COLORATION DES SPORES

solution très concentrée de méthyl violet B ou de fuchsine (chlorhydrate de rosanilinc de Poirier).

On laisse les lamelles pendant une heure et les coupes pendant vingtquatre heures dans ce bain colorant. Après quoi on lave rapidement dans l'acide azotique dilué par l'eau dans la proportion de 1 à 3 ou 4 ou dans une solution d'alcool au dixième. On emploie dans le même but l'acide acétique cristallisahle ou l'acide chlorhydrique (1 partie d'acide chlorhydrique pour 10 d'alcool). Avant d'immerger la coupe dans un acide, on peut la colorer parle picrocarmin, la safranine, l'éosine, la coccinine, etc., qui colorent en rouge les tissus, les bactéries étant colorées en violet.

On décolore ensuite avec les acides, on traite par l'alcool absolu, l'essence de bergamote ou l'huile de cèdre, et on monte dans le baume. On peut aussi colorer les coupes parles couleurs rouges indiquées, lorsqu'elles ont été décolorées par l'acide. En les sortant du bain d'acide nitrique, on les lave à l'eau distillée, puis on les met pendant une ou deux minutes dans une solution aqueuse d'une de ces couleurs, et on les monte comme précédemment.

Si les coupes ont été d'abord teintées en rouge par la fuchsine d'Ehrlich, on les décolore à l'acide, puis on les passe à l'eau, et on leur donne une seconde coloration par le bleu de méth3'lène, le bleu de quinoléine, ou I hématoxyline. Les bacilles restent alors colorés en rouge et les cellules en bleu ou en violet. Les bacilles de la lèpre se colorent encore mieux par cette méthode que les bacilles de la tuberculose.

Certaines spores de bacilles se colorent ainsi d'une façon très intense, par exemple celles qu'on observe dans les selles.

On colore de même la chitine, l'épiderme corné, les poils, certains tissus mortifiés, et les coccidies (Babes, l. c).

Coloration des spores. — Si l'on suppose que certaines bactéries contiennent des spores, on emploie la solution d'Ehrlich à la fuchsine, en y laissant les pièces pendant plusieurs jours, ou en échauffant le bain. On peut porter la solution jusqu'à l'ébullition pour colorer les lamelles, mais les coupes ne pourraient supporter cette température. On décolore ensuite par l'acide nitrique au quart, puis on colore le fond et les bâtonnets en les laissant quelques minutes dans le bleu de méthylène.

Certaines spores se colorent très facilement par ce procédé, tandis que d'autres, comme celles de la fièvre typhoïde, de la morve, de la tuberculose, se colorent difficilement. Pour avoir de belles préparations de ces dernières, il faut tâtonner et sacrifier plusieurs lamelles pour arriver au degré voulu de coloration et de décoloration.

Si les spores ne supportent pas la décoloration par les acides, on lave

78 TECHNIQUE IIISTOLOGIQUE.

à l'alcool les lamelles colorées, on les passe pendant une seconde dans le bleu de méthylène et on les examine.

Procédé rapide de double coloration des bactéries en général (Berlioz). — On prépare deux solutions :

i" Une solution de 6 centimètres cubes d'huile d'aniline dans 84 cent, cub. d'eau distillée. On fait dissoudre à chaud et on filtre après refroidissement ; on ajoute 2 gr. bO de violet 6 B surfin en solution dans 10 cent, cubes d'alcool à 90° et on filtre ;

2° Une solution composée de coccinine 2 gr. oO, eau distillée 95 cent, cub., alcool à 90", 5 cent. cub. On fait dissoudre et on filtre.

On fait un mélange à parties égales de ces deux solutions et on a ainsi une liqueur qui permet d'oblenir rapidement une double coloration. A cet effet, on met les coupes pendant un quart d'heure au plus dans ce liquide; on les traite ensuite par une solution, soit de carbonate de soude à 0 p. 100, soit d'iodure de potassium iodé à ii p. 100 ; on lave à l'eau et à l'alcool et on les monte dans le baume après avoir déshydr'até par l'alcool absolu et éclairci avec l'essence de girofle. Ce procédé réussit très bien pour les bacilles du charbon, de la diphthérie, etc., et pour les microcoques.

Fuchsine. — La fuchsine, et surtout le chlorhydrate de rosaniline, employés en solution alcoolique concentrée, colorent en une demi-heure la plupart des bactéries, surtout lorsqu'on a fait sécher le liquide qui les contient sur des lamelles. Nous recommandons pour la coloration des liquides desséchés contenant des bactéries de la gonorrhée, de la pneumonie, etc., le procédé suivant : séjour des lamelles pendant cinq minutes dans une solution alcoolique concentrée de fuchsine mêlée avec trois parties d'eau. On lave ensuite dans l'alcool faible ; on dessèche et on monte dansl'huile de cèdre ou dans le baume liquéfié parle xylol. On peut, parce procédé, distinguer les capsules incolores de certaines bactéries. Pour colorer les bacilles en virgule, nous recommandons l'emploi pendant plusieurs heures d'une solution aqueuse concentrée de fuchsine. Avec une solution aqueuse faible de fuchsine et le traitement par l'acide acétique ou nitrique à 1 pour 3, on arrive à colorer rapidement les bacilles de la tuberculose et de la lèpre (1). Après la coloration, on peut colorer le fond de la préparation en vert (vert de malachite), ou en bleu.

Procédé rapide de coloration des bacilles de la tubercidose (Frank'el). — Il consiste à chauffer la liqueur colorante rouge d'Ehrlich, et à décolorer

(1) II faut bien remarquer que les propriétés colorantes des divers échantillons de fuchsine fournis par une môme fabrique sont très dift'érentes. Il on est qui ne colorent pas les bacilles de la tuberculose, môme dans une solution d'Ehrlich.