FORMOL. ACIDE PICRIQUE. SUBLIMÉ

entre elles, de telle sorte que le tube semble rempli par une masse de protoplasma granuleux non différencié en cellules et parsemé de noyaux assez bien colorés. On ne retrouve pas de bordure en brosse (Voir fig. 1).

Y? alcool nitrique a été essayé comme fixateur, à divers titres de concentration. Les cellules des tubes contournés sont un peu

Fig. i. — Fixation défectueuse par l'alcool absolu.

mieuxfîxées, mais elles sont toujours altérées dans le même sens.

Le formol. — Le formol employé à 10 p. 100, à 5 p. 100 et à 1 p. 100 (de la solution du commerce) donne de mauvaises fixations. On ne constate pas de bordure en brosse ; la plupart des cellules sont desquamées et très abrasées, ne formant plus qu'un magma qui renferme le noyau (Voir fig. 2).

L'acide picrique.— L'acide picrique fut employé sous diverses formes: acide picro-sulfurique (liquide de Kleinenbery), acide picro-nitrique (liquide de Mayer) et surtout liquide de Bouin (formol, acide acétique, acide picrique, sublimé) qui est un bon fixateur pour différents tissus ; les résultats obtenus furent assez semblables à ceux donnés par le formol.

Le sublimé. — Le sublimé est avec raison considéré généralement comme un excellent fixateur des divers tissus.

tL TECHNIQUE HISTOLOGIQUE

Le sublimé acétique donne des cellules desquamées ou abrasées sans bordure ou brosse (Figures analogues à la figure 2).

Le liquide de Zenker fut expérimenté un très grand nombre de fois par nous, parce que nous en attendions de très bons résultats. Nous employâmes d'abord la méthode classique donnée par Henneguy. Puis nous avons essayé le mélange usité dans le laboratoire de M . Retterer, dont nous avons suivi absolument la

Fig. 2. — Fixation défectueuse par le formol.

technique, qui nous avait été très obligeamment exposée par M. Branca : « Saturer à chaud 100 centimètres cubes de liquide de Muller avec du sublimé, refroidir, décanter et ajouter 5 ou 3 ou 2 p. 100 d'acide acétique. On met les pièces dans ce mélange a l'étuve à 30° pendant 7 à 8 heures, ou bien seulement h heures dans le mélange complet et 18 à 20 heures dans le liquide de Zenker non acidifié ». Nous avons utilisé cette méthode avec toutes ses variantes. Les résultats furent médiocres dans leur ensemble. Tous les points de la coupe ne sont pas également mal fixés, mais nous n'avons, dans aucun cas, pu obtenir des préparations qui dans leur totalité présentassent des épithéliums que l'on

ACIDE OSMIQUE l5

puisse considérer comme normaux. Dans la plupart des cas, on trouve des cellules desquamées, n'étant plus représentées que par leur noyau et la partie sous-nucléaire du protoplasma.

Dans certains tubes môme, le noyau a disparu, et la cellule n'existe plus que sous la forme d'une mince bordure granuleuse. Lorsquele noyau est conservé, ce qui est fréquent, il semble contenu dans un espace vésiculeux clair, les granulations protoplasmiques ayant disparu autour de lui. Dans beaucoup de cellules enfin, on constate l'état spécial décrit sous le nom d'altération vésiculaire, ou d'altération vacuolaire ; nous reviendrons plus loin sur ce fait. La lumière des tubes est envahie, dans le plus grand nombre de cas, par des débris cellulaires et quelquefois par des boules sarcodiques ; on ne trouve pas de bordure en brosse. Seuls, les épithéliums des tubes droits sont bien fixés.

L'acide osmique. — L'acide osmique a été employé seul à 1 p. 100 en laissant les pièces un temps variable (20 minutes, 3 heures, 16 heures) ou associé : mélange à parties égales de liquide de Muller et d'acide osmique à 1 p. 100. Le liquide de Flemming fut maintes fois expérimenté, soit sous forme de réactif fort, soit sous forme de réactif faible, en faisant varier la durée de séjour des pièces et en prenant toujours des morceaux de minime épaisseur. Il en fut de même du liquide d'Hermann (platino-chromo-acéto-osmique) et du liquide de Podwijsowski (sublimé chromo-acéto-osmique). Tous ces fixateurs ont donné des résultats assez comparables . entre eux, quoique cependant certains mélanges soient plus recommandables (Podwysowski, Flemming fort) ; ce que l'on peut relever en faveur de ces fixateurs, c'est que le noyau est extrêmement bien différencié et qu'on peut étudier tous les détails de sa structure.

Dans les préparations les meilleures, les cellules ont conservé du moins en grande majorité, outre leur forme générale et leur dimension, leur bordure en brosse, qui est visible, mais ne forme

t6 technique histologique

pas uq revêtement continu à la surface interne des tubes ; elle manque en certains points, où le protoplasma a tendance à émettre des boules sarcodiques.

Le protoplasma n'est pas d'aspect uniforme dans toute la cellule ; certaines portions sont plus claires, les granulations ayant été comme exprimées à l'intérieur de la lumière qu'elles remplissent. Cette absence de granulation laisse voir dans

Fig. 3. — Altérations artificielles du tube contourné provoquées par une mauvaise fixation au Flemming.

toute sa netteté un fin réseau qui, à notre avis, fait bien partie constituante de la cellule, comme Ta montré Théohari (7). Mais, à l'encontre de cet auteur, nous ne pensons pas qu'il soit visible dans la cellule normale, où il est caché par les granulations. Lorsque par un artifice de préparation (liquide de Flemming, par exemple) ou par suite de lésion pathologique (comme nous le verrons plus loin) les granulations ont disparu, il apparaît alors dans toute sa netteté.

Dans les préparations plus mauvaises (Voir fig. 3), nous trouvons, comme dans celles obtenues par le Zenker, des altérations répondant assez bien à ce que les classiques décrivent sous le nom d'état vacuolaire des cellules. Celles-ci présentent des

ÉTAT VACUOLAIKi: 17

centres en relief, clairs et vides, ou contenant au contraire une substance légèrement teintée ou grenue. Le bord cellulaire, soulevé du côté de la lumière du tube par cette distension, n'est formé que par un mince liséré de protoplasma qui peut se rompre, et les cavités creusées dans les cellules s'ouvrent directement dans la lumière des canaux contournés. Or, il ne saurait s'agir d'altérations morbides de l'épithélium puisque nous les avons retrouvées dans de nombreux reins d'animaux sains alors que la fixation était mauvaise. C'est bien aussi l'opinion de Renaut et de son élève Hortolès, qui admettent que les cellules des tubuli contorti sont contractiles et que le protoplasma, sous l'influence de certains réactifs, revient sur lui-même et laisse échapper une certaine partie de son contenu sous forme de gouttelettes liquides, ce qui produit une vacuole dans la cellule.

Cornil et Brault admettent bien que l'état vacuolaire peut reconnaître ce mode de production, mais ils croient que certaines lésions pathologiques affectent aussi cet aspect ; ils se basent, pour soutenir cette opinion, sur le fait suivant : que sur le rein de l'homme mort depuis 2Zi ou 36 heures, quel que soit le réactif employé, on ne peut produire l'état vacuolaire ou même vésiculeux.

Cette constatation est très exacte, et cela tient à ce que l'altération vacuolaire ne se produit que sur des cellules contractiles, c'est-à-dire encore vivantes. Lorsqu'on fait l'autopsie th ou 36 heures après la mort, les cellules ont déjà depuis longtemps subi l'altération cadavérique; sur certains reins, c'est la desquamation cellulaire simple qui s'est produite; chez d'autres, c'est l'abrasement de toute la portion sus-nucléaire ; chez d'autres enfin, c'est l'état vacuolaire avec expulsion de boules sarcodiques. A ce moment, les réactifs ne sont plus capables de produire cette altération, si elle n'existait déjà; mais, sur le rein frais encore vivant, tel qu'il faut le prendre pour une bonne méthode expérimentale, la mauvaise fixation peut provo-

RATHERY

l8 TECHNIQUE HISTOLOGIQUE

quer l'altération vacuolaire. Ce que nous pouvons dire enfin au sujet de cet aspect spécial de la cellule, c'est que nous l'avons trouvé fréquemment sur nos reins normaux mal fixés et recueillis après la mort de l'animal ; jamais nous ne l'avons noté dans les reins même très lésés, si la fixation était bonne. Nous verrons plus loin qu'il existe bien une altération vésiculeuse du tube contourné, mais dans ce cas la bordure en brosse persiste et les cavités creusées dans la cellule ne viennent pas s'ouvrir dans la lumière des canaux. C'est sous cette forme que nous acceptons les conclusions de Cornil et de Brault.

Conclusions. — L'emploi des différents fixateurs que nous venons d'énumérerne nous a donc pas donné de bons résultats. Ce fait est du reste en concordance absolue avec les travaux de Renaut et ses élèves Regaud et Barjon d'une part, avec ceux de Sauer d'autre part. Ce dernier a fait une étude complète de la structure normale du tube contourné du rein (1). 11 a trouvé, comme nous avons pu le vérifier après lui, que les cellules des tubes contournés sont extrêmement difficiles à fixer, à l'encontre des autres épithéliums du rein qui sont en général bien fixés par presque tous les réactifs. La différence de ces résultats tiendrait pour lui à une composition chimique différente du protoplasma cellulaire. Fischer (8) a décrit l'aspect variable que pouvait prendre un même protoplasma sous l'influence de divers réactifs et même avec le même réactif employé à des degrés de dilutions différentes. Le liquide fixateur est en rapport avec le suc du tissu cellulaire : aussi survient-il des altérations à la suite des diverses tensions endosmotiques. Des gouttes albumineuses sortent de la cellule dans la lumière des canaux. On peut facilement s'en rendre compte, en laissant couler les liquides fixateurs sur des morceaux de tissus sains et en suivant le phénomène sous le microscope. On voit alors la cellule se gonfler, briser la bordure en brosse qu'elle commence par soulever, envoyer dans la lumière du tube des prolongements pseudopodiques, qui finissent