DIXIEME LEÇON

( 11 ianvioi- 1879) Cbnrpenle eonneetivo de In cornée.

Différences de la membrane basale antérieure et de la membrane basale postérieure.

Signification morphologique de la membrane basale antérieure, des fibres qui en partent des couches interlamellaires et des fibres intralamellaircs. — Ces parties correspondent à l'enveloppe extérieure des faisceaux du tissu connectif, aux cloisons et aux fibres intérieures, aux fibres annulaires et spirales. — Importance de celte analogie morphologique pour les autres membranes conneclives.

CelliiloK eonneetîveK tlo la cornée.

Difficultés lie leur observation sur la cornée à l'état frais. — Leur étude sur des coupes après dessiccation, colorées par le picrocarminatc. — Fentes que l'on détermine dans ces préparations Interprétations que les auteurs en ont données. — Coupes parallèles à la surface. — Isolation des cellules par l'acide sulfurique. Perfectionnements apportés à ce procédé.

Messieurs,

Nous avons commencé dans la dernière leçon l'étude de la membrane basale antérieure chez l'homme. Vous avez vu que, sur une préparation faite par le plus simple des procédés, sur une coupe après dessiccation, la coloration par le carmin nous a permis de reconnaître que la membrane basale antérieure n'est pas de nature élastique, pas plus que les fibres qui en partent. Elle

IbH CHARPENTE CONNECTIVE DK L.\ CORNÉE.

nous a permis encore de distinguer, entre les laines de la cornée et dans leur épaisseur même, des fibres spéciales très réfringentes. Nous devrons tenir compte de tous ces éléments pour bien comprendre la charpente de la cornée et les analogies qu'elle présente avec le tissu connectif en général.

Avant d'aller plus loin, il faut que j'insiste sur un fait important : la coloration différente desdeux membranes basâtes par le picrocarminatc d'ammoniaque. L'antérieure, vous l'avez vu, se colore en rose, la postérieure en jaune orangé. Cette réaction n'est pas la seule qui distingue ces membranes l'une de l'autre. Elles diffèrent encore par la manière dont elles se comportent vis-àvis de l'acide osmique et vis-à-vis de l'hématoxyline.

J'ai disposé sous un de ces microscopes une coupe de la cornée du bœuf faite après dessiccation et qui, après avoir été ramollie dans l'eau, a été traitée par une solution d'acide osmique à 2 pour 100, puis lavée et montée dans de la glycérine additionnée d'acide formique. Vous pourrez constater que la membrane basale postérieure est brune, tandis que la membrane basale antérieure est incolore, de môme que les fibres de soutien, les lames de la cornée et les couches particulières qui les limitent.

Vous examinerez aussi une autre coupe, faite également après dessiccation, ramollie dans l'eau et traitée par la solution classique d'hématoxyline, puis lavée dans l'eau distillée et montée dans la glycérine additionnée d'acide formique. La membrane basale postérieure y est colorée en violet, tandis que l'antérieure est incolore.

MEMBRANK B.\SALK ANTÉRIEURE. i53

Cette préparation, je dois vous en avertir, ne se conservera pas; au bout de peu de jours elle sera décolorée. Je dois vous dire également, pour le cas où vous voudriez reproduire vous-même cette réaction, qu'il y a un degré précis décoloration qu'il ne faut pas dépasser. Si on laisse le réactif agir trop longtemps, les deux membranes paraissent également colorées. Ce fait n'infirme pas du tout nos conclusions. Il suffit qu'une des membranes basâtes se colore plus facilement que l'autre pour que nous soyons fondés à dire qu'elles n'ont pas toutes deux la même constitution.

En face de ces faits, on ne saurait plus soutenir, vous le voyez, qu'il existe une analogie complète entre la membrane basale antérieure et la membrane basale postérieure. Aussi la conception embryologique de Kessler (voy. p. 35), d'après laquelle elles dériveraien d'une même membrane primitive, devient-elle fort peu vraisemblable.

Je reviens maintenant à la préparation que vous avez examinée à la fin de la leçon dernière : coupe méridienne de la cornée faite après dessiccation, colorée par le picrocarminate et conservée dans la glycérine additionnée d'acide formique. Je laisse de côté, pour le moment, tout ce qui a trait aux cellules de la cornée et à leur rapport avec le tissu connectif, pour m'occuper exclusivement des parties de la charpente connective qui se sont colorées en rose par le carmin, c'est-à-dire les fibres de soutien, les couches minces qui se trouvent entre les lames, et les fibres spéciales qui sont re!î fermées dans l'épaisseur même des lames.

154 CHARPENTE CONXIiCTlVE 1)K LA COUNÉli.

Au sujet de ces dernières fibres, qui se mon lient suides coupes méridiennes comme des points réiVinf^ents colorés en rose, on peut faire trois hypothèses.

On pourrait supposer, en premier heu, ({ue ce sont des prolongements celhilaires sectionnés à une phis ou moins grande distance des cellules auxquelles ils appartiennent et qui auraient pénétré dans l'intérieur des lames. Nous savons en effet que les cellules fixes de la cornée possèdent des prolongements très nombreux, fréquemment ramifiés, par lescpiels elles s'anastomosent les unes avec les autres.

En second heu, on pourrait penser que ces fibres sont de nature nerveuse, puisque la cornée possède un grand nombre de nerfs. Cependant il serait peu pi'obable que des éléments aussi délicats que le sont les fibres nerveuses résistassent à la dessiccation et à l'action des acides, ou du moins, s'ils étaient conservés, ils devraient présenter des irrégularités, comme les acides en déterminent dans les nerfs. Or, les fibres en question sont au contraire parfaitement cylindriques.

Enfin, ces fibres pourraient être les analogues des fibres suturales de la cornée de la raie.

Vous verrez sous un de ces microscopes une coupe transversale d'une cornée du lapin colorée par la méthode de l'or suivant un procédé dont je vous indiquerai plus tard les détails. Les cellules, les prolongements cellulaires et les fibres nerveuses sont fortement colorés en violet. Les fibres dont nous nous occupons, au contraire, celles qui se colorent par le carmin, sont demeurées parfaitement incolores. Elles ne correspondent

COMPAUAISON AVEC LK TISSU CONJONCTIF. 155

donc ni cà des nerfs, ni à des prolongement cellulaires, et nous avons toutes raisons de les considérer convnie les analogues des tibres sulurales de la cornée de la raie.

Des difTérenls modes d'investigation que nous avons mis en œuvre il résulte que ces fibres, aussi bien les fibres suturâtes de la cornée de la raie que les fibres qui leur correspondent dans la cornée de l'homme et des mammifères, appartiennent bien à la charpente connective de celte membrane.

Mais, direz-vous, puisque ces fibres ne sont ni des fibres connectives (elles résistent aux acides), ni des fibres élastiques (elles se colorent en rouge par le carmin), quelle est donc leur nature ?

C'est là, messieurs, comme je vous l'ai fixit remarquer dans la dernière leçon, une question très importante au point de vue de la morphologie générale du tissu conjonctif. Pour vous le montrer, il me faudra reprendre d'un peu plus haut l'histoire de ce tissu.

Vous vous souvenez que Henle avait reconnu l'existence des faisceaux du tissu connectif (voy. p. 49). En les traitant par l'acide acétique, suivant l'usage universel de cette époque, il les vit se gonfler inégalement dans les différents points de leur longueur, et reconnut qu'entre les parties renflées ces faisceaux étaient bridés et retenus à leur diamètre normal par des fibres réfringentes qui ne se modifiaient pas sous l'influence de facide acétique.

11 donna à ces fibres, qu'il considérait comme des

loH CHARPENTR CONNECTIVK Dl-; I.A CORNÉE.

fibres de noyaux, le nom de fibres annulaires et défibres spirales, suivant la disposition qu'elles [affectaient nutour du faisceau connectif.

Beaucoup plus tard, je reconnus que ces fibres annulaires et spirales se colorent en rouge par le carmin, et qu'elles conservent môme cette coloration lorsqu'on les traite par l'acide acétique ou par l'acide formique. Ce fait était alors d'une certaine importance, car il servit à distinguer ces fibres des fibres élastiques avec lesquelles on l(?s avait confondues jusque-là.

Ayant soumis ensuite des coupes transversales de tendons à l'action successive du picrocarminate d'ammoniaque et de la glycérine additionnée d'acide formique, je remarquai que les cercles incolores correspondant à la section des faisceaux connectifs étaient entourés d'une bordure colorée en rouge, et je pensai que celte bordure était produite par une enveloppe spéciale. De cette enveloppe je vis partir vers l'intérieur des faisceaux des cloisons, et de ces cloisons des fibres, qui se coloraient également en rouge. Je pus reconn.aître enfin que les fibres annulaires et les fibres spirales ne sont autre chose que des fibres de renforcement de Tenveloppe des faisceaux connectifs.

Il existe donc autour de ces faisceaux une enveloppe que l'on pourrait nommer couche extérieure, et elle émet des cloisons et des fibres que je désignerai sous le nom de fibres intérieures.

Après avoir rappelé tous ces faits à votre souvenir, je n'aurai plus besoin de grands développements pour vous faire comprendre la signification morphologique

COMPARAISON AVEC LE TISSU CO>fJONCTIF. J 57

(les libres suturales de la cornée de la raie et des filtres analogues de la cornée des mammifères.

Qu'est-ce en elfet qu'une lame de la cornée? Elle correspond à un faisceau connectif ou à un faisceau tendineux très aplati. Nous ne devrons donc pas ôlre surpris d'y rencontrer la même disposition. Nous y trouvons en elfet une enveloppe extérieure : c'est cette couche rosée mince qui revêt chaque lame; puis des fibres intérieures, celles dont nous av(jns remarqué la section sous forme de points réfringents colorés en rose.

Nous avons vu que dans la cornée toutes les fibres roses ne sont pas dans l'épaisseur des lames; il s'en montre aussi dans les couches interlamellaires. Ces dernières doivent être considérées comme les analogues des fibres annulaires et des fibres spirales de Henle.

Revenons maintenant à la membrane basale antérieure. Nous savons que chez la raie les fibres suturales proviennent de celte membrane et doivent par conséquent avoir la môme constitution élémentaire.

Or, les fibres suturales sont l'équivalent, comme nous venons de le voir, des fibres spirales, des fibres annulaires et de l'enveloppe des faisceaux conneclifs. Cela est si vrai que, si l'on fait une coupe méridienne de la cornée de la raie au niveau de son union avec la sclérotique, on peut voir, après coloration par le carmin et traitement par l'acide formique, les fibres suturales de la cornée se transformer graduellement en fibres spirales et envelopper les faisceaux conneclifs de la zone fibreuse qui sépare la cornée de la sclérotique propre-

158 l'.liLI.UI.KS CO.NNI'CTlVliS I)K L.V COHNÉE.

meut dite cjui eslcarlilagineuse, liuulis que de leur colé ces faisceaux se continuent avec les lames de la cornée.

La conclusion qu'il faut tirei' de tous ces faits est celle-ci : la membrane basale antérieure doit être considérée comme un équivalent des fibres annulaires et spirales et de l'enveloppe des faisceaux connectifs. Ni l'une ni les autres ne sont de nature élastique, comme le montre leur coloration par le carmin, à laquelle on pourrait sans doute joindre d'autres réactions histochimiques si on les recherchait avec soin.

Nous voilà ainsi arrivés à la solution d'un problème dont on connaissait à peine les éléments. Ce progrès, dû surtout à l'excursion que nous avons faite dans le domaine de l'anatomie comparée, nous montre que, lorsque la structure d'un organe est difficile à comprendre, il peut être fort utile d'examiner des organes analogues pris à divers degrés de la série animale, et dans lesquels certains éléments mieux accusés nous éclaireront sur la signification de ceux que nous n'avions pas pu comprendre en les examinant seulement chez l'homme ou chez les mammifères.

Cellules confiée lires de la cornée.

Pour compléter l'analyse du tissu propre de la coinée, il nous reste à étudier les cellules qui y sont contenues.

Ces cellules sont do deux espèces parfaitement distinctes : les cellules connectives qui appartiennent spécialement au tissu cornéen, cellules fixes des Aile-

CELLULES CONNECTIVES. 159

mands; elles cellules lymphatiques qui s'y sont introduites, cellules migratrices de Recklinghausen.

Occupons-nous d'abord des premières. Dans la revue historique par la(|uelle j'ai commencé l'étude de la cornée, je vous ai dit que Toynbee les avait signalées le premier. Leurs noyaux cependant étaient déjà connus; ils avaient été décrits par Henle. Mais, par suite de ses théories particulières, cet auteur ne se décidait à admettre l'existence de cellules qu'à la dernière extrémité, et c'est pour cela que, tout en décrivant les noyaux, il n'avait pas remarqué ou du moins pas indiqué l'existence des cellules qui les renferment.

Au premier abord, la manière la plus simple d'observer les cellules de la cornée paraît être de choisir une cornée mince et de l'observer dans un état aussi voisin que possible de l'état vivant, c'est-à-dire immédiatement après l'avoir enlevée à l'animal et sans addition d'aucun réactif, ou bien simplement dans une goutte de l'humeur aqueuse du même animal. On suppose que c'est ainsi qu'on les verra le mieux dans leur forme normale. Aussi la plupart des auteurs conseillent-ils de procéder de la sorte et d'examiner tout d'abord les cellules dans une cornée à l'état frais.

Je suis d'une opinion diamétralement opposée. Comme j'ai déjà eu plusieurs fois l'occasion de vous le faire remarquer, il n'est pas d'observation plus difficile et plus délicate que celle d'un tissu à l'étal frais. Ses différentes parties constituantes, à peu d'exceptions près,- ne sont pas colorées et dès lors se distinguent mal, d'autant plus qu'elles ont généralement des indices de réfraction

K)U CI-LLLI.liS CONNKCTIVHS DE LA CORNÉE.

très voisins. 11 en est ainsi, et à plus forte raison, pour la cornée; non seulement tous ses élémenls sont incolores, mais ils ont en outre le même indice de réfraction et sont exactement appli(iués les uns sur les autres. Ces conditions, qui font la transparence de la membrane, sont aussi celles qui en rendent l'étude plus diliicile. Aussi dans une cornée à l'état frais les images des cellules sont-elles si confuses, qu'il faut les connaître déjà pour en distinguer la forme et même pour les apercevoir.

Vous savez, du reste, qu'à l'étal vivant bien des tissus ne laissent pas voir la forme ni même soupçonner l'existence de certaines de leurs parties constituantes. Il me suffira de vous rappeler, par exemple, que' dans les cellules lymphatiques, il est impossible d'apercevoir à l'état vivant le noyau qu'elles contiennent et qui devient apparent seulement après leur mort (j'en excepte les cellules lymphatiques des urodèles, de Taxolotl en particulier, dans lesquelles le noyau se reconnaît même pendant la vie). Dans la cornée observée à l'état frais, on voit vaguement les cellules, on ne reconnaît pas leurs limites et jamais on ne distingue leurs noyaux, pas plus chez l'axolotl que chez la grenouille et chez les mammifères.

Je vous conseillerai donc de commencer l'étude des cellules de la cornée par l'application de certains réactifs qui, soit en les colorant, soit en modifiant leui' réfringence, vous permettront de vous rendre compte de leur forme et de leur disposition.

Nous suivrons d'abord la méthode la plus ancienne

DIFFICULTÉS DE l'oBSERVATION A l'iiTAT VIVANT. 161

cl lii plus simple, qui consiste à pratiquer des coupes sur la cornée desséchée et à les ramollir dans l'eau. Seulement, au lieu de les examiner telles quelles ou de les traiter simplement par l'acide acétique, nous les colorerons au moyen du picrocarminale d'ammoniaque et nous les conserverons dans la glycérine pure, ou bien encore dans la glycérine additionnée d'acide formique qui gonflera un peu le tissu cornéen et rendra plus nettes quelques-unes de ses parties.

Étudions d'abord la cornée de l'homme et des mammifères sur des coupes perpendiculaires à la surface de

FiG. 14. — Coupe môriilicaiic du la cornue du bœuf, faite après dessiccation, léifèreincnt goiifloc par l'oau, fixu'e par l'acide osmique, colorée au picrocarminale d'amnioniaqiic et conservée dans la glycérine addit oiinée d'acide foriniquc.

celle membrane. Vous y avez déjà observé les lames cornéennes et le système de tentes qu'elles forment par leurs anastomoses. Vous avez dû remarquer, et vous constaterez de même aujourd'hui, que les cellules de la cornée se trouvent non pas à Tinlérieur des lames, mais

u\x\it;«. — Auat. fféiiéralc. ii. — 11

enlro celles-ci (fig. 14). Elles se montrent comme des taches rouges aplaties rappelant par leur forme la section d'une lentille; elles présentent une portion centrale plus fortement colorée qui correspond au noyau.

Pour aller plus loin dans cette étude, choisissons une préparation conservée dans la glycérine non acidiliée et comprimons-la en exerçant avec la pointe d'une aiguille une légère pression sur la lamelle de verre qui la recouvre. Nous voyons le tissu se dissocier et s'étaler. Comme la préparation est colorée, il est facile de reconnaître, même à l'œil nu, que des fentes se produisent entre les lames de la cornée. Mais, ainsi qu'on le constate à un faible grossissement, elles ne se manifestent pas en n'importe quel point ; elles commencent toujours au niveau d'une cellule fixe.

Il y a longtemps que l'on a observé ces fentes. Déjà Bowman les avait remarquées, et il croyait qu'elles correspondaient aux corneal tubes. C'est là une erreur, puisque les tubes de Bowman, comme je vous l'ai démontré, ne se produisent pas entre les lames au niveau des cellules, mais bien dans l'intérieur même de ces lames et suivant la direction de leurs fibres.

Henle (1) a décrit également ces fentes. Elles correspondraient, d'après lui, à des espaces lacunaires préexistant dans la cornée et seraient assez comparables aux capsules des cartilages. Il ajoute que, de môme que ces capsules, elles contiennent quelquefois des noyaux dans leur intérieur.

(I) Henle, Hamlbucli der xynlénUtlischen Analomic {Analomie sijslémallf/ue, t. Il, \>. 597).

OBSERVÉlîS SUR DES COUPES APRÈS DESSICCATION. 163

Schvvcia'uer-Seidel lit une observation plus exacte de ces fentes et de leur contenu. Il n'était pas possédé de la niénie idée préconçue que Henle à l'endroit des cellules; aussi distingua-t-il, outre les noyaux, les corps cellulaires auxquels ils appartiennent. Il les décrivit comme des cellules plates appliquées sur les lèvres de la fente. Il en vit aussi qui, au lieu d'être accolées à une des parois de la lacune dans laquelle elles étaient contenues, en occupaient le milieu et y étaient pour ainsi dire tendues par leur bord qui s'engageait entre les deux lames voisines.

Je vous ai dit tout à l'heure que certains détails ne s'observaient bien que sur les préparations conservées dans la glycérine additionnée d'acide formique. Sous rinfluence de cet acide, les lames se gonflent, et les libres intérieures, colorées en rose, se voient plus nettement, ainsi que les bandes interlamellaires.

Si nous traitons comme la précédente une préparation conservée dans la glycérine acidiliée, c'est-à-dire si nous exerçons avec la pointe d'une aiguille une légère pression sur la lamelle de verre qui la recouvre, nous y déterminerons également des fentes. Vous pourrez y reconnaître un premiei' fait intéressant : la couciie rouge comprise entre les deux lames qui s'écartent se sépare au niveau de la fente, comme une étofTe qui se dédouble. Ce dédoublement, ([ui n'est pas du tout une déchirure, suffit à montrer qu'il existe réellement entre les lames de la cornée une double couche qui se colore en rouge. Il suit de laque chaque lame de la cornée possède sur ses deux faces un revêtement pareih Ce fait

vient encore coiifirmei' l'analogie que nous avons cherché à établir entre ce revôlenient et l'enveloppe lies faisceaux ilu tissu connectif.

Si vous choisissez pour l'observer une fente suffisamment grande, vous ren)aniuerez que les cellules fixes l'estenl accolées les unes à sa lèvre antérieure, les autres à la j)ostérieuro Je relève ce fait, parce que Schweiggcr- Seidel avait soutenu qu'au niveau des fentes les cellules restent toujours fixées à la lame postérieure.

Je dois maintenant vous dire quelques mots des coupes de la cornée faites parallèlement à sa surface. li convient de choisir des cornées de grands animaux, celles du bœuf ou du cheval, qui conservent une épaisseur suffisante après la dessiccation.

On en prend un petit fragment. Pour l'inclure;, on choisit un bouchon de liège fin, sur l'une des faces duquel on pratique une petite logette exactement de la même forme et de la môme dimension que le fragment de cornée, et on l'y enfonce comme si on voulait l'y incruster. Il y est ainsi fixé suffisamment pour (ju'on puisse en faire des coupes. Ces coupes, après avoir été gonflées dans l'eau, sont colorées par le picrocarminate d'ammoniaque et conservées dans de la glycérine additionnée d'acide formiijue. Au début, elles sont rouges dans toutes leurs parties, mais bientôt la substance des lan:es se décolore et laisse voir nettement les cellule? et leurs noyaux. A un faible grossissement, ces cellules paraissent simplement étoilées, mais, avec un peu d'attention, on peut déjà y distinguer deux ordres de prolongements perpendiculaires les uns aux autres et se continuant sur

OBSliRVËliS SUR DES COUPKS APRl-S DESSICCATION. 165

le corps de la cellule par des stries qui ne sont autre chose que des crêtes d'empreinte.

On peut isoler ces cellules en employant le moyen indiqué par His, la macération dans l'acide sulfurique. C'est là un procédé si brutal, qu'à priori je n'aurais jamais cru qu'il pût donner de bons résultats. On fait un mélange à parties égales d'eau et d'acide sulfurique du commerce. Lorsqu'il est revenu à la température normale (après avoir perdu la chaleur produite par la combinaison chimi(iue), on y met à macérer, soit un fragment de la cornée, s'il s'agit de celle du bœuf, du cheval, du mouton, du lapin, soit une cornée tout entière du rat, de la souris ou de la grenouille.

Au boni de quelques heures, le tissu cornéen s'est notablement gonflé et est devenu gélatineux. En le retirant, non pas avec une pince que l'acide attaquerait, mais avec un fil ou une lame de platine, on s'aperçoit qu'il est entiè.ement ramolli. On le dépose sur une lame de verre et l'on recouvre d'une lamelle. La préparation montre de fort belles cellules fixes de la cornée • munies de prolongements libres ou anastomotiques. C'est la vue d'une préparation semblable à celle-ci qui coniirma His dans l'opinion que ces cellules étaient des corpuscules creux étoiles et anastomosés, en un mot des cellules plasmatiques. Il les avait observées sans doute avec un objectif insuftisant, car s'il les avait examinées dans de bonnes conditions, il aurait pu reconnaître que l'image qu'elles présentent n'est pas si simple qu'elle paraît au premier abord.

Avant d'entrer dans la description des détails qu'on

106 CliLLULES CONNEGTIVES DE LA CORNÉE

y remarque, je dois vous indiquer deux perfectionnements de la méthode de Ilis.

Le premier consiste à laver à l'eau distillée des lambeaux de cornée retirés de l'acide sulfurique ; ils deviennent opaques, mais conservent leur consistance molle. On y laisse tomber quelques gouttes d'une solution de sulfate de rosaniline dans l'eau distillée, puis on recouvre de la lamelle dont le poids suffît pour aplatir le tissu cornéen.

Le second perfectionnement permet d'obtenir les cellules isolées et colorées d'une façon persistante : un œil de grenouille est exposé pendant une demi-heure aux vapeurs d'acide osmique; la cornée est alors détachée, débarrassée de son épithélium antérieur par le raclage et mise dans un flacon contenant le mélange d'acide sulfurique et d'eau. Il faut l'y laisser environ vingt-quatre heures, parce que l'action dissolvante de l'acide est

moins rapide que sur la cornée fraîche. Dans les préparations qu'on en fait ensuite, les cellules colorées en brun par l'acide Fio. 15. - (iroupfi do coiiuics do la cor- osmiquo montrcut très net-

néo du It'Kiif, isoldfis aprts macération

dans un .iiélinigc ù parties égales d'ad.lo tCmCnt CCrtamS 06 ICUFS

sulfurique fit d'eau, et colori'es par le

sulfate de rosaniline. détailS dC StrUCturC.

Vous examinerez des préparations obtenues l'une par ce procédé, l'autre par celui que je vous ai indiqué immédiatement auparavant (fig. 15). Dans l'une et dans l'autre, vous pourrez observer des réseaux entiers de cellules anastomosées

ISOLÉES AU MOYEN DE l'aCIDE SULFURIQUE. 1()7

entre elles par des prolongements aplatis. Sur ces cellules vous reconnaîtrez des crêtes d'empreinte, dont les unes, situées sur un plan superficiel, sont perpendiculaires à un certain nombre d'autres, situées dans un plan plus profond.