CHAPITRE IV

Après avoir constaté que l’auto-agglutination des tréponèmes en milieu non syphilitique constituait, en réalité, une agglutination provoquée, due aux agglutinines entraînées avec la sérosité ou le fragment leucocytique prélevés sur les lésions, nous avons cherché à nous débarrasser de ces « agglutinines locales » par différents procédés.

Nous avons été, de ce fait, amené à noter quelques-unes de leurs propriétés.

Les résultats n'ont pas été complets ; nous n'avons pas atteint le but que nous nous proposions, c’est-à-dire d'éliminer les agglutinines locales dans

la séro-agglutination. La fragilité extrême du tréponème est telle que, quel- ques soient les manipulalions auxquelles il est soumis, 1l meurt aussitôt qu'est modifiée la constitution physique ou chimique de son milieu. Ce tréponème est alors inutilisable pour la séro-agglutination, puisque sa mobilité en est une condition indispensable.

A. — Caractères physiques.

S 1. Action de la chaleur. — Nous avons déjà dit (page 92) que le chauffage des sérums syphilitiques à la température de 56-58 n'altérait pas le pouvoir agglutinant de ceux-ci. Il résiste au chauffage et ne semble présenter aucune diminution de son activité.

Les agglutinines de la syphilis sont donc thermostabiles.

C'est d’ailleurs une des caractéristiques des agglutinines. Elles résistedt couramment à une température de 60°, pendant une demi-heure [Nicolle et Halipré (1)}}, ne diminuent notablement qu’à 65° [Nicolle (2)] et sont détruites

(1) Nicozce et HaLiPRÉ, Presse médicale, 25 juillet 1896. (2) Nicozze, Ann. de l'Inst. Pasleur, t. XVIII, 1904, n° 4, pp. 209-240.

autour de 70° (Nicolle) ou de 80° (Widal). Andrejew (1), Dudgeon et Wilson (2), admettent cependant-qu'un chauffage prolongé à 60° les atténue sensiblement.

En ce qui concerne les maladies voisines de la syphilis, Lavaditi (3} constate que le pouvoir agglutinant du sérum d'une poule guérie de spirillose est formé par une cytase thermolabile et une sensibilisatrice thermostabile.

Cette remarque donne à penser que le complément ou cytase intervient dans le phénomène de l’agglutination. C’est là une question indécise, mais il nous semble que nos sérums étant chauffés, ella quantité de complément que nous apportons avec le fragment leucocytique étant certainement très minime, le rôle du complément ne doit pas être très actif dans la réaction.

D'autre part, le fait d'ajouter une certaine quantité de complément par l'intermédiaire de sérums animaux (cobayes), ne modifie en rien l'intensité de l’agglutination, quand ces sérums ne sont pas par eux-mêmes nocifs pour

le tréponème.

S 2. Vieillissement. — Les sérums syphilitiques conservés à la glacière plus de 24 heures n’ont en général pas provoqué d’agglutination, l'anticorps doit être assez fragile et se détruire spontanément par vieillissement.

Cette notion est d’un certain intérêt pratique puisqu'elle s'oppose au transport des sérums à quelque distance. Il est indispensable de n'’utiliser que des sérums fraiset autantque possible prélevés le jour même del’examen.

$ 8. Dilution. — Nous n'avons encore que peu étudié la question importante de Îa puissance du pouvoir agglutinant, du taux de l’agglutination.

C’est que cette détermination est rendue très approximative par la nécessité d'introduire dans la préparation un fragment leucocytique plus ou moins volumineux et avec lui des agglutinines de lalmalade elle-même, tous inconvénients que supprimera l'usage de la culture pure, quand elle sera obtenue.

Pour évaluer l’activité de la réaction, il faut donc tenir compte d’au moins deux éléments: le sérum à examiner, la particule organique qui fournit les tréponèmes.

Nous avons fait quelques dilutions de sérums sains et syphilitiques au 1/10° et au 1/100° en ajoutant une solution de chlorure de sodium à 7,5 p. 1.000. Ces expériences sont trop peu nombreuses pour que nous en puis-

(1) ANDREJEW, Arb, a. d. kais. Gesundhts. Bd. XXXIII, 1910, p- 84. (2) Dupceon et WiLsow, Proced. of the Royal Society, v. LXXXII, 1909, p. 67. (3) L

} EVADITI, Ann. de l’Inst. Pasteur, t. XVIII, 1904, n° 3, pp. 129-149.

re

sions inférer autre chose que la dilution n’a aucune influence sur la mobilité des tréponèmes, mais que l'agglutination paraît très faible, avec un sérum

dilué au 1/10°, malgré que ce sérum soit auparavant moyennement agglu- {inant, |

D'autre part, si l’on cherche à mesurer le rapport du volume habituel du fragment leucocytique à celui de la goutte de sérum déposée sur la lame, on voit qu'il peut varier dans les limites de 1/100e à 4/400°; mais que le plus souvent il doit osciller autour de 1/200€. I1 va sans dire que le volume de ce fragment n’a que peu d'importance puisque son débit en tréponèmes varie éminemment d'un malade à l’autre, d'une lame à la suivante. Il existe enfin une disproportion énormeentre le nombre des tréponèmes et le volume du fragment qui les contient. Mais, nous le répétons, la quantité d’agglutinines locales que nous introduisons involontairement dans la préparation vient encore accentuer l’impossibilité où nous nous trouvons d'évaluer même approximativement le degré de dilution des tréponèmes, c’est-à-dire le taux de l’agglutination.

Nous avons essayé d’éliminer les agglutinines locales par dilution. Voici comment nous avons procédé : :

Dans une première série d'expériences, nous avons placé plusieurs fragments leucocytiques dans de petits tubes à essais contenant environ 3 centimètres cubes de sérum non syphilitique (artificiel ou humain). Ces fragments étaient repris à différents moments puis essayés au point de vue de leur richesse en tréponèmes. Mais ceux-ci s'étaient répandus, disséminés dans le liquide de telle sorte que leur densité était devenue trop faible pour permettre une agglutination.

Nous avons alors centrifugé des sérums non syphilitiques, dans lesquels des fragments organiques tréponémifères avaient été placés 20 ou 40 minutes auparavant. Cette centrifugation a duré 15 minutes. Avec le plus de soin possible, nous avons prélevé ensuite, à la pipette, du sérum centrifugé, à différents niveaux. La partie supérieure du liquide ne contenait qu’un très petil nombre de tréponèmes et très peu de granulations protéiques, les microbes étaient bien mobiles. Le nombre des tréponèmes allait en progressant jusqu’audessus du culot formé par les particules organiques, ainsi que celui des granulations protéiques; mais, même dans les parties les plus inférieures, on n’obtenait jamais plus de un à deux tréponèmes par champ, bien mobiles mais inutilisables, par leur faible abondance, pour une séro-agglutination. Il nous à donc été impossible, en lavant suffisamment les tréponèmes pour penser les débarrasser des agglutinines entrainées, de les retrouver assez nombreux à la fin de l'expérience pour permettre une agglutination.

Nous avons cependant cherché à utiliser les tréponèmes restés dans les paricules organiques après ce lavage. Ces particules, placées dans du sérum physiologique et centrifugées, étaient ensuite réparties entre différents sérums humains. Rarement, les tréponèmes étaient nombreux, et dans ce cas ils res-

taient mobiles et isolés dans les milieux non syphilitiques et s'agglutinaien en sérum syphilitique ; mais presque toujours ils étaient trop peu abondant: ou étaient devenus rapidement immobiles.

Nous signalerons que Cagnetto (1) a réussi, par cette méthode, à empècher les bacilles pyocyaniques de s’agglutiner, en les lavant sur bougie Berckfeld. <

Ces expériences n’ont pas été assez fréquentes pour que nous en puissions tirer des conclusions précises ; elles sont du reste minutieuses et hors du domaine de la pratique courante. Mais il semble bien que, si par la dilu. tion on peut diminuer d'autant la quantité d’agglutinines locales et empécher l’auto-agglutination, les tréponèmes se disséminent dans le liquide de dilution, il est impossible de les réunir de nouveau. Cette question appelle de nouvelles recherches. F

$ 4. Évaporation. Dessiccation. — Nous avons fait quelques essais dans le but de savoir si les agglutinines pouvaient résister à la dessiccalion.

Cinq sérums provenant de syphilitiques, dont le pouvoir agglutinani était très élevé, ont été évaporés jusqu’à dessiccation complète, à la trompe à vide, dans l'espace de 4 à 5 heures.

La poudre fine, grisâtre, ainsi obtenue, élait reprise par quelques gouttes de solution de chlorure de sodium physiologique où elle se dissolvait rap dement.

Dans aucun de ces essais nous n'avons pu noter d'agglutination ; le tréponèmes se déformaient aussitôt, devenaient immobiles, déroulés er quelques minutes; la plupart d’entre eux subissaient très rapidement le dégénérescence granuleuse et disparaissaient. Le liquide était loin d’être isotonique.

$ 5. Dialyse. Acrion sur LES sÉRUMS. — Gengou a montré que les aggiuti nines traversent plus facilement le parchemin que l’alexine et les substances bactéricides du sérum normal. Mais ce passage est très faible aussi hier in vitro qu'in vivo pour Nicolle (loc. cit.). Frouin (2) admet que les sensibilisatrices et les agglutinines traversent bien le collodion ; mais si ot sature, auparavant, le sérum avec du chlorure de sodium, les deux propriétés se trouvent dissociées car [a sensibilatrice passe seule dans le filtrat, tandi: que l’agglutinine est retenue dans le sérum. Marbé (1) montre de plus que tandis que Pagglutinine de l'urine ne passe pas à travers le collodion, cell

(1) CAGNETTO, Ann. Igiene sperim. t. XIX (n. s.) f. 2, 1909, pp. 209-247. (2) FRouIN, Soc de Biolog., 1908, t. LXIV, p. 649; t. LXV, pp. 355, 444:1909, t LXVIL p- 814.

du sérum le traverse facilement, et que cette filtration est liée à l'albumine du liquide à filtrer.

En nous basant sur les recherches de Frouin, nous avons soumis à la dyalyse des sérums syphilitiques. Nous avons adopté un dispositif qui répond à peu près à celui de Mayer, Schaeffer et Terroine (2), mais renversé. La dialyse était faite pendant 5 à 15 minutes, sous un vide de 8 à 10 centimètres de mercure.

Les sels et la sérine du sérum passait à l’intérieur du sac de collodion, rempli au préalable d'eau distillée.

Tous les tréponèmes que nous avons ensuite placés soit dans le résidu, soit dans le filtrat ont été immédiatement tués et en grande partie dissous, quelque soin que nous ayons mis à rétablir l’isotonisme des liquides en ajoutant une solution titrée de chlorure de sodium. La grande fragilité du tréponème s'oppose donc, au moins dans ces conditions, à de telles recherches.

Nous avons encore soumis des produits organiques riches en tréponèmes à la dialyse. Parfois nous avons utilisé le dispositif précédent ; mais souvent, pour abréger le temps de la dialyse, nous avons pu exercer une décompression plus forte en fixant le tube de collodion sur une petite bougie Chamberland.

Les recherches d’Andrejew (3) ont montré que des corps tels que le kaolin,la silice, la caséine, le charbon absorbaient fortement les agglutinines et les sensibilisatrices dans la proportion de 30 à 90 p.100 de leur valeur initiale. Cette action ne pouvait, dans nos expériences, que favoriser l’élimination des agglutinines hors des particules organiques.

Ceux-ci étaient donc recueillis en abondance avec un peu de sérosité et dilués dans la quantité de sel physiologique suffisante pour baigner la partie inférieure du sac de collodion. Les résultats n’ont pas été satisfaisants, car les tréponèmes issus de ces particules mises en différents milieux ont tantôt formé des agglutinats dans toutes les lames, comme si rien de la sérosité n'avait filtré, tantôt gardé leur mobilité et leur indépendance (dans ce dernier cas, il s'agissait de préparations où les parasites étaient assez peu nombreux).

B. — Caractères chimiques.

Il n’est loisible de faire agir sur les sérums syphilitiques qu'un bien pelit nombre de substances chimiques. On sait la grande fragilité du tréponème, et soit que ces substances exercent quelque action toxique sur le microbe, soit qu’elles modifient le degré de concentration, d’isotonie du sérum, les

(1) Mare, Soc. de Biologie, 1909, t. LXVIT, p. 809. (2) MAYER, SCHAEFFER et TERROINE, Soc. de Biolog., 1908, t. LXIV, p. 318. LE (3) ANDREJEW, Arb. a. d, kais. Gesundhis., 1910, t. XXXIH, h. L, p: 84; h:2, p. 377.

tréponèmes perdent aussitôt leur mobilité et ne peuvent dès lors s’agglu