TECHNIQUE GÉNÉRALE. FIXATION

par s'isoler et constituer ces boules regardées encore par bien des auteurs comme un produit direct de la sécrétion cellulaire.

Il suffit, pour réfuter cette opinion, d'étudier une coupe de rein bien fixé, on ne retrouve plus nulle part ces boules sarcodiques.

§2. — Description de la technique générale (Méthode de fixation, d'inclusion et de coloration).

Un seul procédé de fixation nous a donné des résultats toujours constants et satisfaisants. C'est la méthode préconisée par van Gehuchten et modifiée par Sauer (1). Nous l'avons employée avec diverses variantes, et c'est après des essais multiples, des tâtonnements souvent laborieux que nous nous en sommes tenu à la technique suivante. Cette technique doit être suivie àla lettre, chacun de ses temps a été établi par nous minutieusement, et le moindre écart occasionne des mécomptes graves.

1° Fixation. — Les morceaux à fixer doivent être petits et très peu épais, 1 à 3 millimètres d'épaisseur, sur k à 5 de surface ; ils seront prélevés au moyen d'un rasoir coupant parfaitement et il ne faut les toucher ni avec les doigts, ni avec des pinces ; la série des manipulations se fera autant que possible dans le même flacon. Le rein doit être séparé de sa capsule, qui nuit à la pénétration du fixateur. On laissera les morceaux trois heures et demie dans le mélange suivant :

Alcool absolu 60 grammes

Uiloroforme chimiquement pur 30 —

Acide acétique glacial 10 —

On les mettra ensuite dans l'alcool absolu directement, où ils séjourneront 12 heures.

Il est bon d'ajouter dès maintenant qu'à la suite de recherches sur l'action différente sur le rein des solutions de chlorure de

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sodium à divers degrés de concentration, dont nous parlerons longuement dans le 4e chapitre, nous avons obtenu des préparations encore plus belles en opérant de la façon suivante (technique que nous avons dès lors constamment suivie). Les pièces, avant d'être mises dans le liquide fixateur, sont plongées à l'étuve à 37° maintenue pendant une demi-heure ou trois quarts d'heure dans une solution de chlorure de sodium à A = — 0,78. Cette solution avait été mise au préalable dans l'étuve à 37° un temps suffisant pour qu'elle prenne la température ambiante de l'étuve.

2° Inclusion. — Le procédé de fixation n'est pas le seul important pour l'obtention de coupes parfaites ; les pièces peuvent en effet se léser, comme nous avons pu maintes fois le constater dans la suite des diverses manipulations ayant pour but l'inclusion, le montage des coupes, la coloration.

Ayant à étudier de très fines lésions protoplasmiques, obligé de nous servir de coupes très minces devant être étudiées, si la chose est nécessaire, à l'objectif à immersion, nous avons presque toujours employé l'inclusion à la paraffine. Or celle-ci doit être pratiquée très soigneusement. Après de multiples essais, nous' nous sommes arrêté à la technique suivante, que nous résumons dans le tableau ci-contre :

Mélange de xylol 1 partie et d'alcool absolu 3 parties 1 h.

— 2 parties — 2 parties .... 1 h.

— 3 parties — 1 partie 1 h.

Xylol pur (à l'étuve à 37°) 3/4 d'heure à 1 h.

Mélange de xylol 3 parties et de paraffine fusible à 40° (étuve à 37°) 1 h.

— 2 parties — 2 parties — 2 h.

— 1 partie — 3 parties (étuve à 42°) 2 h.

Paraffine fusible à 40° (étuve à 45-46°) 5 h.

Paraffine fusible à 54° (étuve à 56-58°) 2 h.

Inclusion en ayant soin de laisser le refroidissement se faire de lui-même.

3° Montage des loupes. — Les pièces, le lendemain ou le sur-