonne heure les modifications de la transparence du bouillon. Au moyen d’un écran percé d’un trou, placé entre une source lumineuse et letube de culture, nous faisons traverser le milieu liquide par un faisceau lumineux qui rend perceptible les moindres différences dans la limpidité du bouillon. En agitant le tube, on met en évidence des ondes soyeuses que lon ne pouvait voir à la lumière diffuse.

C’est, en somme, le même phénomène que l’on observe quand un rayon solaire pénètre dans une chambre obscure et rend visibles les poussières en suspension dans l'air qui nous semblait, à la lumière diffuse, d’une transparence parfaite. Dès que le bouillon, qui, avant l’ensemencement, était optiquement pur, se transforme par suite de la multiplication du microbe en une très fine émulsion bactérienne, il devient opalescent, par suite de la réflexion de la lumière sur cette myriade de microbes en suspension dans le liquide.

Examinons maintenantau microscope ce bouillon opalin en goutte suspendue ou mieux encore sous une lamelle.

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Les plus forls grossissements (1.500 et 2.000 diamètres) ne nous permettent d’y déceler que de très fines granu- Jations mobiles, agitant par contact les particules albumineuses en suspension dans le bouillon.

Dans une préparation faite avec une goutte du tube témoiu, les mêmes particules sont animées d’un mouvement brownien, mais ce mouvement est moins étendu que celui observé dans l’examen de la culture.

Caractères de la culture en milieu solide. — Si l'on étale à la surface d'un tube de gélose sérum tel que nous l’avons préparé plus haut une goutte de sérosilé péripneumonique ou de bouillon opalescent, nous obtiendrons,après trois ou quatre jours d’étuve, des colonies microbiennes tellement fines qu’on ne peut les distinguer qu’à la loupe et à jour frisant. Mais, pour déterminer leur forme et leurs caractères, mieux vaut les examiner sur la platine du microscope à un faible grossissement.

De cette façon, on aperçoit à travers la gélose de très petiles colonies, réfringentes, transparentes, comparables à des gouttelettes de rosée, rarement confluentes et dont le diamètre mesure environ 0"*2,

À partir du cinquième jour de la cullure, les colonies prennent une forme caractéristique. Au centre apparaît une zonc bien délimitée, ronde, mesurant 0""2 de diamètre, granuleuse et de couleur brunâtre, se présentant sous la forme d’un mamelon opaque au milieu de la colonie. Cette partie centrale conserve ses dimensions primitives alors que la colonie s'étend sur la gélose et peut atteindre jusqu'à 1 millimètre de diamètre.

Ces caractères se conservent même dans les cultures plus à

gées : les colonies sont seulement blanchâtres à l’œil

nu et deviennent granuleuses si on les observe à un faible grossissement.

Dans les premiers jours de la culture, elles sont rarement confluentes ; puis peu à peu la zone transparente périmamelonnaire s'agrandit et rejoint les colonies voisines ; aussi n’est-il pas rare de voir de grandes colonies à bords festonnés au centre desquelles se trouvent plusieurs mamelons brunâtres qui ne sont autres que les origines des colonies primitives qui se sont confondues.

Quand on passe à la surface de cette culture sur gélose un fil de platine ou une tige de verre pour faire, un ensemencement ou une préparation, les colonies restent intactes. Elles sont en effet incrustées dans la gélose ; le mamelon central ne fait pas saillie à la surface, mais pénètre au contraire dans le substratum nutritif et l’on ne peut mieux comparer ces colonies de péripneumonie qu'aux clous appelés punaises dont se servent les dessinateurs.

Le fil de platine n’a touché que la mince pellicule microbienne étalée sur la surface de gélose sans désorganiser le contour de la colonie, et a pris suffisamment de germes pour faire un nouvel ensemencement surun tube de gélose sérum où apparaîtront après trois Jours les mêmes petiles colonies mamelonnées.

Essais de coloration. — Quand, après avoir desséché sur une lame une goutte du bouillon où s’est faite une culture de périprneumonie, on colore cette préparation par une couleur basique d’aniline, on ne voit qu’un fin précipité et quelques particules albumineuses colorées que d’ailleurs on trouve dans une préparation identique faite avec une goutte de bouillon témoin.

Ce précipité est dû, en grande partie, au sérum contenu dans le milieu nutritif.