EXAMEN DES TISSUS SUR LES COUPES

Pour obtenir un durcissement avec l'alcool seul, il faut placer un petit fragment de pièce dans une grande quantité d'alcool (1). Si la pièce n'est pas assez durcie, on la met pendant 12 heures dans un mélange à parties égales de solution de gomme sirupeuse et de glycérine, puis dans l'alcool.

Si les tissus contiennent des parties fragiles ou privées d'adhérences solides avec la masse du lissa, comme des couches d'exsudation superficielle, des liquides enfermés dans des abcès ou des kystes, etc., il faut se servir, pour monter les pièces, de substances liquides susceptibles de se coaguler dans les tissus. La substance de Kalberlé, qui consiste dans l'albumine de l'œuf coagulée, n'est pas propre à ces examens, parce que les parties de celle substance qui ont pénétré la préparation se colorent fortement et sont difficiles à distinguer des exsudations des tissus malades.

La celloïdine dissoute dans un mélange d'une partie d'alcool et d'une partie d'éther offre de meilleurs résultats, mais elle a l'inconvénient de simuler par places l'existence de la matière hyaline et de gêner par sa présence la coloration des bacléries. On verse ce liquide dans une pelile boite en papier fort de 2 centimètres cubes environ, o(i l'on dépose le fragment de tissu à examiner, et on place la- petite boîte en papier dans de l'alcool faible qui solidifie la celloïdine. La pièce est coupée ensuite dans le microtome.

Nous recommandons, pour monter les préparations, la paraffine chloroformée qui nous a donné les résultats les plus satisfaisants. Les pièces durcies dans l'alcool absolu sont placées dans la paraffine dissoute par le chloroforme. L'excès de chloroforme s'évapore, et il reste une masse à demi solide qui se conserve pendant plusieurs semaines. Après un séjour d'un jour dans celte masse, la pièce est placée dans de petites boîtes en carton mince qu'on remplit de paraffine. Cette dernière, devenue solide, est montée dans le microtome ; si la pièce était colorée avant d'être montée, on place immédiatement la coupe sur la lame porte-objet et on l'enferme dans le baume mêlé au xylol. Si la coupe n'est pas colorée, il faut la mettre dans l'essence de térébenthine, puis dans l'alcool absolu et ensuite dans la matière colorante. On obtient ainsi de très belles préparations.

Il est bon de faire des coupes aussi grandes que possible. Parfois la mollesse ou la fragilité des tissus, môme après qu'ils ont été durcis par l'alcool, oblige à faire des coupes un peu épaisses; mais en général il vaut mieux avoir des coupes très minces sur lesquelles on verra plus nettement toutes les bactéries et les éléments des tissus.

A mesure qu'on fait marcher le microtome, on transporte les coupes de

(I) Cornil, Instruction sur le mode de comcrvalicn des pièces anatomiques destinées à être examinées au microscope. Société anat. 1884.

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la lame tranchante dans une cupule remplie d'alcool. Il est bon de laisser les coupes dans ce liquide, parce que plus tard, lorsqu'on les portera dans un bain coloré aqueux, elles se déplisseront d'elles-mêmes et s'étaleront dans le liquide où elles doivent se colorer. Il faut toutefois ne pas laisser séjourner longtemps les coupes dans l'alcool, car certains microbes ne pourraient plus se colorer.

Les instruments dont on doit se servir pour transporter les coupes d'un liquide dans un autre, pour les étaler sur les lamelles, seront d'une propreté minutieuse. II faut faire usage d'aiguilles de verre ou de platine lorsqu'on met les coupes dans l'acide nitrique au tiers, et d'une façon générale l'aiguille de verre ou de platine a l'avantage de ne pas s'accrocher aux coupes, parce qu'elle reste toujours très lisse, n'étant pas oxydée. Les spatules dont on use pour transporter les pièces et pour les étaler sur les lames seront en nickel ou en platine.

Les coupes faites à l'aide du microtome à congélation sont moins commodes à traiter ensuite par les réactifs que celles qu'on obtient après durcissement par l'alcool. Elles sont en effet souvent couvertes de bulles d'air, plus altérables par les acides qui les gonflent ou par l'alcool qui les fait se contracter.

Coloration des bactéries. — L'examen des préparations d'un liquide contenant des bactéries nous fournit déjà, ainsi que nous l'avons dit précédemment, des renseignements très importants sur la forme, le nombre, la disposition et les mouvements des bactéries qui y sont contenues. L'étude des coupes dans l'eau additionnée de sel marin ou dans le sérum iodé montre aussi quelquefois des bactéries quand elles sont volumineuses; mais il faut toujours avoir recours aux colorations pour compléter l'analyse, qu'il s'agisse de bactéries isolées dans un liquide ou de coupes de tissus.

Lorsqu'on étudie des bactéries prises dans un bouillon de culture ou dans un liquide pathologique, après avoir enfermé le liquide à examiner entre la lame et la lamelle, on peut essayer de le colorer d'abord simplement en mettant une goutte de solution aqueuse faible de violet de méthyl B entre les deux lames de verre ou sur une lamelle couverte du liquide à moitié desséché et qu'on renverse ensuite sur la lame porte-objet en ayant soin d'enlever le surplus liquide colorant qui déborde la lamelle (Babes). Les bactéries se teignent d'une façon beaucoup plus" intense que le liquide qui les entoure. Cette méthode de coloration des bactéries vivantes est assurément la meilleure pour les étudier à l'état frais et pour mesurer leurs diamètres. Là, en effet, elles ne sont contractées par aucun réactif, et elles paraissent plus volumineuses que dans les préparations durcies par l'alcool ou traitées par la dessiccation. Leurs mouvements