EXAMEN DES LIQUIDES. OV

propreté la plus minutieuse, car l'air, l'eau, la poussière, avec lesquels les objets à examiner sont en contact, contiennent des micro-organismes qu'il est essentiel de ne pas confondre avec ceux des maladies. Il faudra, dans ce but, laver les instruments dont on se sert dans de l'alcool pur ou mieux les chauffer jusqu'cà 150 ou 200".

Examen des liquides. — Pour l'examen des sécrétions, pour le pus, le mucus, etc., il est bon de ne pas prendre la couche superficielle, mais bien celle qui est en rapport avec les tissus altérés. On étale ces sécrétions sur une lamelle mince à l'aide d'un fil de platine qu'on a porté préalablement au rouge et laissé refroidir.

On peut mettre tout d'abord la gouttelette du liquide à examiner sur une mince lamelle qu'on renverse ensuite pour la placer sur une lame porte-objet excavée ou sur la chambre humide de Ranvier (1); on entoure le bord de l'excavation de la lame porte-objet avec de la vasehne ou de la paraffine. On étudiera de cette façon les mouvements et certains stades du développement des bactéries : il sera souvent nécessaire, dans ce but, de placer le porte-objet ainsi disposé sur la platine chauffante de Ranvier (2). 11 suffit, dans bien des cas, d'examiner simplement le liquide placé entre la lame et la lamelle.

II est très important d'examiner les éléments des tissus à l'état frais en se servant d'insiruments stérilisés. On stérilise les instruments dont on doit faire usage en les plaçant dans une boîte de fer bien fermée qu'on laisse une demi-heure dans l'étuve à la température de 140». Si l'on veut examiner un organe, comme le foie ou le poumon, on en fait une première coupe avec un couteau chauffé au rouge. On avive cette première section avec un couteau stérilisé, puis on racle la surface de cette seconde section. L'examen du raclage sera fait en partie par le microscope, en partie parles cultures.

Pour prendre du sang d'un individu vivant, on doit au préalable bien laver la peau. Il est bon, alors, pour prendre le sang ou le liquide contenu dans un tissu, de ponctionner avec une seringue de Pravaz, construite de façon à ce qu'elle puisse être, après l'opération, démontée et placée dans l'eau bouillante, ou chauffée dans l'étuve à 150°.

Suivant une méthode indiquée déjà depuis longtemps par Ehrenberg(3) et Obermeier, et généralisée parKoch, une couche très mince de ces liquides est étalée sur des lamelles minces et desséchée rapidement. Pour mieux fixer la substance ainsi étalée, on la passe trois fois dans la flamme d'une

(1) Traité technique d'histologie, p. 'li. (2i Traité technique, p. 41.

(3) Ehrenbcrg, Die Infusionsthierchen, Leipsig, 18-38.

TECHNIQUE HISTOLOGIQUE

lampe à alcool. Les lamelles ainsi préparées sont traitées par les substances colorantes comme les coupes minces des tissus.

Ces lamelles se conservent pendant des mois ou môme des années.

Souvent il suffit de mettre pendant quelques minutes une goutte de la matière colorante d'aniline sur la face de la lamelle recouverte du liquide desséché, de la laver ensuite avec de l'eau distillée stérilisée et de l'examiner immédiatement en la déposant sur la lame de verre porte-objet.

Pour l'examen de beaucoup de micro-organismes, il sera nécessaire de laisser les lamelles pendant une heure ou davantage dans des solutions colorantes. Dans ce but, on remplit aux trois quarts un verre de montre avec le bain colorant et on place les lamelles à la surface du liquide, de manière à ce que la face de la lamelle qui porte le liquide desséché trempe dans le liquide. Après qu'elles auront été ainsi colorées, on lave les lamelles dans l'eau et on les examine dans ce liquide, ou bien on les dessèche et on les examine dans le baume, ou bien on les traite par la série des mêmes réactifs que nous indiquerons à propos des coupes.

Examen des tissus sur les coupes. — Pour examiner les tissus, on en détache un segment avec un couteau chauffé au rouge, on met ce segment dans le microtome à congélation de Jung (de Heidelberg) et on en fait des coupes ; ou bien on durcit un pareil fragment dans l'alcool, ou dans le bichromate de potasse et l'alcool.

Pour les dents et les os, on met des lames assez minces de ces lissus dans le liquide de Kleienberg.

Solution saturée d'acide picrique 100 grammes.

Acide sulfurique ^ 3 —

Filtrez et ajoutez :

Eau 300 —

Cette solution durcit les tissus en les décalcifiant.

Si la pièce à décalcifier a d'abord séjourné dans l'alcool, on en suspend un fragment dans un vase contenant une solution concentrée d'acide picrique, en laissant un excès de cristaux d'acide picrique au fond du vase.

L'action à la fois fixative et durcissante de l'acide osmique est parfois utile pour mettre en évidence certaines bactéries. La méthode de fixation de Flemming est avantageuse pour les cellules et pour certaines bactéries. Elle consiste à mêler l'acide osmique avec l'acide chromique, par exemple, 0.02 d'acide osmique, 0.25 d'acide chromique. 0.04 d'acide acétique et 68 parties d'eau distillée; on y laisse de petits fragments pendant un ou plusieurs jours, après quoi on les place dans l'alcool.