II. — Procédé d'étude in vitro

L'étude in vitro d'un tissu se heurte de suite à des difficultés extrêmes. Il faut trouver pour lui l'analogue du bouillon de culture que les bactériologistes possèdent pour les microbes. Et encore, on ne peut songer à cultiver ce tissu, mais simplement à le placer dans des conditions telles qu'il ne puisse subir de ce fait aucune altération. Or, tout élément cellulaire, en dehors de l'organisme auquel il appartient, dégénère rapidement, la cellule rénale plus que tout autre, comme nous le verrons plus loin. Il était de toute nécessité d'arriver à conserver intact in vitro ce parenchyme glandulaire, un temps relativement assez long (une demi-heure à trois quarts d'heure) pour étudier sur lui l'effet de divers agents.

Il est un tissu merveilleusement disposé pour l'étude in vitro : le sang. On peut, en effet, maintenir intacts les globules en dehors de l'organisme, même pendant un temps assez long : il

suffit de les faire baigner dans un liquide salé de formule connue. Mais le sang est le seul tissu se prêtant aussi facilement à pareil examen, car ses éléments sont dissociés.

Nous avons cependant cherché à obtenir un liquide réno-conservaleur et nous y sommes arrivé. L'emploi usuel des solutions de chlorure de sodium pour l'étude de l'hémolyse, nous a fait choisir une dissolution de ce sel pour notre milien d'étude. On pouvait opérer de deux façons : soit en obtenant des cellules rénales par raclage et en les soumettant à l'action de diverses solutions de NaCl ; soit en mettant en contact avec l'eau salée de petits fragments de substance rénale. Nous avons essayé ces deux procédés ; mais nous rejetons absolument le premier, qui a sans doute le mérite d'être le plus simple, mais qui, en revanche, a le grave inconvénient d'être trop grossier, car on obtient indistinctement par le raclage aussi bien les épithéliums des tubes droits que ceux des tubes contournés, et, comme on ne peut pas suffisamment les différencier, il est impossible de démêler l'action, sur chacun d'entre eux, des différents corps toxiques employés.

Nous avons donc donné la préférence au second procédé, qui est beaucoup plus scientifique, mais qui est d'une exécution délicate, quoiqu'il paraisse simple à priori. Il suffit théoriquement, en effet, de placer les fragments de rein dans une solution saline titrée renfermant l'agent toxique et d'étudier ensuite, après fixation sur les coupes, les altérations fines qu'ils peuvent présenter.

Il nous a fallu une longue série de tâtonnements avant d'arriver à l'obtention d'une solution réno-conservatrice idéale. Et c'est au cours de ces travaux, que nous avons pu étudier, comme nous le verrons plus loin, l'action osmonocive du chlorure de sodium sur l'épithélium rénal. Contentons-nous de dire ici que le liquide réno-conservateur est représenté par une solution de NaCl dans l'eau distillée dont le point de congélation est A = — 0°, 78.

procédé d'étude in vrrno 59

Ce point cryoscopique correspond à peu près à une solution de 12 gr. 5 de NaCl dans 1.000 centimètres cubes d'eau distillée. Mais il ne faut pas se contenter de ce poids approximatif, et il est nécessaire, pour chaque solution en expérience, de prendre le point cryoscopique; la moindre évaporation, une erreur de poids semblant minime peut fausser en réalité les résultats en modifiant le point cryoscopique.

Le liquide réno-conservateur obtenu, on le met à l'étuve à 37°; lorsqu'il a acquis la température de l'étuve, on plonge dedans les petits cubes de reins, de 1 à 2 millimètres d'épaisseur, appartenant à des animaux préalablement saignés a blanc par section des carotides, et reconnus non albuminuriques; on laisse les morceaux dans le liquide une demi-heure, trois quarts d'heure, parfois plus longtemps, mais dans ce cas la conservation du tissu n'est plus parfaite. Puis les pièces sont mises dans le liquide fixateur de van Gehuchten et incluses avec notre technique habituelle.

L'étude in vitro, sur le rein, des substances toxiques peut se présenter dans deux conditions :

1° On peut rechercher l'action in vitro d'un sel soluble. Dans ce cas, il suffit de mettre dans de l'eau distillée autant de gouttes que l'on veut du toxique et d'ajouter la quantité nécessaire de NaClpour que la solution ait A = — 0°,78 ;

2° D'autres fois, V agent toxique à examiner est du sérum, du liquide amniotique ; il suffira de ramener l'un ou l'autre à A = — 0°,78 par addition de quelques gouttes de NaCl.

Ces manipulations sont malheureusement longues et délicates; mais elles nous ont donné toujours des résultats très satisfaisants.

§ 2. — Action du chlorure de sodium sur le tube contourné.

La question de la toxicité pour le rein du chlorure de sodium était fort importante à résoudre, étant donné les travaux récents de MM. Achard et Widal et de leurs élèves au sujet de l'influence de la rétention des chlorures sur la pathogénie de l'œdème. Il était intéressant de soumettre à l'expérimentation ce problème d'ordre biologique et histologique et d'exposer les conclusions de physiologie tant normale que pathologique qu'on pourrait tirer des résultats acquis par l'expérimentation.